Kandidat Vaksin BBIBP-CorV Cegah COVID-19

Pengembangan Kandidat Vaksin Inaktif BBIBP-CorV Yang Berpotensi Mencegah Infeksi SARS-CoV-2

 

LATAR BELAKANG

Penyakit Coronavirus 2019 (COVID-19), yang disebabkan oleh sindrom pernafasan akut parah coronavirus 2 (SARS-CoV-2), baru-baru ini muncul di seluruh dunia, mengakibatkan 5,2 juta infeksi dan lebih dari 337 ribu kematian di seluruh dunia pada Mei 2020 seperti yang dilaporan oleh WHO (https://covid19.who.int/) dan para peneliti Chan et al., 2020, Chen et al., 2020, Li et al., 2020, Wang et al., 2020, dan Zhu et al. al., 2020. SARS-CoV-2 adalah anggota dari genus Betacoronavirus, terkait erat dengan severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) dan beberapa virus korona kelelawar (Lu et al., 2020, Tan et al., 2020, Zhou et al. , 2020). Dibandingkan dengan severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) dan middle east respiratory coronavirus (MERS-CoV), SARS-CoV-2 tampaknya mengalami penularan yang lebih cepat (Chan et al., 2020, Chen et al., 2020), yang mengarah pada permintaan vaksin yang mendesak. Sampai saat ini, tiga kandidat vaksin (termasuk vaksin yang tidak aktif, vaksin vektor adenovirus, dan vaksin DNA) dilaporkan melindungi kera rhesus dari SARS-CoV-2 dengan kemanjuran yang berbeda (Gao et al., 2020, Lurie et al. , 2020, van Doremalen et al., 2020, Yu et al., 2020a). Vaksin inaktif banyak digunakan untuk pencegahan penyakit menular yang baru muncul (Stern, 2020), dan kecepatan pengembangan vaksin jenis ini yang relatif tinggi menjadikannya strategi yang menjanjikan untuk pengembangan vaksin COVID-19. Perlu dicatat bahwa bukti yang muncul telah menunjukkan peningkatan ketergantungan antibodi atau antibody-dependent enhancement (ADE) pada infeksi SARS-CoV (Wang et al., 2016, Yang et al., 2005), yang menunjukkan bahwa perhatian khusus harus diberikan pada evaluasi keamanan di pengembangan vaksin melawan virus corona.

Di sini disampaikan hasil penelitian Hui Wang at al. (2020) yang melaporkan produksi skala percontohan dari kandidat vaksin SARS-CoV-2 inaktif (BBIBP-CorV) yang menginduksi titer antibodi penawar tingkat tinggi pada tikus, tikus, marmut, kelinci, dan primata bukan manusia (monyet cynomolgus dan kera Makaka rhesus) untuk memberikan perlindungan terhadap SARS-CoV-2. Imunisasi dua dosis menggunakan 2 μg / dosis BBIBP-CorV memberikan perlindungan yang sangat efisien terhadap tantangan virus SARS-CoV-2 secara intratrakeal pada kera Makaka rhesus, tanpa peningkatan infeksi yang bergantung pada antibodi yang terdeteksi. Selain itu, BBIBP-CorV menunjukkan produktivitas yang efisien dan stabilitas genetik yang baik untuk pembuatan vaksin. Hasil studi kandidat vaksin SARS-CoV-2 inaktif (BBIBP-CorV) ini mendukung untuk dilakukan evaluasi lebih lanjut dari BBIBP-CorV dalam uji klinis.

DESAIN DAN PRODUKSI VAKSIN

Hui Wang et al. (2020) telah mengisolasi tiga strain SARS-CoV-2 dari sampel usapan tenggorokan dari tiga pasien yang dirawat di rumah sakit dari wabah COVID-19 baru-baru ini untuk: (a) mengembangkan uji netralisasi in vitro praklinis dan (b) mengembangkan model tantangan untuk kandidat vaksin SARS-CoV-2 inaktif (Lu et al., 2020, Zhu et al., 2020).  Ketiga strain tersebut adalah 19nCoV-CDC-Tan-HB02 (HB02), 19nCoV-CDC-Tan-Strain03 (CQ01), dan 19nCoV-CDC-Tan-Strain04 (QD01), yang tersebar di pohon filogenetik yang dibangun dari semua urutan yang tersedia, menunjukkan cakupan populasi SARS-CoV-2 utama. Khususnya, semua strain ini diisolasi dari sel Vero, yang telah disertifikasi oleh WHO untuk produksi vaksin. Sel Vero, tetapi tidak pada garis sel lain, terinfeksi melalui usap tenggorokan pasien untuk mencegah kemungkinan mutasi selama kultur dan isolasi virus.

Isolat SARS-CoV-2 yang digunakan dalam penelitian ini diberi label. Strain virus diisolasi dari pasien yang terinfeksi yang melakukan perjalanan dari benua / area yang ditunjukkan.

Proliferasi yang sangat efisien dan stabilitas genetik yang tinggi adalah ciri-ciri utama untuk pengembangan vaksin yang tidak aktif.  Hui Wang dkk, 2020 pertama kali menemukan bahwa galur HB02 menunjukkan replikasi paling optimal dan menghasilkan hasil virus tertinggi dalam sel Vero di antara tiga galur virus. Oleh karena itu kami memilih strain HB02 untuk pengembangan lebih lanjut dari vaksin SARS-CoV-2 yang tidak aktif (BBIBP-CorV). Perbandingan sekuens seluruh genom dari galur HB02 dan galur SARS-CoV-2 lainnya dari sumber domestik dan internasional menunjukkan bahwa galur HB02 homolog dengan galur virus lain dan menunjukkan bahwa antigen pelindung utama (protein lonjakan) memiliki 100 % homologi, menunjukkan potensi perlindungan luas terhadap berbagai strain SARS-CoV-2.

Netralisasi Strain SARS-CoV-2 HB02, CQ01, dan QD01 dengan menggunakan sera mencit yang divaksinasi dengan BBIBP-CorV.  Mencit diinjeksi secara intraperitoneal dengan 8 μg / dosis BBIBP-CorV sekaligus, dan diuji kemampuan serumnya untuk menetralkan tiga strain SARS-CoV-2 (n = 5) 14 hari setelah inokulasi.

Parameter Biokimia Serum pada Kera Rhesus setelah Vaksinasi dan Tantangan dengan Virus Hidup

Kera Makaka rhesus diimunisasi dua kali secara intramuskuler pada hari ke 0 dan 14, dan dilakukan uji tantang dengan virus hidup pada hari ke 24. Darah dikumpulkan, dan parameter biokimia serum dipantau pada titik waktu yang berbeda. Glu (glukosa), T-Bil (bilirubin total), ALT (alanine aminotransferase), AST (aspartate aminotransferase), ALP (alkaline phosphatase), γ-GT (γ-glutamyl transpeptidase), TP (protein total), Alb (albumin), TG (trigliserida), TC (kolesterol total), CREA (kreatinin), UA (asam urat), UREA (urea darah), CK (kreatin kinase), LDH (laktat dehidrogenase).

Untuk mendapatkan stok virus yang disesuaikan untuk produktivitas tinggi, strain HB02 dimurnikan dan diinululasikan ke dalam sel Vero untuk menghasilkan stok P1.  Stok P1 dikultur secara adaptif, dipasase, dan diperbanyak pada sel Vero. Strain setelah adaptasi selama tujuh generasi (BJ-P-0207) digunakan sebagai benih asli (BJ-P1) untuk meproduksi vaksin.  Untuk mengevaluasi stabilitas genetik, tiga bagian lagi dilakukan untuk mendapatkan stok P10.  Kemudian diurutkan seluruh genom strain HB02 dan stok P10 dengan analisis sekuensing mendalam, dan hasilnya menunjukkan bahwa homologi sekuensnya lebih dari 99,95%. Lebih lanjut, tidak ada variasi asam amino yang ditemukan dalam sekuens lengkap, termasuk posisi di dekat lokasi pembelahan furin, dalam stok P10. Hasil ini menunjukkan stabilitas genetik yang tinggi dari strain HB02, yang bermanfaat untuk perkembangan selanjutnya.

Untuk pembuatan yang sangat efisien, telah ditetapkan strategi untuk produksi stok BBIBP-CorV berdasarkan carrier (pembawa) baru dalam tabung reaktor.  Analisis kinetik pertumbuhan stok P7 dalam sel Vero menunjukkan bahwa virus stok dapat bereplikasi secara efisien dan mencapai titer puncak lebih dari 7,0 log10 CCID50 dalam 48-72 jam pasca infeksi atau hour post-infection (hpi) pada multiplikasi infeksi atau multiplicities of infection (MOI) 0,01-0,3. Untuk menonaktifkan produksi virus, β-propionolakton dicampur secara menyeluruh dengan larutan virus yang dipanen dengan perbandingan 1: 4.000 pada 2 °C - 8 °C. Inaktivasi tiga batch virus menghilangkan infektivitas virus, memvalidasi stabilitas yang baik, dan pengulangan proses inaktivasi.  Pada analisis Western blot menunjukkan bahwa stok vaksin mengandung protein struktural virus (antigen pelindung).

IMMUNOGENISITAS BBIBP-CorV

Untuk menilai imunogenisitas BBIBP-CorV, mencit BALB / c disuntik dengan program imunisasi yang berbeda dan berbagai dosis (2, 4, atau 8 μg / dosis) vaksin yang dicampur dengan bahan adjuvan aluminium hidroksida. Pada kelompok imunisasi satu dosis, tikus diberikan secara intraperitoneal dosis tinggi (8 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), atau rendah (2 μg / dosis) dosis BBIBP-CorV pada hari 0 (D0), dan tingkat antibodi netralisasi (NAb) pada 7, 14, 21, dan 28 hari setelah injeksi dievaluasi. Hasil penelitiannya menunjukkan bahwa tingkat serokonversi pada kelompok dosis tinggi, menengah, dan rendah mencapai 100% pada 7 hari setelah imunisasi, dan efek imunisasi tergantung pada waktu. Kadar NAb pada hari ke-7, 14, dan 21 pada kelompok dosis rendah dan sedang menunjukkan variasi yang signifikan, sedangkan tidak ada variasi yang signifikan antara 21 dan 28 hari yang diamati. Pada kelompok dosis tinggi, variasi yang signifikan hanya diamati antara 7 dan 14 hari.

Imunisasi BBIBP-CorV Menghasilkan Respons Antibodi yang Menetralkan pada Hewan Berbeda dengan Dosis dan Program Imunisasi Berbeda

Titer antibodi netralisasi mencit atau neutralization antibody (NAb) dengan imunisasi satu dosis (D0). Mencit diinjeksi secara intraperitoneal dengan dosis tinggi (8 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), atau rendah (2 μg / dosis) vaksin, dan kadar NAb pada 7 hari, 14 hari, 21 hari, dan 28 hari. setelah imunisasi pertama diuji dengan metode mikrotitrasi (n = 10).

Titer NAb dengan program interval imunisasi yang berbeda melalui imunisasi dua dosis. Mencit diinjeksi secara intraperitoneal dengan imunisasi dua kali (D0 / D7; D0 / D14; D0 / D21), dan kadar NAb 7 hari setelah imunisasi kedua diuji dengan metode mikrotitrasi (n = 10).

Titer antibodi netralisasi mencit dengan imunisasi tiga dosis (D0 / D7 / D14). Mencit diinokulasi secara intraperitoneal dengan dosis vaksin tinggi (8 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), atau rendah (2 μg / dosis) pada hari ke 0, 7, dan 14, dan kadar NAb pada 7, 14, 21, dan 28 hari setelah imunisasi pertama diuji dengan metode mikrotitrasi (n = 10).

Tingkat antibodi netralisasi mencit dengan program imunisasi yang berbeda. Mencit diinjeksi secara intraperitoneal dengan dosis tinggi (8 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), atau rendah (2 μg / dosis) vaksin dengan menggunakan satu dosis (D0), dua dosis (D0 / D21), dan program imunisasi tiga dosis (D0 / D7 / D14), dan kadar NAb pada 28 hari setelah imunisasi pertama diperiksa dengan metode mikrotitrasi (n = 10).

