Deteksi Dini dan Rencana Kontingensi African Swine Fever (ASF)

 

LATAR BELAKANG

African swine fever (ASF) adalah penyakit yang sangat menular yang mempengaruhi babi domestik dan babi liar dari segala usia, menyebabkan kerugian ekonomi dan kesehatan yang sangat besar di negara-negara yang terkena dampak karena tingkat kematian yang tinggi yang diamati dalam bentuk akutnya, infektivitasnya besar melalui pergerakan hewan dan produk hewan, biaya besar untuk pengendalian dan pemberantasan ASF dan pembatasan internasional yang diberlakukan.

 

ASF disebabkan oleh virus dengan struktur kompleks, diklasifikasikan sebagai satu-satunya anggota keluarga Asfaviridae, yang saat ini belum ada pengobatan atau vaksin yang efektif. ASF adalah penyakit nonzoonotik yang dapat dilaporkan. Dalam istilah klinis dan anatomi, bentuk akut dan akut African Swine Fever (karena hanya jenis virus yang sangat virulen yang beredar saat ini, bentuk akut dan perakut adalah jenis yang paling umum) ditandai dengan demam tinggi, kematian yang tinggi pada permulaan penyakit. infeksi, perdarahan pada kulit dan organ dalam (limfa, ginjal, ganglia) dan kerusakan jaringan limfoid.

 

Diagnosis laboratorium sangat penting untuk menegakkan diagnosis yang akurat. Sejumlah besar teknik diagnostik yang sangat sensitif, spesifik dan terbukti sekarang ada yang memungkinkan diagnosis etiologis dan/atau serologis dibuat hanya dalam beberapa jam [1].

 

Saat ini ASF endemik di lebih dari 20 negara Afrika sub-Sahara dan di pulau Sardinia Italia. Pada tahun 2007, wabah dilaporkan di Georgia, mungkin berasal dari Afrika tenggara, karena genotipe virus yang diidentifikasi (tipe II) beredar di daerah itu. Dari Georgia, virus menyebar ke beberapa negara di wilayah Kaukasus dan Federasi Rusia, menciptakan situasi epidemiologis risiko kesehatan yang tinggi.

 

Panel ahli dari European Food Safety Authority (EFSA) baru-baru ini menganalisis situasi epidemiologi ASF saat ini di wilayah Kaukasus dan kemungkinan risiko penyebaran virus ke zona bebas ASF lainnya, termasuk Uni Eropa, serta kemungkinan bahwa zona yang terinfeksi saat ini bisa tetap endemik. Hasil analisis menunjukkan risiko tinggi menyebar ke zona tetangga. Risiko ini akan moderat untuk Uni Eropa, dan risiko zona endemik yang tersisa juga akan moderat [2].

 

Babi biasanya tertular virus African Swine Fever (ASFV) melalui rute oronasal, meskipun rute lain juga mungkin, seperti rute kulit (luka, goresan atau lecet), atau rute intramuskular, subkutan atau intravena, yang disebabkan oleh gigitan babi. kutu lunak dari genus Ornithodoros. Masa inkubasi berkisar antara 3 sampai 21 hari, tergantung pada isolat dan rute paparan. Replikasi primer terjadi di monosit dan makrofag kelenjar getah bening yang paling dekat dengan titik masuk virus.

 

Virus menyebar melalui jalur darah, berhubungan dengan membran eritrosit, dan/atau melalui jalur limfatik. Viremia biasanya dimulai 2-8 hari setelah infeksi dan, karena kurangnya antibodi penetralisir, bertahan untuk waktu yang lama, bahkan berbulan-bulan. Saat ASFV menyebar ke organ yang berbeda, seperti kelenjar getah bening, sumsum tulang, limpa, ginjal, paru-paru dan hati, replikasi sekunder dan lesi hemoragik yang khas terjadi [3].

 

Penyebaran virus dari hewan yang terinfeksi dapat dimulai dari hari kedua pasca infeksi, melalui air liur, kotoran mata dan hidung, dan melalui aerosol. Setelah beberapa hari, virus juga dapat keluar melalui urin, feses, dan air mani.

 

Rute utama penularan adalah:

- kontak antara hewan yang terinfeksi, pulih atau tanpa gejala dan hewan yang rentan;

- konsumsi produk yang terkontaminasi;

- kendaraan pengangkut;

- pakaian dan alas kaki yang terkontaminasi;

- gigitan dari kutu genus Ornithodoros; dan

- peralatan bedah dan/atau tempat perawatan hewan.

 

Penyakit ini ditularkan terutama melalui kontak langsung antara hewan pembawa yang terinfeksi atau pulih dan hewan yang rentan, atau ketika babi diberi makan dengan limbah dari makanan yang disiapkan menggunakan daging segar yang terkontaminasi dari negara-negara endemik yang terinfeksi.

 

Produk olahan komersial (seperti ham atau daging babi yang diawetkan) tidak mengandung virus aktif 140 hari setelah pemrosesan daging segar dimulai. Virus tidak aktif dalam produk yang diberi perlakuan panas. Babi hutan Eropa rentan terhadap infeksi ASFV, menunjukkan tanda-tanda klinis dan kematian yang serupa dengan yang diamati pada babi domestik, meskipun babi hutan cenderung lebih tahan daripada babi domestik. Transmisi aerosol tidak penting dalam penyebaran ASF. Namun, darah babi yang baru terinfeksi mengandung muatan ASFV yang besar: 10 ^5,3 - 10 ^9,3 HAD₅₀ per mililiter [4].

 

Oleh karena itu penyakit ini dapat menyebar luas sebagai akibat dari perkelahian antara babi dengan luka berdarah, adanya diare berdarah atau pelaksanaan pemeriksaan post-mortem. Sepanjang sejarah ASF, bukti epidemiologis telah menunjukkan bahwa sebagian besar wabah yang terjadi di zona bebas ASF terutama disebabkan oleh memindahkan produk sisa makanan dari babi yang terinfeksi ke babi yang rentan.

 

Deteksi dini African Swine Fever Tanpa ragu, deteksi dini penyakit adalah kunci untuk menjaga kesehatan hewan dan merupakan aspek paling kompleks dari surveilans penyakit yang efektif. Kemajuan ilmiah utama yang dicapai dalam beberapa dekade terakhir telah menyebabkan metode diagnostik laboratorium yang tidak hanya sangat sensitif dan spesifik, tetapi juga cepat untuk dilakukan.

 

Memang, sebagian besar laboratorium rujukan nasional dan internasional memiliki teknik untuk menegakkan diagnosis laboratorium yang akurat hanya dalam beberapa jam. Namun, tantangan utama saat ini adalah waktu yang lama untuk mendeteksi penyakit di lapangan, atau setidaknya untuk menduga kemunculannya.

 

Ada kasus di mana penyakit yang sangat terkenal, seperti penyakit mulut dan kuku, demam babi klasik atau lidah biru, telah beredar di sejumlah negara selama beberapa minggu, atau bahkan berbulan-bulan, tanpa ada kecurigaan atau sampel dikirim ke rumah sakit. laboratorium untuk diagnosis banding. Dalam beberapa kasus, ini karena presentasi penyakit yang tidak khas di negara-negara yang belum pernah terinfeksi dan tidak pernah mempertimbangkan kemungkinan terinfeksi. Dalam kasus lain, itu karena penyakit itu terjadi pada spesies hewan yang menunjukkan sedikit gejala klinis, serta karena desain program surveilans yang salah. Memang, berbagai faktor dapat menunda deteksi dini ASF. 

 

Faktor-faktor yang dapat menunda deteksi dini dikelompokkan sebagai berikut:

- Kurangnya kesadaran atau meremehkan risiko pengenalan (probabilitas penyebaran agen).

- Tidak mengenal penyakit, diagnosis banding, dan presentasi klinis dan anatomipatologis.

- Prosedur epidemiologi dan diagnostik yang tidak memadai.

- Kurangnya persiapan peralatan lapangan.

- Pengujian sampel yang tidak sesuai.

- Kesalahan laboratorium.