Kelinci (n = 5), marmot (n = 10), tikus (n = 10), dan mencit (n = 10) diimunisasi dengan dosis tinggi (8 μg / dosis), dosis sedang (4 μg / dosis) , atau dosis rendah (2 μg / dosis) vaksin dengan imunisasi satu dosis (D0), dan kadar NAb pada 21 hari setelah imunisasi pertama diuji dengan metode mikrotitrasi.

Monyet Cynomolgus (n = 10), kelinci (n = 5), marmot (n = 10), tikus (n = 10), dan mencit (n = 10) diimunisasi dengan tinggi (8 μg / tidak) , vaksin dosis menengah (4 μg / dosis), dan rendah (2 μg / dosis) dengan imunisasi tiga dosis (D0 / D7 / D14), dan kadar NAb pada 21 hari setelah imunisasi pertama diuji dengan metode mikrotitrasi.

Pada kelompok imunisasi dua dosis, dilakukan program imunisasi yang berbeda (interval D0 / D7, D0 / D14, dan D0 / D21) di mana dua imunisasi masing-masing pada hari 0/7, hari 0/14, dan hari 0/21.  Seropositif kelompok dosis tinggi, sedang, dan rendah dari ketiga program imunisasi mencapai 100% pada 7 hari setelah imunisasi kedua.  Imunogenisitas program imunisasi dua dosis secara signifikan lebih tinggi daripada program imunisasi satu dosis pada kelompok dosis tinggi dan menengah. Selain itu, penggunaan interval D0 / D21 memperoleh kadar NAb tertinggi pada 7 hari setelah imunisasi kedua.

Pengujian imunogenisitas dari program imunisasi tiga dosis, di mana tikus diberikan secara intraperitoneal dosis tinggi (8 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), atau rendah (2 μg / dosis) vaksin pada hari ke 0 , 7, dan 14. Kadar NAb untuk semua kelompok ditentukan pada hari ke 7, 14, 21, dan 28, dan tingkat serokonversi pada ketiga kelompok mencapai 100% pada hari ke 7 setelah imunisasi pertama (Gambar 2C; Tabel S1). Hasil penelitian menunjukkan bahwa program imunisasi tiga dosis (D0 / D7 / D14) menghasilkan kadar NAb yang lebih tinggi daripada program satu dosis (D0) pada ketiga kelompok pada hari ke 28. Selain itu, telah dianalisis kadar NAb pada tikus dengan vaksin dosis tinggi, sedang, dan rendah setelah program imunisasi satu dosis (D0), dua dosis (D0 / D21), dan tiga dosis (D0 / D7 / D14). dan memeriksa kadar NAb pada 28 hari setelah imunisasi pertama untuk mempertahankan titik awal dan akhir yang sama. Hasil penelitian menunjukkan bahwa imunogenisitas program imunisasi tiga dosis (D0 / D7 / D14) lebih tinggi dibandingkan dengan program imunisasi satu dan dua dosis.

Selanjutnya dilakukan pengukuran imunogenisitas BBIBP-CorV pada model hewan yang berbeda: kelinci, marmut, tikus, dan mencit. Hewan diimunisasi dengan vaksin dosis tinggi (8 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), atau rendah (2 μg / dosis) dengan program imunisasi satu dosis (D0), dan kadar NAb ditentukan pada 21 hari setelah imunisasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa BBIBP-CorV memiliki imunogenisitas yang baik, dan angka serokonversi mencapai 100% pada hari ke 21 setelah imunisasi pada semua model hewan. Pada kelompok imunisasi tiga dosis (D0 / D7 / D14), monyet cynomolgus, kelinci, marmot, tikus, dan mencit diimunisasi dengan tinggi (8 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), atau rendah (2 μg / dosis) dosis vaksin. Angka serokonversi mencapai 100% pada 21 hari setelah imunisasi pada semua model hewan, dan kadar NAb pada 21 hari setelah imunisasi pertama menunjukkan bahwa imunogenisitas program tiga dosis (D0 / D7 / D14) dengan tinggi, sedang, dan dosis rendah lebih tinggi dari pada program satu dosis (D0) pada model kelinci dan marmot.

PERLINDUNGAN PADA HEWAN MODEL PRIMATA BUKAN MANUSIA 

Studi terbaru menunjukkan bahwa kera rhesus yang terinfeksi SARS-CoV-2 mengembangkan infiltrat paru dan lesi histologis (Munster et al., 2020, Shan et al., 2020, Yu et al., 2020b).

Hui Wang et el. (2020) dalam penelitiannya mengevaluasi imunogenisitas dan kemanjuran perlindungan dari BBIBP-CorV pada kera rhesus.  Semua kera diimunisasi dua kali pada hari 0 (D0) dan 14 (D14). Kelompok plasebo diberikan garam fisiologis intramuskular, dan dua kelompok eksperimen disuntik secara intramuskular dengan dosis rendah (2 μg / dosis) atau dosis tinggi (8 μg / dosis) BBIBP-CorV (Gambar 3A). Sebelum tantangan virus pada D24, titer rata-rata geometrik NAb pada kelompok dosis rendah dan dosis tinggi masing-masing mencapai 215 dan 256. Pada D24 (10 hari setelah imunisasi kedua), semua kera ditantang secara intratracheal dengan l0⁶ TCID₅₀ SARS-CoV-2 per monyet dengan anestesi. Suhu tubuh dari kelompok yang divaksinasi dan kelompok plasebo berfluktuasi dalam kisaran normal setelah tantangan virus dari 0 sampai 7 hari postinokulasi (dpi). Selain itu, parameter biokimia serum pada kera rhesus setelah divaksinasi dan ditantang dengan virus hidup tetap konstan. Karena penelitian terbaru menunjukkan bahwa infeksi SARS-CoV-2 tidak mempengaruhi kimiawi darah inang /host (Munster et al., 2020), hasil ini menunjukkan bahwa inokulasi dengan BBIBP-CorV tidak mengakibatkan efek samping pada parameter biokimia serum.

Imunogenisitas dan Khasiat Perlindungan BBIBP-CorV pada Primata Bukan Manusia

Strategi eksperimental.

Kera diimunisasi dua kali dengan 2 μg / dosis (n = 4) atau 8 μg / dosis (n = 4) dari BBIBP-CorV atau plasebo (n = 2). Titer NAb diukur.

Pada efikasi perlindungan dari BBIBP-CorV ditantang dengan SARS-CoV-2 pada 10 hari setelah imunisasi kedua dievaluasi pada kera. Perubahan tanda klinis (suhu, ^oC) dicatat. Ditemukannya virus pada usap tenggorokan dan anal yang diperoleh dari kera pada hari ke 3, 5, dan 7 pasca inokulasi.

Ditemukannya virus dalam ketujuh lobus paru yang dikumpulkan dari semua kera pada hari ke 7 pasca inokulasi ditentukan dengan menggunakan metoda RT-PCR. Semua data disajikan sebagai rata-rata ± SEM dari empat percobaan independen untuk kelompok BBIBP-CorV dan dua percobaan independen untuk kelompok placebo..

Ktika diamati perubahan histopatologi paru-paru kera pada hari ke 7 pasca inokulasi, semua kera yang mendapat vaksinasi menunjukkan paru normal dengan pneumonia interstisial ringan fokal pada beberapa lobus.

Data Individu untuk Suhu, Ditemukannya virus, dan Berat Badan Hewan dalam Evaluasi Khasiat dan Keamanan

Dilakukan pengumpulan data suhu individu, adanya virus dalam tenggorokan dan usap dubur yang digunakan dalam evaluasi efikasi primata bukan manusia. Berat badan individu tikus (n = 5) dan monyet cynomolgus (n = 10) dalam evaluasi keamanan.

Hui Wang et al. (2020) selanjutnya menguji adanya virus di tenggorokan dan sampel dari dubur kera dengan menggunakan RT-PCR.  Semua kera plasebo menunjukkan dan mempertahankan adanya virus yang tinggi selama seluruh periode evaluasi setelah tantangan virus pada sampel usapan tenggorokan dan dubur. Sebaliknya, adanya virus di usapan tenggorokan dari kelompok dosis rendah memuncak (5,33 log10 salinan / mL) pada 5 dpi dan kemudian menurun menjadi 1,12 log10 salinan / mL pada 7 dpi, yang secara signifikan lebih rendah dibandingkan kelompok plasebo. Secara khusus, di antara empat kera dalam kelompok dosis rendah, tiga menunjukkan tidak terdeteksi adanya virus pada 7 dpi. Usap tenggorokan dari keempat kera dalam kelompok dosis tinggi tidak terdeteksi adanya virus. Lebih lanjut, tidak terdeteksi adanya virus pada usapan dubur dari dua (dari empat) kera dalam kelompok dosis tinggi.

Pada 7 dpi, semua hewan disuntik mati untuk menentukan adanya virus pada jaringan paru dan untuk pemeriksaan patologis. Tidak ada kera dalam kelompok dosis rendah dan dosis tinggi adanya virus pada lobus paru, yang berbeda signifikan dengan hasil pada kelompok plasebo. Pada kelompok plasebo, terdeteksi adanya virus yang tinggi di paru kiri bawah, paru kanan bawah, dan paru aksesori kanan, dan hasil analisis histologi patologis menunjukkan adanya pneumonia interstisial yang parah. Yang perlu diperhatikan, hanya 3 dari 7 bagian lobus paru yang terdeteksi mengalami infeksi pada kelompok plasebo, kemungkinan karena infeksi virus pada lobus paru berubah secara dinamis.  Lebih lanjut, semua kera yang mendapat vaksinasi menunjukkan paru-paru normal dengan perubahan histopatologi fokal ringan pada beberapa lobus, yang menunjukkan vaksinasi BBIBP-CorV secara efisien dapat memblokir infeksi penyakit SARS-CoV-2 dan COVID-19 pada monyet. Pada 7 dpi, kera yang ditretmen dengan plasebo menghasilkan titer antibodi netralisasi tingkat rendah dengan titer 1:16, sedangkan kadar NAb kera yang divaksinasi paling tinggi pada 1: 2.048 (rata-rata 1: 860) pada kelompok dosis tinggi dan 1 : 1.024 pada kelompok dosis rendah (rata-rata 1: 512).  Secara keseluruhan, semua hasil ini menunjukkan bahwa BBIBP-CorV dosis rendah dan dosis tinggi memberikan perlindungan yang sangat efisien terhadap SARS-CoV-2 pada kera tanpa terlihat terjadi peningkatan infeksi yang bergantung pada antibodi.

UJI KEAMANAN

Pertama dilakukan percobaan injeksi intramuskular tunggal pada tikus Sprague-Dawley untuk mengevaluasi toksisitas akut BBIBP-CorV. Dalam penelitian ini, 20 ekor tikus dibagi menjadi dua kelompok (n = 10, 5 / jenis kelamin) dan diinjeksi secara intramuskular dengan BBIBP-CorV dosis 3x (8 μg / dosis, 24 μg / tikus) dan larutan garam fisiologis sebagai kontrol. Setelah inokulasi, semua tikus diamati secara kontinyu selama 14 hari dan dilakukan eutanasia pada hari ke 15 untuk menilai anatomi sistematik dan untuk pengamatan umum. Tidak ada kasus kematian atau kematian yang akan datang atau tanda-tanda klinis yang jelas terlihat pada empat kelompok selama 14 hari berturut-turut setelah inokulasi vaksin. Selain itu, tidak ada perbedaan yang signifikan dalam berat badan atau keadaan makan antara kelompok eksperimen dan kelompok kontrol. Tidak ada perubahan histopatologi yang diamati setelah eutanasia. Khususnya, dosis maksimum yang dapat ditoleransi atau maximum tolerated dose (MTD) yang digunakan untuk injeksi intramuskular tunggal pada tikus adalah 24 μg / tikus, yang setara dengan 900 kali dosis pada manusia, menunjukkan potensi keamanan yang baik dari BBIBP-CorV pada manusia.