 

Oleh karena itu sangat penting untuk diingat bahwa diagnosis yang cepat dan efektif bergantung pada pembatasan penyebaran, serta penerapan tindakan yang tepat secepat mungkin, karena faktor-faktor ini sangat penting untuk perkembangan penyakit dan penyelesaian masalah. Penting juga untuk diingat bahwa, untuk membuat diagnosis yang cepat: pertama, penyakit harus dicurigai di lapangan; kedua, sampel yang sesuai harus dikirim ke laboratorium; dan, ketiga, tindakan pengendalian yang benar harus ditetapkan.

 

Oleh karena itu, deteksi dini penyakit akan bergantung pada keseimbangan yang tepat antara surveilans lapangan, sumber daya laboratorium, dan tindakan pengendalian. Untuk memastikan pengawasan lapangan yang baik, prioritas utama adalah membuat dokter hewan dan produsen ternak sadar akan risiko masuknya penyakit tertentu dan pentingnya melaporkan setiap kecurigaan. Oleh karena itu, langkah pertama dan paling penting adalah memberikan informasi dan pelatihan kepada dokter hewan swasta dan resmi serta produsen ternak di zona tersebut tentang risiko yang ada dan karakteristik utama penyakit tersebut. Informasi ini terutama harus memperhatikan rute potensial masuknya penyakit, tanda-tanda klinis dan potensi lesi, dan sampel yang harus dikirim ke laboratorium untuk menegakkan diagnosis yang benar.

 

Sampel yang dipilih untuk dikirim ke laboratorium di mana African Swine Fever dicurigai:

- darah dengan antikoagulan (EDTA);

- serum;

- limpa;

- paru-paru;

- ginjal;

- kelenjar getah bening.

 

Karena berbagai tanda dan lesi klinis yang dapat disebabkan oleh infeksi virus African Swine Fever, dan kesamaannya dengan penyakit perdarahan babi lainnya, diagnosis laboratorium penting untuk ASF.

 

Di zona berrisiko, setiap kematian babi dengan tanda klinis demam berdarah harus diselidiki, mengingat diagnosis banding harus disiapkan dengan penyakit berikut:

- demam babi klasik;

- salmonellosis;

- erisipelas;

- pasteurellosis akut;

- infeksi streptokokus;

- penyakit Aujeszky;

- leptospirosis;

- infeksi circovirus: porcine dermatitis and nephropathy syndrome (PDNS) dan postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS);

- keracunan kumarin.

 

Persyaratan kunci kedua adalah memiliki metode diagnostik laboratorium yang sesuai. Saat ini, sejumlah besar metode tersedia untuk melakukan berbagai jenis diagnosis: virologis (deteksi virus atau protein virus), molekuler (deteksi DNA virus) dan serologis (deteksi antibodi). Manual Tes Diagnostik dan Vaksin untuk Hewan Terestrial merinci prosedur yang harus diikuti [5].

 

DETEKSI VIRUS

Tes Haemadsorbsi (HAD)

HAD adalah teknik yang saat ini hanya digunakan di beberapa laboratorium referensi. HAD membutuhkan waktu antara 3 dan 10 hari untuk menyelesaikannya.

Virus ASF diisolasi dari kultur makrofag babi primer. ASFV mampu menginfeksi dan mereplikasi dirinya secara alami dalam kultur leukosit darah tepi dari babi di mana, selain menghasilkan efek sitopatik pada makrofag yang terinfeksi, juga menyebabkan efek karakteristik haemadsorption (HAD) sebelum sel lisis.  Di bawah mikroskop, tampak seperti roset eritrosit di sekitar leukosit. Teknik haemadsorption masih merupakan metode yang paling sensitif dan spesifik untuk mengidentifikasi ASFV, karena tidak ada virus babi lain yang menghasilkan efek ini. Terlepas dari kenyataan bahwa haemadsorpsi sulit digunakan dan tidak secepat metode diagnostik lainnya (dengan hasil yang memakan waktu 5-10 hari), ini adalah teknik pilihan dibandingkan dengan metode diagnostik lain yang lebih cepat, meskipun penting untuk diingat bahwa beberapa Strain ASFV adalah non-haemadsorbing. Dalam kasus seperti itu, analisis tambahan dari sedimen sel harus dilakukan, menggunakan teknik PCR atau tes antibodi fluoresen untuk mengkonfirmasi keberadaan virus.

 

Fluorescent antibody technique (FAT)

FAT adalah teknik yang direkomendasikan hanya ketika reaksi berantai polimerase tidak tersedia atau ketika tidak ada cukup pengalaman dengan menggunakan PCR. Jangan lupa bahwa hasil negatif harus dikonfirmasi dan direkomendasikan untuk melakukan tes deteksi antibodi secara paralel. FAT membutuhkan waktu 75 menit untuk menyelesaikannya.

Teknik antibodi fluoresen didasarkan pada deteksi antigen virus dengan pewarnaan bagian cryostat atau apusan impresi jaringan dengan imunoglobulin anti-ASFV terkonjugasi fluorescein isothiocyanate (FITC). Ini adalah metode yang sangat sederhana, cepat dan sensitif yang juga dapat digunakan pada kultur sel yang terinfeksi maserat organ atau jaringan dari babi yang dicurigai. Di bawah mikroskop, sel yang terinfeksi menampilkan inklusi sitoplasma yang memancarkan fluoresensi intens. Ketika infeksi sudah lanjut, fluoresensi spesifik dapat tampak granular. Dimana infeksi lebih dari 10 hari dan antibodi telah terbentuk, ini dapat memblokir konjugat dan menghasilkan hasil negatif palsu. Untuk alasan ini, jika FAT adalah teknik yang dipilih, itu harus digunakan secara paralel dengan tes deteksi antibodi (tes antibodi fluoresen tidak langsung, uji imunosorben terkait-enzim atau uji imunoblotting).

 

Polymerase chain reaction (PCR)

PCR saat ini merupakan teknik yang paling umum digunakan untuk diagnosis etiologi tetapi memerlukan pelatihan menyeluruh. PCR membutuhkan waktu 5 hingga 6 jam untuk diselesaikan.

PCR adalah teknik yang sangat sensitif dan spesifik yang mengkonfirmasi keberadaan virus dengan memperkuat DNA virus yang ada dalam sampel. Teknik PCR menggunakan primer dari wilayah genom yang sangat terkonservasi untuk mendeteksi berbagai isolat ASFV yang diketahui, termasuk strain haemadsorbing dan nonhaemadsorbing. Saat ini digunakan oleh laboratorium referensi untuk diagnosis virologi dan konfirmasi ASF. Ini dapat digunakan baik dalam sampel jaringan maupun sampel serum dari hewan dengan tanda-tanda klinis, karena menghasilkan viremia yang berkepanjangan. Oleh karena itu, teknik PCR dapat digunakan untuk mendeteksi virus dalam darah mulai dari hari kedua infeksi hingga beberapa minggu.

 

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

ELISA tidak digunakan secara rutin. Dibutuhkan 3 jam untuk menyelesaikannya.

Teknik seperti sandwich ELISA atau immunodot blot juga telah diadaptasi untuk ASF, tetapi kurang umum digunakan karena, meskipun sangat sensitif pada fase awal infeksi, sensitivitas ini berkurang secara drastis pada 9-10 hari pasca infeksi, seperti mereka mungkin diblokir oleh antibodi, seperti yang dijelaskan sebelumnya dalam kaitannya dengan FAT.

 

DETEKSI ANTIBODI

Immunoflorescence Assay (IFA)

IFA sedikit digunakan saat ini. Tidak ada reagen komersial. Dibutuhkan 2 jam untuk menyelesaikannya.

IFA adalah teknik cepat dengan sensitivitas dan spesifisitas yang baik, di mana antibodi spesifik yang ada dalam serum atau eksudat dibuat untuk bereaksi pada tikar sel yang terinfeksi virus ASF. Reaksi ditampilkan dengan menambahkan protein iodinasi A atau antibodi anti-IgG babi berlabel fluorescein kedua. Di mana sampel positif hadir pada tikar sel, fluoresensi muncul pada titik-titik tertentu yang dekat dengan nukleus, yang merupakan pusat replikasi ASFV.

 

ELISA

ELISA saat ini merupakan teknik yang paling umum digunakan, di mana kit diagnostik komersial juga tersedia. Dibutuhkan 2 jam untuk menyelesaikannya.