EVALUASI KEAMANAN BBIBP-CORV PADA TIKUS, MARMUT, DAN PRIMATA BUKAN MANUSIA

Pada analisis bobot badan tikus kelompok eksperimen dan kelompok kontrol (n = 5). Rerata bobot tikus jantan dan betina digunakan dalam plot ini.

Pada analisis berat badan marmot pada kelompok eksperimen (0,1 x dosis / marmot, 1 x dosis / marmot) dan kontrol negatif dan kelompok kontrol positif (n = 9).

Pada monyet Cynomolgus disuntik secara intramuskular empat kali pada hari ke-1, 8, 15, dan 22 dengan BBIBP-CorV dosis rendah (2 μg / dosis), sedang (4 μg / dosis), dan tinggi (8 μg / dosis). atau plasebo. Analisis bobot badan monyet cynomolgus (n = 10) pada keempat kelompok. Rata-rata bobot monyet cynomolgus jantan dan betina digunakan dalam plot ini.

Pada analisis hematologi monyet cynomolgus pada keempat kelompok (n = 10). Persentase subset limfosit CD3 +, CD3 + CD4 + (berlabel CD4 +), CD3 + CD8 + (berlabel CD8 +), CD20 +, dan CD3 + CD4 + / CD3 + CD8 + (berlabel CD4 + / CD8 +) dipantau pada hari ke-1 (1 hari sebelumnya). vaksinasi), hari ke 25 (3 hari setelah vaksinasi ketiga), dan hari ke 36 (14 hari setelah vaksinasi keempat).

Pada Sitokin kunci TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, dan IL-6 diperiksa pada hari ke-1, 1 (hari untuk vaksinasi pertama), 4, 15 , 22, 25, dan 36.

Anafilaksis sistemik akibat BBIBP-CorV kemudian dievaluasi dengan suntikan intramuskular dan intravena pada marmut. Tiga puluh enam ekor marmot jantan dibagi menjadi 4 kelompok (9 / kelompok), kelompok kontrol negatif (saline fisiologis), kelompok kontrol positif (albumin darah manusia, 20 mg / sensitisasi, 40 mg / stimulasi), dosis rendah kelompok (0,1 x dosis / sensitisasi, 0,2 x dosis / stimulasi), dan kelompok dosis tinggi (1 x dosis / sensitisasi, 2 x dosis / stimulasi). Sensitisasi dilakukan pada D1, D3, dan D5. Stimulasi pertama (eksitasi intravena melalui kaki) untuk 3 (dari 9) marmot dari masing-masing kelompok dilakukan pada D19, dan stimulasi sekunder dari hewan yang tersisa dari setiap kelompok (6/9) dilakukan pada D26. Hasil penelitian menunjukkan tidak ada reaksi abnormal selama periode sensitisasi melalui observasi klinis dan pengukuran berat badan marmot. Tidak ada gejala reaksi alergi yang ditemukan pada kelompok kontrol negatif atau kelompok eksperimen pada D19 atau D26.  Anafilaksis kelompok kontrol positif sangat positif (1/6 hewan positif, 3/6 hewan sangat positif, dan 2/6 hewan sangat positif). Sebaliknya, pada kelompok dosis rendah dan tinggi, tidak ditemukan reaksi alergi pada D19 dan D26, dan reaksi alerginya negatif.

Toksisitas jangka panjang BBIBP-CorV diuji menggunakan monyet cynomolgus

Empat puluh monyet cynomolgus (20 / jenis kelamin) dibagi menjadi 4 kelompok (5 / jenis kelamin / kelompok) dan disuntik secara intramuskular dengan larutan kontrol (injeksi garam fisiologis, kelompok 1) atau 2, 4, atau 8 μg BBIBP-CorV (kelompok 2 ke 4) dalam volume 0,5 mL. Hewan-hewan tersebut disuntik sekali seminggu selama 3 minggu terus menerus (total empat kali). Sebanyak 3/5 hewan dari masing-masing jenis kelamin di setiap kelompok dibedah dengan D25, dan sisanya 2/5 hewan dari setiap jenis kelamin di setiap kelompok dibedah dengan D36. Anatomi kasar dievaluasi, dan pemeriksaan histopatologi dilakukan. Tidak ada kasus kematian atau kematian yang akan datang atau kelainan yang signifikan pada indikator fisiologis dan patologis klinis, distribusi subkelompok limfosit (CD3 +, CD3 + CD4 +, CD3 + CD8 +, CD20 +, CD3 + CD4 + / CD3 + CD8 +), sitokin (tumor necrosis factor alpha [TNF -α], interferon [IFN] -γ, interleukin [IL] -2, IL-4, IL-5, dan IL-6), protein c-reaktif, komplemen, atau berat badan diamati pada 2, 4, dan 8 μg / kelompok dosis. Tidak ada kelainan pada anatomi hewan yang dieutanasia pada setiap kelompok yang diberi dosis pada D25 dan D36 yang diamati. Inflamasi granulomatosa diamati pada kelompok 2, 4, dan 8 μg / dosis pada D25 dan tetap pada akhir periode pemulihan (D36), dengan sedikit perbaikan dibandingkan dengan yang diamati pada D25. Hewan hanya menunjukkan iritasi lokal yang ditandai dengan peradangan granulomatosa ringan hingga parah akibat injeksi, tetapi reaksi ini tidak ada pada 2 minggu setelah injeksi. Tingkat efek samping yang tidak diamati ditemukan menjadi 8 μg / dosis dalam percobaan ini.

DISKUSI

Pengembangan vaksin dengan imunogenisitas dan keamanan yang tinggi sangat penting untuk mengendalikan pandemi COVID-19 global dan pencegahan penyakit dan kematian lebih lanjut.  Hui Wang et al. (2020) melaporkan pengembangan kandidat vaksin inaktif SARS-CoV-2, BBIBP-CorV, dan menunjukkan bahwa vaksin tersebut menginduksi antibodi netralisasi tingkat tinggi pada enam spesies mamalia, termasuk tikus, mencit, marmut, kelinci, monyet cynomolgus, dan kera makaka rhesus.  Vaksin BBIBP-CorV bisa melindungi enam spesies hewan itu dari infeksi SARS-CoV-2. Imunisasi dua dosis menggunakan BBIBP-CorV 2 μg / dosis memberikan perlindungan yang sangat efisien terhadap SARS-CoV-2 pada kera makaka rhesus tanpa terlihat adanya ADE atau perburukan imunopatologis.

Sebelum pelaporan hasil studi BBIBP-CorV ini, telah dilaporkan tiga kandidat vaksin melawan SARS-CoV-2, termasuk vaksin vektor adenovirus (ChAdOx1 nCoV-19), vaksin DNA, dan vaksin inaktif (PiCoVacc) (Gao et al., 2020, Lurie et al., 2020, van Doremalen et al., 2020, Yu et al., 2020a). Dalam studi perlindungan, ChAdOx1 nCoV-19 dan vaksin DNA ditantang dengan virus pada saluran pernapasan bagian bawah dan atas, sedangkan PiCoVacc dan BBIBP-CorV diuji secara intratracheal. Terlepas dari cara uji tantang tantang yang berbeda tersebut, perubahan patologis pada jaringan paru-paru diamati di semua kelompok model, dan RNA virus terdeteksi pada usap tenggorokan atau usap hidung, ini menunjukkan bahwa penetapan model uji tantang virus pada hewan telah berhasil dengan baik.  Vaksin vektor adenovirus rekombinan mudah dimanipulasi untuk modifikasi genetik dan mampu mendorong respons imun spesifik antigen yang kuat; tetapi antibodi netralisasi terhadap vektor pembawa virus masih menjadi tantangan (Zhang dan Zhou, 2016).  Vaksin DNA mudah diproduksi dan stabil untuk penyimpanan dengan pemulihan terbatas atau sisa toksisitas; Namun, kekhawatiran tentang imunogenisitas dan keamanannya masih tetap ada (Gary dan Weiner, 2020). Untuk ChAdOx1 nCoV-19, 5 dari 6 lobus paru pada kelompok yang divaksinasi menunjukkan terdeteksi adanya virus (van Doremalen et al., 2020); tetapi untuk BBIBP-CorV, semua kera dalam kelompok dosis rendah dan tinggi tidak menunjukkan terdeteksi adanya virus di lobus paru pada 7 hari setelah inokulasi. Namun demikian, baik BBIBP-CorV dan ChAdOx1 nCoV-19 memberikan perlindungan yang efektif dan mencegah semua kera yang divaksinasi dari pneumonia interstitial virus. Dibandingkan dengan vaksin vektor adenovirus dan vaksin DNA, strategi untuk pengembangan dan produksi vaksin inaktif adalah teknologi konvensional dan matang.  Dalam pengembangan BBIBP-CorV, strain HB02 menghasilkan hasil virus tertinggi dalam sel Vero di antara tiga strain virus kandidat dan tidak memiliki variasi asam amino dalam 10 bagian, menunjukkan stabilitas genetik yang baik. Selain itu, telah ditetapkan strategi untuk produksi stok BBIBP-CorV berdasarkan karier baru dalam tabung reaktor untuk dapat memproduksi dengan sangat efisien. Yang terpenting, imunisasi dua dosis menggunakan BBIBP-CorV dosis rendah (2 μg / dosis) memberikan perlindungan yang sangat efisien terhadap SARS-CoV-2 pada kera Makaka rhesus, yang mungkin bermanfaat bagi penggunaan klinis lebih lanjut dari vaksin inaktif ini dengan efek samping yang lebih sedikit.  Sebagai catatan, efek perlindungan pada saluran pernapasan bagian atas tidak dinilai dalam penelitian ini dan memerlukan evaluasi lebih lanjut.

Jika tidak ada obat antivirus yang efektif untuk melawan SARS-CoV-2, vaksin dengan potensi dan keamanan yang baik akan dibutuhkan untuk menimbulkan kekebalan populasi secara efektif. Pengembangan BBIBP-CorV memberikan solusi potensial untuk pandemi COVID-19.  Saluran tahapan yang digunakan untuk produksi skala pilot BBIBP-CorV juga memperjelas pengembangan vaksin yang cepat untuk melawan virus corona lainnya.  Berdasarkan hasil yang telah disajikan, uji klinis Fase I BBIBP-CorV saat ini sedang berlangsung dan uji klinis Fase II baru-baru ini telah dimulai. Uji klinis ini telah dirancang menggunakan formulasi adjuvan aluminium yang sama dengan yang dijelaskan di sini, dengan tiga kelompok berbeda yaitu kelompok dosis tinggi, sedang, dan rendah untuk mengevaluasi dosis yang sesuai untuk aplikasi klinis lebih lanjut.

REFERENSI

Hui Wang, Yuntao Zhang, Baoying Huang, Wei Deng, Yaru Quan, Wenling Wang, Wenbo Xu, Yuxiu Zhao, Na Li, Jin Zhang, Hongyang Liang, Linlin Bao, Yanfeng Xu, Ling Ding, Weimin Zhou, Hong Gao, Jianing Liu, Peihua Niu, Xioming Yang. 2020. Development of an Inactivated Vaccine Candidate, BBIBP-CorV, with Potent Protection against SARS-CoV-2. 2020. Aug 6. Cell,182 (3). pp.713-721.e9.

Lu, R., X. Zhao, J. Li, P. Niu, B. Yang, H. Wu, W. Wang, H. Song, B. Huang, N. Zhu, et al. Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.  Lancet, 395 (2020), pp. 565-574.

Lurie, N., M. Saville, R. Hatchett, J. Halton. Developing Covid-19 Vaccines at Pandemic Speed

N Engl J Med, 382 (2020), pp. 1969-1973.

Q. Gao, L. Bao, H. Mao, L. Wang, K. Xu, M. Yang, Y. Li, L. Zhu, N. Wang, Z. Lv, et al. Rapid development of an inactivated vaccine candidate for SARS-CoV-2. Science (2020), 10.1126/science.abc 1932.