ELISA adalah metodologi yang digunakan untuk melakukan studi epizootiologi dan kontrol skala besar. Teknik ELISA yang saat ini digunakan menggunakan antigen terlarut yang mengandung sebagian besar protein virus ASF. Metode ini sangat sensitif dan spesifik, serta cepat, mudah dan murah. Baru-baru ini, ELISA baru telah dikembangkan dengan reagen noninfeksius, menggunakan protein rekombinan p32, p54 dan pp62 sebagai antigen virus. ELISA ini sama atau lebih sensitif dan spesifik daripada teknik saat ini untuk menganalisis serum yang kurang terkonservasi.

 

Tes imunoblotting

Tidak ada kit diagnostik komersial yang tersedia dan reagen diproduksi di beberapa Laboratorium Referensi Uni Eropa dan OIE. Immunoblotting adalah teknik yang sangat baik untuk konfirmasi serologis dalam kasus keraguan. Dibutuhkan 3 jam untuk menyelesaikannya

Imunoblotting adalah teknik imunoenzimatik dimana protein virus ASF ditransfer ke filter nitroselulosa yang berfungsi sebagai: strip antigen di mana serum tersangka dibuat untuk bereaksi, menggunakan protein A-peroksidase untuk mendeteksi antibodi spesifik. Teknik imunoblotting digunakan untuk menentukan reaktivitas antibodi yang ada dalam serum terhadap protein berbeda yang diinduksi secara spesifik oleh virus African Swine Fever. Karakteristik ini, bersama dengan sensitivitas dan objektivitasnya yang tinggi, menjadikan imunoblotting sebagai teknik diagnosis serologis yang ideal untuk mengkonfirmasi ASF.

 

Bagaimanapun, tes paralel harus selalu dilakukan untuk mendeteksi virus dan antibodi. Virus ASF sangat antigenik dan menghasilkan sejumlah besar antibodi non-penetral yang dapat dideteksi antara 7 dan 10 hari pasca infeksi dan dapat bertahan selama berbulan-bulan. Selain itu, karena tidak ada vaksin, keberadaan antibodi selalu merupakan tanda infeksi. Terakhir, penting untuk diingat bahwa ketika teknik seperti tes antibodi fluoresen atau ELISA langsung digunakan untuk mendeteksi antigen virus, keberadaan antibodi hewan dapat memblokir penyatuan konjugat dan menghasilkan hasil negatif palsu. Lebih lanjut, menggunakan kombinasi metode untuk mendeteksi antigen dan antibodi memberikan petunjuk tentang lamanya infeksi karena, ketika antigen tetapi tidak ada antibodi yang terdeteksi, hal itu dapat mengindikasikan infeksi awal yang berumur kurang dari 10-12 hari. Identifikasi antibodi juga dapat mengidentifikasi hewan pembawa, yang umum terjadi pada infeksi ASF yang sudah berlangsung lama.

 

RENCANA KONTINGENSI

Rencana kontinjensi sangat penting dan harus disiapkan sebelum wabah apa pun. Oleh karena itu, semua negara harus memiliki rencana darurat untuk African Swine Fever, khususnya negara-negara yang saat ini memiliki risiko terbesar.

 

Rencana kontinjensi untuk pengendalian ASF mencakup pemusnahan dan pembuangan semua hewan yang terinfeksi, tersangka, dan kontak. Untuk alasan ini, dana darurat yang didukung secara hukum untuk memberi kompensasi kepada produsen atas pembantaian babi mereka merupakan tindakan pengendalian yang penting untuk mendorong pemberitahuan dan menjamin keberhasilan program pengendalian.

 

Rencana kontinjensi harus memasukkan manual tertulis yang jelas yang mencakup semua tindakan yang harus diambil dari saat kecurigaan sampai akhir wabah.

Rencana kontinjensi harus disesuaikan dengan kondisi epidemiologis, sanitasi, produksi dan infrastruktur masing-masing negara dan tentu saja harus sesuai dengan standar dan rekomendasi OIE saat ini.