Van Doremalen, T. Lambe, A. Spencer, S. Belij Rammerstorfer, J.N. Purushotham, J.R. Port, V. Avanzato, T. Bushmaker, A. Flaxman, M. Ulaszewska, et al. ChAdOx1 nCoV-19 vaccination prevents SARS-CoV-2 pneumonia in rhesus macaques bioRxiv (2020), 10.1101/2020.05.13.093195

Wang, Q., L. Zhang, K. Kuwahara, L. Li, Z. Liu, T. Li, H. Zhu, J. Liu, Y. Xu, J. Xie, et al. Immunodominant SARS Coronavirus Epitopes in Humans Elicited both Enhancing and Neutralizing Effects on Infection in Non-human Primates. ACS Infect. Dis., 2 (2016), pp. 361-376

Kebugaran Jasmani Melawan COVID-19

Kita telah mengetahui dan sering mendengar istilah kebugaran jasmani. Tetapi kita belum tahu hakikat sebenarnya dari kebugaran jasmani. Hakikat dari kebugaran jasmani merupakan hal yang dibutuhkan tubuh agar mencapai tubuh yang bugar. Misalnya ketika mata mengantuk, maka kita berhak untuk mengistirahatkan tubuh terlebih dahulu.

Kebugaran jasmani menurut WHO organisasi kesehatan di seluruh dunia diklasifikasikan menjadi dua, yaitu:

Sehat adalah fisik dan mental tubuh terbebas dari segala penyakit.

Bugar adalah kemampuan seseorang untuk melakukan kegiatan atau aktivitas sehari-hari secara maksimal, dan masih mempunyai cadangan energi tanpa mengalami kelelahan yag berlebihan.

Penggambaran tingkat kesehatan sesorang tidak hanya menjadi fungsi dari kebugaran jasmani, namun kebugaran jasmani juga memiliki fungsi untuk mengukur seseorang untuk melakukan kegiatan setiap harinya. Ada tiga hal yang perlu diperhatikan dalam kebugaran jasmani, yaitu:

Fisik : berkaitan dengan otot, tulang, dan bagian lemak.

Fungsi Organ : berkaitan dengan keefektifan kerja sistem jantung, pembuluh darah dan paru-paru atau sistem pernafasan.

Respon Otot : berkaitan dengan kecepatan, kelenturan, kelemahan, dan kekuatan otot.

Kebugaran jasmani yang dibutuhkan seseorang tentu berbeda-beda. Hal ini dikarenakan aktivitas semua orang tidak sama maka kebugaran jasmani akan bergantung pada sifat tantangan fisik yang dihadapi. Ada beberapa komponen penyusun dari kebugaran jasmani yang perlu Anda ketahui.

 

 

Terdapat 10 komponen kebugaran jasmani disertai dengan jenis latihan yang diperlukan ada;ah sebagai berikut.

 

1. Kekuatan (Streght)

Kekuatan merupakan kemampuan otot ketika digunakan untuk menerima beban sewaktu melakukan aktivitas atau melakukan kerja. Kekuatan otot , baik otot lengan ataupun otot kaki, dapat diperoleh dari latihan yang kontinyu dengan beban berat dan frekuensi sedikit. Latihan angkat beban dapat digunakan untuk melatih kekuatan otot lengan. Jika beban yang digunakan tersebut hanya dapat diangkat sekitar 10 kali saja. Contoh latihan untuk meningkatkan kekuatan sebagai berikut:

Squat jump : latihan ini dapat menambah kekuatan otot tungkai dan otot perut Anda.

Push up : latihan ini dapat menambah kekuatan otot lengan.

Sit up : selain dapat mengecilkan perut, latihan ini juga dapat membuat otot perut Anda menjadi semakin kuat.

Angkat beban : latihan ini digunakan untuk melatih kekuatan otot lengan. Lakukan latihan tersebut dengan frekuensi sedikit saja.

Back up : sama halnya seperti Sit up, back up dapat membantu meningkatkan kekuatan otot perut Anda.

 

2. Daya Tahan (Endurance)

Daya tahan adalah kemampuan seseorang dalam menggunakan sistem jantung, paru-paru atau sistem pernapasan, dan peredaran darahnya secara efektif dan efisien untuk menjalankan kerja secara terus menerus dan tidak pernah berhenti. Berkebalikan dengan latihan kekuatan, daya tahan dapat dilatih dengan beban yang tidak terlalu berat, namun dengan frekuensi yang lama dan dalam durasi waktu yang lama pula.

Contoh latihan untuk kebugaran jasmani bagian daya tahan antara lain adalah lari minimal 2 km, lari minimal 12 menit, lari multistage, angkat beban dengan berat yang ringan namun pengulangan dan jumlahnya diperbanyak serta lari naik turun bukit atau tanjakan dan turunan.

 

3. Daya Otot (Muscular Power)

Daya otot merupakan kemampuan seseorang untuk menggunakan kekuatan maksimum yang dikeluarkan dalam waktu yang sangat singkat. Selain itu, hal ini dapat juga dihubungkan dengan sistem anaerobik dalam proses pemenuhan sebuah energi. Daya otot dapat juga disebut daya ledak otot atau explosive power.

Latihan yang dapat menambah daya otot contohnya antara lain sebagai berikut:

Vertical jump yaitu gerakan meloncat ke atas, dapat melatih daya ledak otot tungkai.

Front jump yaitu gerakan meloncat ke depan, dapat juga melatih daya ledak otot tungkai.

Side jump yaitu gerakan meloncat ke samping, melatih explosive power dari otot tungkai.

 

4. Kecepatan (Speed)

Kecepatan atau speed merupakan kemampuan seseorang untuk mengerjakan gerakan secara kontinyu atau terus menerus dalam gerakan yang sama dengan waktu yang relatif singkat. Kecepatan sangat dibutuhkan dalam olahraga lari pendek 100 meter dan lari pendek 200 meter.

 

5. Daya Lentur (Flexibility)

Daya lentur atau flexibility merupakan tingkat penyesuaian seseorang pada segala aktifitas kerja secara efektif dan efisiens dengan cara penguluran tubuh yang baik. Jika seseorang memiliki kelenturan yang baik, maka orang tersebut akan dapat terhindar dari cidera.  Cidera bukan hanya dialami oleh seseorang yang berolahraga saja, tetapi juga dapat terjadi pada semua orang yang melakukan aktivitas fisik secara tiba-tiba. Misalnya saja mengambil gelas yang akan jatuh, jika orang itu lentur maka kecepatan dan ketepatan mengambil gelas tersebut tidak akan menimbulkan cidera. Contoh latihan atau olahraga untuk meningkatkan daya lentur antara lain adalah senam dan renang.

 

6. Kelincahan (Agility)

Kelincahan merupakan kemampuan seseorang merubah posisi pada area tertentu. Misalnya saja bergerak dari depan ke belakang lalu kembali ke depan, selain itu dari kiri ke kanan atau dari samping ke depan, hingga dari kiri ke tengah kemudian ke depan dan sebagainya. Olahraga yang sangat mengandalkan kelincahan adalah olahraga bulu tangkis. Atlet bulutangkis dituntut untuk dapat mengambil shuttlecock di manapun yang lawan arahkan asal masih masuk dalam garis lapangan. Sehingga atlet bulutangkis selain dituntut untuk memiliki teknik yang baik, kelincahan juga merupakan salah satu faktor yang paling penting.

 

7. Koordinasi (Coordination)

Koordinasi adalah kemampuan seseorang mengintegrasikan berbagai gerakan yang berbeda dan mampu mengkoordinasikan seluruh bagian tubuh dengan baik. Contoh latihan dari komponen kebugaran jasmani bagian koordinasi antara lain dengan cara memantulkan bola tenis ke tembok dengan tangan kanan kemudian menangkapnya lagi dengan tangan kiri begitu juga sebaliknya.

8. Keseimbangan (Balance)

Keseimbangan merupakan kemampuan seseorang mengendalikan tubuh sehingga gerakan-gerakan yang dilakukan dapat dimunculkan dengan baik dan benar. Senam merupakan salah satu cabang olahraga yang sangan mengandalkan balance atau keseimbangan ini. Contoh latihan untuk meningkatkan keseimbangan seperti berjalan di atas balok kayu selebar 10 cm yang memiliki ukuran panjang 10 meter, berdiri dengan satu kaki jinjit atau juga dengan sikap lilin.

 

9. Ketepatan (Accuracy)

Ketepatan merupakan kemampuan seseorang untuk mengendalikan gerak-gerak bebas tubuh terhadap suatu sasaran. Beberapa contoh olahraga yang membutuhkan keakuratan ini adalah memanah, bowling, sepak bola dan basket. Sepak bola membutuhkan ketepatan ketika menendang bola ke gawang lawan, begitu pun dengan bowling dan memanah yang memiliki target sasaran. Sedangkan bola basket membutuhkan ketepatan ketika memasukkan bola ke ring lawan. Contoh latihan untuk meningkatkan ketepatan diantaranya yaitu:

Melempar bola tenis ke tembok, sebelumnya tembok telah diberi sasaran atau diberi tanda terlebih dahulu.

Untuk lebih spesifik, langsung saja melatih ketepatan dengan memasukkan bola ke ring lawan untuk olahraga bola basket.

Untuk sepak bola dengan latihan menendang bola ke gawang yang dijaga oleh seorang penjaga gawang agar keakuratan lebih dapat diperhitungkan dan memiliki tantangan.

 

10. Reaksi (Reaction)

Reaksi merupakan kemampuan seseorang untuk segera bertindak  dan menanggapi rangsangan yang ditangkap oleh indera. Salah satu latihan yang dapat meningkatkan reaksi adalah olahraga tangkap bola.

Jika kita selalu melatih kebugaran tubuh, maka ada banyak hal yang dapat kita peroleh. Beberapa manfaat yaitu dapat meningkatkan sirkulasi darah dan kinerja jantung, dapat meningkatkan daya tahan dan kekuatan tubuh agar badan menjadi energik, memiliki respon dan reaksi tubuh yang tepat, mengurangi resiko kegemukan, terhindar dari cidera ketika beraktivitas dan sebagainya.

Selamat berolahraga, semoga selalu tetap sehat dan bugar!

Obat Anti Virus

Obat antivirus merupakan golongan obat yang digunakan untuk menangani penyakit-penyakit yang disebabkan infeksi virus. Obat antivirus bekerja dengan cara mematikan serangan virus, menghambat, serta membatasi reproduksi virus di dalam tubuh. Penggunaan obat antivirus hanya diberikan berdasarkan saran dari dokter.

Penyakit yang disebabkan Infeksi virus yang ditangani dengan pemberian obat antivirus, antara lain Influenza, Hepatitis B atau C, Herpes simplex, Herpes zoster atau cacar ular, Cytomegalovirus, Human immunodeficiency virus (HIV).

Setiap obat antivirus dapat dikelompokkan berdasarkan cara kerjanya, yaitu berupa: (1) Interferon meliputi peginterferon alfa-2a, peginterferon alfa-2b; (2) Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor (NNRTI) yaitu efavirenz, nevirapine, rilpivirine, etravirine; (3) Nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRTI) yaitu adefovir, entecavir, lamivudine, stavudine, telbivudine, tenofovir, zidovudine; (4) Penghambat neuraminidase yaitu oseltamivir, zanamivir; (5) Penghambat protease yaitu darunavir, ritonavir, lapinavir-ritonavir, simeprevir, indinavir; (6) Penghambat RNA: yaitu ribavirin; (7) Penghambat DNA polymerase yaitu acyclovir, valacyclovir, famciclovir, ganciclovir, valganciclovir; (8) Direct acting yaitu ofosbuvir, daclatasvir, elbasvir/grazoprevir.

Golongan obat antivirus NNRTI, NRTI, dan penghambat protease juga dikenal dengan obat antiretroviral (ARV), yaitu obat untuk mengatasi HIV/AIDS.

Peringatan untuk Wanita hamil, menyusui, atau sedang merencanakan kehamilan disarankan untuk berkonsultasi kepada dokter sebelum menggunakan obat antivirus.  Informasikan kepada dokter terlebih dahulu jika ingin memberikan obat ini kepada anak-anak.  Harap berhati-hati dalam menggunakan obat ini jika mengalami gangguan fungsi ginjal.  Beri tahu dokter jika sedang menggunakan obat-obatan lainnya, termasuk herba atau suplemen, karena dapat menimbulkan interaksi obat yang tidak diinginkan. Jika terjadi reaksi alergi atau overdosis sesudah mengonsumsi obat antivirus, segera temui dokter atau kunjungi rumah sakit terdekat.

Efek Samping Obat Antivirus

Seperti obat-obat lainnya, obat antivirus juga dapat menyebabkan efek samping, meskipun tidak semua orang akan mengalami efek samping setelah mengonsumsi obat, karena respons tubuh terhadap obat bisa berbeda-beda. Beberapa efek samping yang dapat terjadi setelah mengonsumsi obat antivirus antara lain sakit kepala; mual dan muntah; sakit perut dan diare; ulit tidur; masalah kulit; perubahan perilaku; dam halusinasi.

Sumber:

Alodokter.com . Kememkes RI

SARS-CoV-2 pada Hewan Peliharaan

HEWAN KESAYANGAN TAMPAKNYA TIDAK MUDAH TERINFEKSI SARS-COV-2

Selama lima bulan pertama wabah COVID-19 (1 Januari - 8 Juni 2020), yang meliputi dua belas minggu pertama setelah deklarasi WHO tentang pandemi global 11 Maret oleh WHO, kurang dari 20 hewan peliharaan dinyatakan positif, dengan konfirmasi, untuk SARS-CoV-2 secara global. Terlepas dari kenyataan bahwa pada 8 Juni, jumlah orang yang dikonfirmasi dengan COVID-19 melebihi 7 juta secara global dan 1,9 juta di Amerika Serikat.

Kurang dari 25 laporan dari seluruh dunia hewan peliharaan (anjing dan kucing) yang terinfeksi SARS-CoV-2; Namun, tidak satu pun dari laporan ini menunjukkan bahwa hewan peliharaan adalah sumber infeksi bagi manusia. Bukti sampai saat ini dari beberapa hewan peliharaan yang telah dites positif untuk SARS-CoV-2 menunjukkan infeksi ini biasanya akibat kontak dekat dengan orang-orang dengan COVID-19. Dalam studi laboratorium tentang infeksi eksperimental dengan SARS-CoV-2, musang, hamster Suriah, dan kucing — semua hewan yang dapat disimpan sebagai hewan peliharaan — menunjukkan potensi untuk dijadikan model hewan dari infeksi manusia, tetapi anjing, babi, ayam, dan bebek tidak. Dan, meskipun pemodelan molekuler dan studi in vitro menunjukkan bahwa beberapa spesies hewan secara teoritis dapat terinfeksi dengan SARS-CoV-2, inang perantara definitif belum diidentifikasi. Ada sedikit atau tidak ada bukti bahwa hewan peliharaan mudah terinfeksi dengan SARS-CoV-2 dalam kondisi alami dan tidak ada bukti sampai saat ini bahwa mereka menularkan virus kepada manusia. Cara utama penularan COVID-19 pada manusia adalah penyebaran orang ke orang.

Bukti tambahan bahwa hewan peliharaan tampaknya jarang terinfeksi SARS-CoV-2 dalam kondisi alami berasal dari dua laboratorium komersial di Amerika Serikat, yang pada bulan April 2020 mengumumkan ketersediaan uji RT-PCR untuk SARS-CoV-2 pada hewan peliharaan, termasuk kucing dan anjing. Selama pengembangan dan validasi tes-tes ini, setiap laboratorium menilai ribuan spesimen dari anjing dan kucing untuk virus COVID-19 tanpa mendapatkan hasil positif. Spesimen-spesimen tersebut berasal dari hewan peliharaan yang berlokasi di Amerika Serikat, Korea Selatan, Kanada, dan Eropa, termasuk wilayah yang secara bersamaan mengalami jumlah kasus COVID-19 manusia yang tinggi. Meskipun ini menggembirakan, spesimen yang diuji pada awalnya diserahkan untuk analisis PCR dari patogen yang lebih umum yang menyebabkan penyakit pernapasan pada anjing dan kucing dan, dengan demikian, tidak tersedia informasi per-kasus tentang apakah hewan peliharaan ini telah melakukan kontak dengan orang yang diduga atau dikonfirmasi positif COVID-19.

Laporan pertama yang dikonfirmasi tentang hewan peliharaan yang terinfeksi SARS-CoV-2 berasal dari Hong Kong. Sejak awal wabah di sana, pejabat pemerintah dengan Departemen Pertanian, Perikanan, dan Konservasi (AFCD) merekomendasikan agar hewan peliharaan mamalia dari rumah tangga dengan orang yang dirawat di rumah sakit karena COVID-19 dirawat di karantina dan diuji untuk infeksi dengan SARS-CoV- 2. Pada 15 April, 30 anjing, 17 kucing, dan dua hamster telah ditahan di fasilitas karantina AFCD. Namun, hanya dua anjing dan satu kucing yang dinyatakan positif terinfeksi SARS-CoV-2. Infeksi dikonfirmasi dengan deteksi dan pengurutan RNA virus dalam sampel saluran pernapasan atas dan deteksi antibodi penetralisir terhadap virus dalam serum. Virus juga diisolasi dari salah satu dari dua anjing yang terinfeksi. Tidak satu pun hewan di karantina, termasuk tiga hewan peliharaan positif, mengembangkan tanda-tanda klinis penyakit pernapasan dan semua hewan positif dilepaskan dari karantina setelah setidaknya 14 hari tinggal dan hasil tes RT-PCR negatif pada sampel yang dikumpulkan setidaknya dua berturut-turut hari. Pada 14 Mei, sebuah artikel yang menggambarkan infeksi SARS-CoV-2 pada dua anjing Hong Kong dipublikasikan secara online di Nature.

Laporan pertama dari hewan peliharaan positif di Amerika Serikat datang pada 22 April ketika CDC dan National Veterinary Services Laboratories (NVSL) melaporkan bahwa dua kucing di negara bagian New York dipastikan terinfeksi oleh SARS-CoV-2. Kedua kucing memiliki tanda-tanda penyakit pernapasan ringan dan diharapkan pulih sepenuhnya. Pemilik salah satu kucing ini dipastikan memiliki COVID-19; kucing kedua yang tinggal di rumah tangga yang sama ini dinyatakan negatif virusnya. Kucing positif kedua adalah kucing luar-dalam yang pemiliknya tidak memiliki gejala COVID-19 dan tidak pernah diuji. Namun, ia hidup di daerah dengan jumlah kasus COVID-19 manusia yang tinggi. Diduga bahwa kucing ini terinfeksi oleh pemiliknya, yang tanpa gejala terinfeksi SARS-CoV-2, atau oleh orang yang terinfeksi lain di lingkungan tersebut. Laporan kasus yang menggambarkan tanda-tanda klinis dan perkembangan pada dua kucing ini dan tes diagnostik selesai diterbitkan dalam edisi 8 Juni 2020 dari Morbidity and Mortality Weekly Report. Hingga 1 Juni, ini adalah dua hewan peliharaan positif yang dipastikan terinfeksi di Amerika Serikat.

Pada tanggal 2 Juni, USDA NVSL mengumumkan kasus SARS-CoV-2 yang dikonfirmasi pertama kali pada seekor anjing di Amerika Serikat. Hewan peliharaan ini, Anjing Gembala Jerman, tinggal bersama satu anjing lain dan dua pemiliknya di negara bagian New York. Salah satu pemilik anjing telah dites positif, dan yang kedua memiliki gejala yang konsisten dengan, COVID-19 sebelum Anjing Gembala Jerman mengembangkan tanda-tanda penyakit pernapasan. Anjing kedua di rumah itu tetap sehat. Sampel yang diambil dari Anjing Gembala Jerman yang terkena diuji positif dugaan SARS-CoV-2 dengan menggunakan RT-PCR yang dilakukan di laboratorium hewan swasta, yang kemudian melaporkan hasilnya kepada pejabat negara bagian dan federal. Hasil tes laboratorium lebih lanjut dilakukan di NVSL pada sampel asli dan tambahan yang dikumpulkan dari Anjing Gembala Jerman mengkonfirmasi bahwa anjing ini terinfeksi dengan SARS-CoV-2. Anjing itu diduga telah terinfeksi oleh pemiliknya dan diperkirakan akan pulih sepenuhnya. Hasil tes serologis yang dilakukan oleh NVSL pada anjing kedua di rumah tangga mengungkapkan antibodi spesifik virus, menunjukkan bahwa meskipun anjing ini tidak pernah mengembangkan tanda-tanda klinis penyakit, ia telah terkena virus COVID-19.

Ringkasan mendalam hal ini dan kasus-kasus lain yang dilaporkan dari infeksi SARS-CoV-2 yang terjadi secara alami pada hewan tersedia bagi mereka yang ingin belajar lebih banyak. Ini akan diperbarui secara berkala, jadi kami sarankan Anda untuk sering memeriksa kembali.

Karena infeksi hewan dengan SARS-CoV-2 memenuhi kriteria Organisasi Dunia untuk Kesehatan Hewan (OIE) dari penyakit yang muncul, infeksi yang dikonfirmasi harus dilaporkan ke OIE sesuai dengan Kode Kesehatan Hewan Terestrial. Pemerintah AS dan Hong Kong telah melaporkan hewan positif yang dijelaskan di atas kepada OIE. Selain itu, semua kasus SARS-CoV-2 pada hewan di AS yang dikonfirmasi dengan pengujian yang dilakukan di NVSL akan diposting di situs Web USDA / APHIS.

Karena infeksi hewan dengan SARS-CoV-2 memenuhi kriteria Organisasi Dunia untuk Kesehatan Hewan (OIE) dari penyakit yang muncul, infeksi yang dikonfirmasi harus dilaporkan ke OIE sesuai dengan Kode Kesehatan Hewan Terestrial. Pemerintah AS dan Hong Kong telah melaporkan lima hewan positif yang dijelaskan di atas kepada OIE.

MENJAGA HEWAN KESAYANGAN AMAN SELAMA PANDEMIK

Untuk pemilik hewan peliharaan, mempersiapkan terlebih dahulu adalah kuncinya. Pastikan Anda memiliki peralatan darurat yang disiapkan, dengan makanan hewan peliharaan Anda setidaknya selama dua minggu dan segala obat yang dibutuhkan. Biasanya kami berpikir tentang peralatan darurat seperti ini dalam hal apa yang mungkin diperlukan untuk evakuasi, tetapi ada baiknya juga menyiapkan satu dalam kasus karantina atau isolasi diri ketika Anda tidak bisa meninggalkan rumah.

Praktik lain yang sesuai termasuk tidak membiarkan hewan peliharaan berinteraksi dengan orang atau hewan lain di luar rumah tangga; menjaga kucing di dalam ruangan, jika memungkinkan, untuk mencegah mereka berinteraksi dengan hewan atau manusia lain; anjing berjalan dengan tali, menjaga setidaknya 6 kaki dari orang lain dan hewan; dan menghindari taman anjing atau tempat-tempat umum di mana sejumlah besar orang dan anjing berkumpul.

Jika Anda sakit dengan COVID-19 (dicurigai atau dikonfirmasi dengan tes), batasi kontak dengan hewan peliharaan Anda dan hewan lain, sama seperti Anda terhadap orang lain; memiliki anggota lain dari perawatan rumah tangga Anda untuk hewan peliharaan Anda saat Anda sakit; hindari kontak dengan hewan peliharaan Anda, termasuk mengelus, meringkuk, dicium atau dijilat, dan berbagi makanan atau tempat tidur. Jika Anda harus merawat hewan peliharaan Anda atau berada di dekat binatang saat Anda sakit, kenakan kain penutup wajah dan cuci tangan Anda sebelum dan setelah Anda berinteraksi dengan mereka. Anda tidak boleh berbagi piring, gelas minum, gelas, peralatan makan, handuk, atau tempat tidur dengan orang lain atau hewan peliharaan di rumah Anda. Panduan tambahan tentang mengelola hewan peliharaan di rumah di mana orang sakit dengan COVID-19 tersedia dari CDC.