 

Rencana kontinjensi harus mencakup setidaknya tiga bagian umum yang memberikan informasi sebanyak mungkin tentang aspek-aspek berikut:

i. Struktur administratif di zona atau negara: Layanan Kedokteran Hewan, laboratorium diagnostik, undang-undang saat ini.

ii. Struktur produksi ternak: sensus, jumlah perusahaan dan lokasinya, pergerakan, populasi liar, dll.

iii. Karakteristik penyakit: lembar fakta teknis, faktor risiko, hewan dan/atau vektor yang rentan, perjalanan dan lesi klinis, rute masuk dan penyebaran, masa inkubasi, sampel yang akan dikirim ke laboratorium, metode diagnostik, desinfektan yang akan digunakan, dll.

 

Informasi yang lebih spesifik juga harus diberikan tentang tindakan yang akan diambil di zona dengan dugaan atau konfirmasi wabah, yang harus mencakup setidaknya data berikut:

- sistem notifikasi, pemeriksaan penetapan tersangka (pengamatan klinis dan epidemiologis), pengiriman sampel ke laboratorium; - zonasi area yang terkena dampak;

- larangan pergerakan hewan di zona tersebut, tindakan di tempat yang berdekatan, kontrol pergerakan, pengawasan epidemiologis;

- konfirmasi laboratorium;

- metode penyembelihan hewan;

- prosedur pemusnahan bangkai;

- depopulasi;

- pembersihan dan desinfeksi bangunan dan kendaraan pengangkut;

- kontrol serologis di zona dan zona yang berdekatan untuk memastikan kemungkinan penyebaran wabah;

- studi babi hutan dan/atau vektor; - penggunaan hewan penjaga untuk memastikan bahwa virus telah dieliminasi dari tempat yang terkena dampak yang menjadi sasaran pembersihan;

- repopulasi.

 

Disarankan juga untuk menyusun manual praktis yang merinci tindakan yang dijelaskan di atas, yang akan diringkas di bawah judul berikut:

 - Tindakan yang harus diambil setelah adanya kecurigaan yang dilaporkan.

- Inspeksi tempat tersangka, tindakan biosekuriti konkret yang akan diambil di tempat tersangka dan tempat berdekatan.

- Pemeriksaan klinis dan anatomis.

Apa yang perlu dilakukan dan diperhatikan:

- Pengambilan sampel dan pengiriman ke laboratorium, disertai informasi sumber sampel. Jenis sampel yang akan dikumpulkan; laboratorium yang berwenang untuk mendiagnosis ASF.

- Model survei epidemiologi (pertanyaan konkret tentang masuknya hewan, air mani, pengunjung), serta catatan dan tanggal pergerakan masuk dan keluar dari tempat tersebut.

- Rincian spesifik dari metode penyembelihan yang harus digunakan.

- Prosedur pembuangan bangkai.

- Metode pembersihan dan desinfeksi.

- Zonasi: definisi zona fokus, zona perifokal, zona penyangga, dan zona pengambilan sampel (kontrol serologis).

- Deteksi vektor dan metode penangkapan kutu.

- Kriteria penggunaan hewan sentinel.

 

DAFTAR PUSTAKA

[1] Arias M., Sánchez-Vizcaíno J.M. (2002).– African swine fever. In: Trends in emerging viral infections of swine. A. Morilla, K.J. Yoon & J.J. Zimmerman (eds).119–124. Ames, IA: Iowa State Press. ISBN: 978-0- 8138-0383-8

[2] EFSA. European Food Safety Authority. 2010. – Scientific opinion on African Swine Fever. EFSA Journal 2010; 8(3):1556 [149 pp.]. doi:10.2903/j.efsa.2010.1556. www.efsa.europa.eu

[3] Sánchez-Vizcaíno J.M. (2006).– African swine fever. In: Diseases of swine. 9th edition. pp 291-298. Ed. B. Straw, S. D’Allaire, W. Mengeling, D. Taylor. Iowa State University. USA. ISBN 10-0-8138-1703-X

[4] McVicar J.W. (1984).– Quantitative aspects of transmission of African swine fever virus. Am J Vet Res 45:1535-1541.

[5] OIE (World Organisation for Animal Health) (2008).– Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, 6th edition. OIE, Paris.

 

SUMBER:

José Manuel Sánchez-Vizcaíno. 2010. Early detection and contingency plans for african swine fever. https://www.oie.int/doc/ged/D11831.PDF. Conf. OIE 2010, 139-147