Sementara kami merekomendasikan ini sebagai praktik yang baik, penting untuk diingat bahwa tidak ada bukti saat ini bahwa hewan memainkan peran penting dalam menyebarkan SARS-CoV-2. Berdasarkan informasi terbatas yang tersedia hingga saat ini, risiko penyebaran hewan COVID-19 kepada manusia dianggap rendah. Oleh karena itu, tidak ada alasan untuk mengusir hewan peliharaan dari rumah di mana COVID-19 telah diidentifikasi dalam anggota rumah tangga, kecuali ada risiko bahwa hewan peliharaan itu sendiri tidak dapat dirawat dengan tepat. Dalam keadaan darurat pandemi ini, hewan peliharaan dan manusia masing-masing membutuhkan dukungan dari yang lain dan dokter hewan ada untuk mendukung kesehatan yang baik dari keduanya.

SARS-CoV-2 pada spesies lain

HARIMAU DAN SINGA DI BRONX ZOO, NEW YORK, AMERIKA SERIKAT

Pada tanggal 5 April, Laboratorium Layanan Hewan Nasional USDA mengumumkan temuan positif SARS-CoV-2 dalam sampel dari satu harimau di Kebun Binatang Bronx di New York City. USDA melaporkan hasil tes positif ke OIE pada 6 April.

Harimau itu adalah satu dari lima harimau dan tiga singa bertempat di dua kandang di kebun binatang. Empat dari harimau ini dan semua singa telah mengembangkan tanda-tanda klinis penyakit pernapasan ringan selama seminggu. Hewan-hewan yang terkena dampak adalah penghuni jangka panjang kebun binatang, tanpa kondisi medis kronis, dan tidak ada hewan baru yang diperkenalkan pada kelompok selama beberapa tahun. Karena itu, diduga bahwa kucing besar lainnya dengan tanda-tanda klinis penyakit pernapasan juga terinfeksi dengan SARS-CoV-2. Sumber infeksi diduga berasal dari zookeeper, yang pada saat paparan belum mengembangkan gejala COVID-19.

Pada 22 April, Wildlife Conservation Society (WCS) menerbitkan pembaruan tentang harimau dan singa di Kebun Binatang Bronx. Mitra laboratorium kebun binatang telah mengembangkan tes sampel tinja yang memungkinkan kucing besar lainnya diuji tanpa perlu anestesi umum. Kebun binatang menguji semua harimau dan singa yang dijelaskan dalam laporan awal kecuali untuk harimau positif asli. Hasil dari 7 hewan ini positif, menunjukkan bahwa 8 kucing besar yang dijelaskan dalam laporan awal semua kemungkinan telah terinfeksi dengan SARS-CoV-2. WCS juga melaporkan bahwa 4 harimau dan 3 singa yang awalnya mengembangkan tanda-tanda klinis penyakit pernapasan telah pulih dengan baik. Hewan di bagian lain kebun binatang, termasuk kucing besar lainnya, tidak pernah mengalami tanda-tanda klinis penyakit. Protokol biosekuriti yang ditingkatkan telah diimplementasikan untuk staf yang merawat felid nondomestik di empat kebun binatang yang diawasi oleh WCS.

PETERNAKAN CERPELAI DI BELANDA

Pada tanggal 26 April, Menteri Pertanian, Alam, dan Kualitas Makanan Belanda mengeluarkan surat kepada parlemen Belanda yang melaporkan bahwa beberapa cerpelai di masing-masing dari dua peternakan besar telah diuji positif untuk SARS-CoV-2. Yang pertama dari peternakan-peternakan ini terdiri dari dua lokasi yang dekat dengan perumahan mink, sedangkan pada pertanian kedua semua mink ditempatkan di satu lokasi. Setiap peternakan telah mencatat peningkatan insiden penyakit saluran cerna dan pernapasan serta kematian keseluruhan pada hewan. Beberapa pengasuh hewan di setiap peternakan mengembangkan gejala yang konsisten dengan COVID-19. Dipercayai bahwa para penjaga ini menularkan virus ke cerpelai. Ada rencana untuk melakukan pengujian tambahan terhadap bulu lainnya, baik yang sakit maupun yang sehat, dan sampel udara dan debu dari masing-masing kebun untuk SARS-CoV-2. Semua petani bulu Belanda, dokter hewan, dan peneliti juga diberitahu tentang persyaratan baru untuk melaporkan masalah pernapasan atau peningkatan mortalitas pada bulu cerpelai. Selain itu, semua karyawan disarankan untuk menggunakan alat pelindung diri saat bekerja dengan atau merawat bulu. Sebagai tindakan pencegahan tambahan, badan kesehatan masyarakat Belanda menyarankan orang-orang untuk tidak bersepeda atau berjalan kaki dalam radius sekitar 400 meter di sekitar setiap peternakan yang terinfeksi sampai hasil dari tes pada sampel udara dan debu diketahui. Larangan ini dicabut ketika hasilnya menunjukkan bahwa udara dan debu di luar lumbung yang menampung mink tidak mengandung SARS-CoV-2.

Pada tanggal 8 Mei, Menteri melaporkan bahwa SARS-CoV-2 telah terdeteksi di bulu dari dua peternakan tambahan, menjadikan total peternakan bulu yang terinfeksi di Belanda menjadi empat. Keselamatan manusia dan pencegahan kesehatan diberlakukan untuk dua peternakan pertama yang terinfeksi diimplementasikan pada set kedua dari peternakan yang terinfeksi. Studi yang sedang berlangsung tentang SARS-CoV-2 di cerpelai akan mencakup sampel dari keempat peternakan.

Pada tanggal 25 Mei, Menteri melaporkan bahwa berdasarkan analisis urutan awal dan pemetaan filogenetik, masuk akal bahwa setidaknya dalam dua kasus, virus ditransmisikan dari cerpelai yang terinfeksi ke host manusia yang rentan. Penelitian lebih lanjut sedang dilakukan untuk lebih memahami apakah transmisi mink ke manusia dari SARS-CoV-2 dapat terjadi. Selain itu, tujuh dari 24 kucing peliharaan ditemukan memiliki antibodi yang bersirkulasi khusus untuk SARS-CoV-2, yang menunjukkan mereka telah terinfeksi virus. Viral RNA terdeteksi pada salah satu dari tujuh kucing seropositif, tetapi pada jumlah salinan yang rendah sehingga urutan genom tidak dimungkinkan. Belum diketahui peran apa, jika ada, kucing yang berperan dalam penularan virus. Studi tambahan sedang berlangsung.

Pada tanggal 28 Mei, langkah-langkah biosekuriti ketat berikut ini yang telah diterapkan di peternakan yang terinfeksi diberlakukan di semua peternakan bulu di Belanda:

• Larangan transportasi pada cerpelai dan kotoran cerpelai.

• Protokol kebersihan untuk pengunjung dan kendaraan.

• Larangan pengunjung ke lumbung (yaitu, pembatasan orang yang diizinkan memasuki bangunan yang menampung bulu).

• Kewajiban bahwa petani bulu harus memastikan sejauh mungkin bahwa hewan lain (anjing, kucing, dan musang) tidak dapat masuk atau meninggalkan pertanian.

Pada tanggal 1 Juni, empat kebun terinfeksi tambahan diidentifikasi melalui penggunaan rencana pengawasan peringatan dini yang mengharuskan semua petani menyerahkan bangkai setiap minggu dari setiap bulu yang mati secara alami untuk menguji SARS-CoV-2 dengan menggunakan necropsy dan RT-PCR.

Pada tanggal 1 Juni, empat kebun terinfeksi tambahan diidentifikasi melalui penggunaan rencana pengawasan peringatan dini yang mengharuskan semua petani menyerahkan bangkai setiap minggu dari setiap bulu yang mati secara alami untuk menguji SARS-CoV-2 dengan menggunakan necropsy dan RT-PCR.

Pada tanggal 3 Juni, Menteri Pertanian, Alam, dan Kualitas Pangan dan Menteri Kesehatan, Kesejahteraan, dan Olahraga membuat keputusan, berdasarkan risiko terhadap kesehatan hewan dan risiko potensial terhadap kesehatan masyarakat, yang mengaburkan semua bulu yang terinfeksi saat ini dan yang akan datang. peternakan akan dimusnahkan dan pemilik dikompensasi atas kehilangan mereka.

• Antara 26 April dan 7 Juni, para Menteri memberikan sembilan laporan (26 April, 8 Mei, 15 Mei, 19 Mei, 28 Mei, 1 Juni, 3 Juni, dan 4 Juni) kepada Parlemen mengenai status SARS- CoV-2 di peternakan bulu. Informasi (dimutakhirkan pada 1 Juni 2020) juga tersedia di area bahasa Inggris di situs web pemerintah Belanda, dan cetakan awal dari temuan awal diposting pada 18 Mei di situs web bioRxiv.

Studi tentang peternakan bulu yang terinfeksi dan pengawasan tambahan di semua peternakan sedang berlangsung dan, saat hasil baru tersedia, informasi dalam ringkasan mendalam kami tentang kasus yang dilaporkan dari infeksi SARS-CoV-2 yang terjadi secara alami pada hewan akan diperbarui sesuai dengan itu.

Menafsirkan laporan infeksi alami SARS-CoV-2 pada hewan

Kami mengantisipasi bahwa seiring pandemi COVID-19 berlanjut, artikel berita dan penelitian akan diterbitkan dan laporan-laporan yang beredar tentang hewan-hewan tambahan, baik domestik maupun liar, yang tampaknya terinfeksi dengan SARS-CoV-2. Namun, penting untuk mengetahui bahwa sampai dikonfirmasi, hasil tes RT-PCR positif awal mungkin tidak berarti bahwa seekor hewan terinfeksi secara definitif dengan SARS-CoV-2; alih-alih, tergantung pada sampel yang diuji, itu mungkin hanya berarti hewan itu mengambil sisa-sisa virus melalui interaksi dengan (mis., menjilati) lingkungan yang terkontaminasi SARS-CoV-2 atau orang dengan COVID-19. Tes konfirmasi diperlukan untuk mengidentifikasi hewan yang benar-benar terinfeksi. Di Amerika Serikat, kasus infeksi SARS-CoV-2 yang dikonfirmasi pada hewan dilacak oleh Departemen Pertanian, Layanan Inspeksi Kesehatan Hewan dan Tanaman AS (USDA / APHIS). Secara global, OIE menerbitkan laporan yang dikonfirmasi tentang SARS-CoV-2 pada hewan yang diterimanya dari Negara Anggota OIE di Antarmuka Database Informasi Kesehatan Hewan Dunia (WAHIS). Kami juga akan memperbarui ringkasan mendalam kami dari kasus yang dilaporkan dari infeksi SARS-CoV-2 yang terjadi secara alami pada hewan secara teratur, jadi kami mendorong Anda untuk sering memeriksanya kembali.

JENIS TES UNTUK MENDETEKSI INFEKSI SARS-COV-2 PADA HEWAN

Baik AVMA maupun CDC, USDA, Asosiasi Dokter Hewan Amerika (AAVLD), Asosiasi Nasional Dokter Hewan Kesehatan Masyarakat Negara (NASPHV), atau Majelis Nasional Pejabat Kesehatan Hewan Negara merekomendasikan pengujian rutin hewan untuk COVID-19. Namun, karena situasinya terus berkembang, pejabat kesehatan masyarakat dan hewan dapat memutuskan untuk menguji hewan tertentu. Di Amerika Serikat, keputusan untuk menguji harus dibuat secara kolaboratif antara dokter hewan yang menghadiri dan pejabat kesehatan masyarakat federal dan kesehatan hewan federal.

Meskipun pengujian hewan menggunakan teknik yang sama seperti yang digunakan untuk manusia, NVSL dan laboratorium lain menggabungkan reagen spesifik hewan untuk melestarikan pasokan yang diperlukan untuk pengujian manusia. Informasi tambahan mengenai pengujian manusia tersedia di situs web Johns Hopkins University COVID-19 Testing Insights Initiative, yang diluncurkan pada akhir April 2020.

Untuk membantu dalam interpretasi hasil tes yang mungkin disebutkan dalam laporan hewan positif SARS-CoV-2, kami telah merangkum di bawah tiga tes yang umum digunakan dan apa arti hasil positif pada masing-masing. Ini tidak dimaksudkan untuk menjadi daftar lengkap dari tes potensial SARS-CoV-2 yang mungkin digunakan untuk hewan, atau penjelasan lengkap tentang bagaimana setiap tes dilakukan. Ini hanya dimaksudkan sebagai bantuan dalam membaca laporan berita, artikel ilmiah, dan informasi lain tentang SARS-CoV-2 secara kritis pada hewan.

• Reverse-transcriptase polimerase Chain Reaction (RT-PCR): Sampel Oropharyngeal, nasal, atau dubur / fecal diuji, melalui RT-PCR, untuk memperkuat urutan spesifik genom SARS-CoV-2 untuk deteksi visual selanjutnya. Jika uji RT-PCR kuantitatif digunakan, estimasi jumlah viral load dalam sampel asli dapat dibuat. Primer yang digunakan untuk memperkuat urutan virus khusus untuk SARS-CoV-2 dan tidak bereaksi silang dengan coronavirus hewan lainnya. Sampel kontrol positif dan negatif yang sesuai dijalankan dengan masing-masing pengujian untuk memastikan kinerjanya tepat.

o Hasil RT-PCR negatif berarti bahwa viral load RNA tidak terdeteksi dalam sampel, yang dapat menunjukkan bahwa hewan tersebut tidak terinfeksi pada saat sampel dikumpulkan atau bahwa sampel tidak diproses dengan benar. Hasil negatif tidak dapat membedakan antara hewan dengan infeksi SARS-CoV-2 di masa lalu dari yang tidak pernah terinfeksi.

• Isolasi virus: Dalam tes ini, sampel seperti yang dikumpulkan untuk RT-PCR diproses untuk memungkinkan inokulasi in vitro dari garis sel permisif. Garis sel yang diinokulasi kemudian dikultur di bawah kondisi suhu dan kelembaban yang ideal untuk meningkatkan amplifikasi (replikasi) virus apa pun yang ada dalam sampel asli. Beberapa bagian mungkin diperlukan untuk menghasilkan virus yang dikultur secara in vitro, sehingga tes ini dapat memakan waktu berhari-hari hingga beberapa minggu sebelum menyatakan hasilnya sebagai positif atau negatif. Isolat virus yang dikultur dengan cara ini kemudian dapat dikarakterisasi dengan sekuensing genom keseluruhan dan dibandingkan dengan sekuens isolat SARS-CoV-2 lainnya, termasuk yang berasal dari orang yang terinfeksi yang memiliki kontak dekat dengan hewan.

o Hasil isolasi virus yang positif menunjukkan bahwa hewan tersebut terinfeksi SARS-CoV-2 pada saat sampel diperoleh.

o Hasil negatif dapat berarti bahwa hewan tersebut tidak terinfeksi SARS-CoV-2, jumlah virus dalam sampel asli tidak cukup untuk menginfeksi garis sel, atau sesuatu dalam sampel asli atau diperkenalkan selama pemrosesan menghambat infeksi atau replikasi virus pada vitro. Hasil negatif juga bisa berarti bahwa hewan itu telah terinfeksi tetapi telah membersihkan virus pada saat sampel dikumpulkan.

• Antibodi penawar: Dalam tes ini, darah dikumpulkan dan dipisahkan serum untuk digunakan dalam uji in vitro untuk menilai apakah ada antibodi yang akan menghambat, atau menetralkan, kemampuan isolat SARS-CoV-2 yang dimurnikan untuk menginfeksi sel permisif baris. Serum uji diencerkan secara serial dan ditambahkan ke piring kultur jaringan dengan virus dan sel permisif dan kemudian diinkubasi pada suhu dan kelembaban yang sesuai. Sampel kontrol positif dan negatif dijalankan dengan masing-masing pengujian untuk memastikan kinerjanya tepat. Hasilnya dibaca sebagai pengenceran serum tertinggi yang menghasilkan pengurangan spesifik dalam pembentukan plak yang diinduksi virus dalam sel.

o Hasil tes antibodi penetral positif menunjukkan bahwa hewan tersebut terinfeksi SARS-CoV-2 — atau mungkin masih terinfeksi — dan waktu yang cukup telah berlalu untuk memungkinkan sistem kekebalan hewan merespons dengan memproduksi antibodi khusus virus.

o Hasil tes antibodi penetral negatif berarti bahwa hewan tersebut belum menghasilkan antibodi terhadap virus. Ini bisa jadi karena hewan itu belum pernah terinfeksi virus atau terlalu dini dalam infeksi dan sistem kekebalan hewan belum memiliki waktu yang cukup untuk merespons dengan memproduksi antibodi. Untuk mengesampingkan yang terakhir, tes antibodi penetral dapat diulangi, menggunakan sampel darah yang dikumpulkan di kemudian hari.

Dari literatur ilmiah tentang SARS-CoV-2 pada hewan non-manusia

Karena genom SARS-CoV-2 yang baru pertama kali diurutkan pada Januari 2020, banyak studi penelitian telah diselesaikan oleh para ilmuwan di seluruh dunia untuk lebih memahami asal virus, cara penularan, dan mekanisme patogen. Beberapa studi dirancang untuk menemukan model hewan yang baik dari infeksi SARS-CoV-2, sedangkan yang lain sedang dilakukan untuk mengeksplorasi kisaran inang potensial dari virus. Studi serupa dilakukan setelah wabah SARS pada 2003-2004. Studi-studi sebelumnya dari coronavirus yang berbeda, tetapi terkait, mengarah pada temuan bahwa kucing luwak (spesies yang berbeda dari kucing domestik) mungkin merupakan inang perantara virus SARS-CoV; kucing dan musang domestik dapat secara eksperimental terinfeksi dengan virus SARS-CoV dan menularkannya ke kucing atau musang naif, masing-masing, dalam kondisi percobaan; dan sangat sedikit kucing <10 anjing="" apartemen="" besar="" dan="" dengan="" di="" dites="" hong="" jumlah="" kasus="" kompleks="" kong="" manusia="" milik="" o:p="" pemilik="" positif="" sangat="" sars-cov.="" sars="" satu="" sebuah="" terkena="" tinggal="" tinggi="" virus="" yang="">

Hasil dari penelitian terbaru yang menggambarkan infeksi eksperimental hewan domestik dengan SARS-CoV-2 atau menjelajahi kisaran inang potensial SARS-CoV-2 juga dapat membantu dokter hewan dan profesional kesehatan masyarakat lainnya untuk lebih memahami apa peran, jika ada, hewan mungkin bermain di pandemi yang sedang berlangsung. Ferret, hamster Suriah, dan kucing — semua hewan yang dapat dipelihara sebagai hewan peliharaan — menunjukkan potensi awal untuk menjadi model hewan infeksi manusia dengan virus COVID-19, tetapi anjing, babi, ayam, dan bebek tidak. Dan, sementara analisis urutan komparatif, pemodelan molekuler dan penelitian in vitro menunjukkan bahwa beberapa spesies hewan secara teoritis dapat terinfeksi dengan SARS-CoV-2, inang perantara definitif belum ditemukan. Selain itu, penting untuk dicatat bahwa ada sedikit atau tidak ada bukti bahwa hewan peliharaan mudah terinfeksi SARS-CoV-2 dalam kondisi alami dan tidak ada bukti bahwa mereka dapat menularkan virus.

Cara utama penularan COVID-19 pada manusia dari orang-ke-orang melalui tetesan dan kontak pernapasan

Di bawah ini, kami memberikan ringkasan singkat dari tiga jalur utama investigasi yang telah digunakan untuk mempelajari SARS-CoV-2 pada hewan dan daftar beberapa kekuatan dan potensi kelemahan masing-masing. Kami telah mengembangkan ringkasan mendalam dari artikel penelitian utama bagi mereka yang ingin mempelajari lebih lanjut dan akan memperbarui ringkasan ini secara teratur. Kami juga percaya penting untuk dicatat bahwa karena tingkat penelitian yang cepat tentang SARS-CoV-2 dan kebutuhan untuk belajar sebanyak mungkin tentang virus untuk mengembangkan pendekatan baru untuk mengurangi patogenisitas dan tingkat penularannya, banyak penelitian makalah sedang diposting di situs web pracetak seperti bioRxiv dan medRxiv sebelum diajukan untuk publikasi potensial dalam jurnal peer-review. Situs-situs akses terbuka ini memungkinkan penyebaran informasi secara cepat dan berbagi luas desain eksperimental dan hasil awal, yang pada gilirannya memungkinkan kolaborasi yang lebih besar di antara para ilmuwan dari seluruh dunia. Namun, hal itu juga dapat menyebabkan hasil yang belum ditegaskan kembali atau ditinjau sejawat secara tidak sengaja dipublikasikan sebagai pernyataan definitif dan bukti konklusif. Pembaca didorong untuk memperhatikan sumber informasi baru mengenai COVID-19 dan SARS-CoV-2 dan memperhatikan penolakan pada platform yang tidak ditinjau oleh rekan sejawat. Misalnya, penafian di situs web bioRxiv mencatat bahwa makalah yang diposting adalah “laporan awal dan belum ditinjau oleh rekan sejawat. Mereka tidak boleh dianggap konklusif, membimbing praktik klinis / perilaku yang berhubungan dengan kesehatan, atau dilaporkan di media berita sebagai informasi yang sudah mapan. ” Penafian serupa ditemukan di situs medRxiv.

ANALISIS URUTAN PERBANDINGAN, MODEL MOLEKULER, DAN STUDI VITRO

Segera setelah urutan genom SARS-CoV-2 pertama kali dideskripsikan pada Januari 2020, banyak laboratorium memulai perbandingan luas dari urutan virus corona baru dengan urutan yang diketahui dari coronavirus lain. Hasil analisis ini membantu memetakan struktur genomik dan protein SARS-CoV-2 dan hubungan evolusionernya dengan virus corona lainnya. Perbandingan ini mengungkapkan bahwa walaupun SARS-CoV-2 adalah virus yang berbeda secara genetik, itu paling mirip dengan dua betacoronavirus: satu terkait dengan kelelawar, dan yang lainnya merupakan agen penyebab wabah sindrom pernapasan akut (SARS) 2003-2004 pada manusia. —Yaitu, SARS-CoV.

Selain itu, menggunakan analisis urutan komparatif protein permukaan coronavirus dan teknik pemodelan molekuler, SARS-CoV-2 ditemukan memiliki domain pengikat reseptor (RBD) yang serupa pada protein Spike permukaannya dengan protein Spike SARS-CoV. Kesamaan ini membantu mengidentifikasi bahwa reseptor inang yang digunakan oleh SARS-CoV untuk menginfeksi sel manusia — angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) - juga digunakan oleh SARS-CoV-2. Mengikat RBD pada protein Spike virus ke ACE2 pada permukaan sel inang adalah salah satu langkah penting yang mengarah pada replikasi dan amplifikasi kedua virus ini pada inang yang permisif.

Urutan protein dan struktur ACE2 cukup dilestarikan di seluruh spesies mamalia. Namun, perubahan dari urutan ACE2 manusia dalam satu atau lebih asam amino, khususnya di wilayah pengikatan virus ACE2, dapat mengubah afinitas pengikatan antara SARS-CoV-2 dan sel inang, membuat beberapa spesies hewan lebih permisif terhadap infeksi daripada yang lain . Pemodelan molekul digabungkan dengan studi in vitro dapat digunakan untuk menganalisis interaksi antara SARS-CoV-2 protein lonjakan RBD dan wilayah pengikatan virus ACE2 dari berbagai spesies hewan, dengan hasil yang menunjukkan spesies itu, secara teoritis, harus paling permisif terhadap infeksi.

Keuntungan menggunakan analisis urutan komparatif, pemodelan molekuler, dan teknik in vitro adalah bahwa hewan hidup tidak diperlukan untuk mempelajari interaksi antara protein permukaan virus dan protein permukaan dari berbagai spesies inang potensial. Hasilnya kemudian dapat digunakan untuk memprediksi interaksi mana yang paling penting untuk infektivitas virus, mengidentifikasi host inang hewan non-manusia yang permisif untuk SARS-CoV-2, dan membantu mempersempit pilihan spesies untuk digunakan dalam studi infeksi dan transmisi eksperimental berikutnya. Namun, ada batasan untuk studi yang menggunakan teknik ini. Dalam contoh yang diberikan di atas, walaupun interaksi antara protein spike SARS-CoV-2 dan ACE2 pada sel inang mungkin diperlukan bagi virus untuk menginfeksi spesies tertentu, itu tidak cukup untuk infeksi. Yaitu, ada banyak interaksi host virus lainnya yang diperlukan agar SARS-CoV-2 untuk masuk dan mereplikasi secara efektif di dalam sel host sambil menghindari sistem kekebalan host untuk memperkuat dan menyebar sebagai partikel virus yang menular ke anggota lain dari spesies inang yang sama. Dengan demikian, meskipun hasil analisis urutan komparatif, pemodelan molekul, dan studi in vitro dapat memberikan petunjuk yang dapat membantu mengidentifikasi inang permisif untuk SARS-CoV-2, mereka tidak boleh digunakan untuk membuat pernyataan definitif mengenai kemampuan SARS-CoV-2 menginfeksi atau ditularkan oleh spesies hewan tertentu dalam kondisi alami — atau bahkan eksperimental.

STUDI INFEKSI DAN TRANSMISI EKSPERIMENTAL

Studi infeksi dan penularan eksperimental digunakan untuk mengembangkan model hewan dari infeksi manusia dengan SARS-CoV-2. Model hewan yang andal diperlukan untuk studi patogenisitas dan studi yang pada akhirnya dapat mengarah pada obat anti-virus baru dan vaksin COVID-19. Hasil dari infeksi eksperimental dan studi penularan juga dapat membantu mengidentifikasi host perantara potensial dalam evolusi virus dari reservoir hewan aslinya - kemungkinan kelelawar - ke SARS-CoV-2, suatu betacoronavirus yang secara istimewa menginfeksi dan bereplikasi pada manusia.

Spesies hewan yang digunakan dalam jenis studi ini dapat dipilih berdasarkan apa yang diketahui tentang virus serupa; informasi dari analisis urutan komparatif, pemodelan molekuler, dan studi in vitro seperti yang dijelaskan di atas; dan laporan hewan, khususnya hewan peliharaan, yang mungkin, dalam situasi yang jarang terjadi, secara alami terinfeksi SARS-CoV-2 setelah kontak dekat dengan orang positif COVID-19.

Karena urutan genomik dan struktur SARS-CoV-2 mirip dengan SARS-CoV dan kedua virus menggunakan reseptor ACE2 inang untuk menginfeksi sel, hewan yang diketahui permisif terhadap SARS-CoV dalam kondisi laboratorium — kucing dan musang — adalah dua hewan pertama yang digunakan dalam studi infeksi dan penularan eksperimental terbaru dari SARS-CoV-2. Hewan-hewan ini juga diidentifikasi sebagai spesies inang permisif potensial berdasarkan analisis urutan komparatif, pemodelan molekuler, dan studi in vitro, dan meskipun sangat jarang, SARS-CoV-2 dapat ditularkan dari pemilik yang terinfeksi ke kucing peliharaan.

Hasil positif dari berbagai penelitian yang dilakukan di laboratorium yang berbeda menunjukkan bahwa kucing dan musang, serta hewan peliharaan lainnya (misalnya, hamster Suriah) dan primata non-manusia, dapat terinfeksi dengan SARS-CoV-2 dan menularkan virus ke hewan naif di bawah kondisi eksperimental. Hasil dari beberapa penelitian ini telah dipublikasikan secara luas di media, yang telah menimbulkan kekhawatiran dari pemilik hewan peliharaan. Namun, kami menekankan kehati-hatian untuk tidak terlalu menafsirkan hasil dari infeksi eksperimental dan studi penularan, dan juga memperingatkan tentang mengekstrapolasi mereka ke potensi SARS-CoV-2 untuk secara alami menginfeksi atau ditularkan oleh hewan peliharaan yang dipelihara sebagai hewan peliharaan.

Alasan kami adalah sebagai berikut:

• Infeksi yang diinduksi secara eksperimental tidak mencerminkan infeksi yang diinduksi secara alami. Hanya karena seekor hewan dapat terinfeksi secara eksperimental melalui inokulasi intranasal atau intratrakeal langsung dengan konsentrasi tinggi dari virus yang dikultur jaringan tidak berarti bahwa ia akan dengan mudah terinfeksi dengan virus yang sama dalam kondisi alami.

• Studi transmisi eksperimental biasanya dilakukan dalam kondisi ideal yang dapat mencakup penggunaan ruang uji tekanan negatif dan aliran searah udara yang disaring HEPA dari yang terinfeksi ke hewan naif. Kondisi yang sangat terkontrol seperti itu tidak mencerminkan kondisi yang ditemukan di luar pengaturan laboratorium. Dengan demikian, hasil tidak boleh digunakan sebagai bukti konklusif bahwa hewan yang terinfeksi secara eksperimental dapat dengan mudah menularkan COVID-19 dalam kondisi alami.

• Jumlah hewan yang digunakan dalam jenis eksperimen ini biasanya kecil, dengan kesimpulan yang diambil berdasarkan poin data yang dalam beberapa kasus dikumpulkan dari sedikitnya dua hewan, membuatnya sulit untuk menarik kesimpulan definitif mengenai semua hewan dari spesies tertentu dari hasil studi tunggal.

• Hanya sejumlah kecil hewan liar peliharaan dan peliharaan yang dipastikan terinfeksi alami SARS-CoV-2 selama 5 bulan pertama wabah COVID-19 (1 Januari hingga 8 Juni 2020). Terlepas dari kenyataan bahwa pada 7 Juni 2020, jumlah orang yang dikonfirmasi dengan COVID-19 melebihi 7 juta secara global dan 1,9 juta di Amerika Serikat. Selain itu, tidak ada bukti bahwa relatif sedikit hewan peliharaan yang terinfeksi secara alami memainkan peran substantif dalam mentransmisikan COVID-19 kepada manusia.

SURVEI SEROLOGIS DARI POPULASI HEWAN

Survei serologis dapat dilakukan untuk menentukan apakah hewan yang hidup di daerah dengan jumlah kasus COVID-19 manusia yang tinggi telah terinfeksi dengan SARS-CoV-2. Dalam studi ini, darah dikumpulkan dari semua hewan dalam populasi tertentu, dan serum dianalisis untuk mengetahui adanya antibodi terhadap SARS-CoV-2. Deteksi antibodi paling umum dilakukan melalui enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), yang dapat mendeteksi semua antibodi terhadap peptida atau protein viral permukaan tertentu, atau kelas tertentu dari antibodi spesifik virus seperti IgM, yang muncul pada awal host respon imun, atau lebih khusus, IgG, yang muncul kemudian dan bertahan lebih lama daripada IgM.  Serum juga dapat dianalisis untuk antibodi penawar virus, meskipun tes ini lebih memakan waktu dan sumber daya daripada ELISA.

Hasil positif ELISA atau antibodi-virus netralisasi menunjukkan bahwa hewan itu terinfeksi SARS-CoV-2 — dan mungkin masih terinfeksi — pada tingkat dan dalam jangka waktu yang cukup untuk memperoleh respons antibodi spesifik-virus. Hasil negatif dapat berarti bahwa hewan itu tidak pernah terinfeksi SARS-CoV-2 atau bahwa ia baru saja terinfeksi dan belum memasang tanggapan kekebalan terhadap virus.

Dengan demikian, hasil survei serologis dapat membedakan antara hewan yang terinfeksi dengan SARS-CoV-2 pada tingkat yang cukup untuk menginduksi produksi antibodi spesifik virus dari yang tidak. Namun, survei serologis tidak dapat digunakan untuk mengidentifikasi hewan yang saat ini terinfeksi, juga tidak dapat digunakan untuk menarik kesimpulan definitif mengenai perjalanan infeksi pada hewan yang ditemukan seropositif — yaitu, sumber, durasi, dan tingkat keparahan infeksi. Mungkin yang paling penting, hasil survei serologis tidak dapat digunakan untuk menarik kesimpulan definitif mengenai kemampuan hewan seropositif untuk mengirimkan SARS-CoV-2 ke hewan lain, termasuk manusia.

Sampai saat ini, tidak ada bukti konklusif dari studi ilmiah yang diterbitkan bahwa, dalam kondisi alami, hewan peliharaan, termasuk yang dipelihara sebagai hewan peliharaan seperti kucing, anjing, musang, dan hamster Suriah, dapat dengan mudah terinfeksi atau menularkan SARS-CoV-2. Namun, banyak penelitian tambahan sedang dilakukan untuk lebih memahami dinamika transmisi dan mekanisme patogen virus ini, dengan hasil beberapa penelitian yang diposting atau dipublikasikan secara online hampir setiap hari. Untuk membantu dokter hewan dan profesional kesehatan hewan lainnya tetap mengetahui apa yang diketahui tentang SARS-CoV-2 dan hewan peliharaan, tinjauan cepat online literatur telah dilakukan oleh Systematic Reviews for Animals & Food. Tinjauan cepat ini pertama kali diposting pada 20 Maret 2020 dan telah diperbarui beberapa kali sejak itu. AVMA secara teratur memperbarui situs web COVID-19 kami, termasuk ringkasan mendalam dari artikel penelitian utama yang berfokus pada SARS-CoV-2 pada hewan, untuk membantu memastikan dokter hewan memiliki data terbaik yang tersedia untuk dijadikan dasar pengambilan keputusan klinis dan penilaian risiko. Kami menyarankan Anda untuk sering memeriksa kembali.

REKOMENDASI ​​RINGKASAN DAN SAAT INI

Terlepas dari jumlah kasus global COVID-19 yang melampaui angka 7 juta pada 8 Juni 2020, kami menyadari hanya segelintir hewan peliharaan dan hewan liar yang diternakkan atau dipelihara secara global yang telah dinyatakan positif SARS-CoV-2. Dalam semua kasus, sumber infeksi untuk hewan peliharaan dianggap satu atau lebih orang dengan COVID-19 yang dikonfirmasi atau dicurigai. Pada titik ini, tidak ada bukti bahwa hewan peliharaan, termasuk hewan peliharaan dan ternak, memainkan peran penting dalam menyebarkan SARS-CoV-2 kepada manusia.

Oleh karena itu, AVMA mempertahankan rekomendasi saat ini mengenai SARS-CoV-2 dan hewan. Rekomendasi ini, yang didukung oleh panduan dari Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit AS (CDC) dan Organisasi Kesehatan Hewan Dunia (OIE), adalah:

• Pemilik hewan tanpa gejala COVID-19 harus terus mempraktikkan kebersihan yang baik selama interaksi dengan hewan. Ini termasuk mencuci tangan sebelum dan sesudah interaksi seperti itu dan ketika menangani makanan hewani, limbah, atau persediaan.

• Jangan biarkan hewan peliharaan berinteraksi dengan orang atau hewan lain ditempatkan di luar rumah.

• Simpan kucing di dalam ruangan, jika memungkinkan, untuk mencegah mereka berinteraksi dengan hewan atau manusia lain.

• Berjalan anjing dengan tali, menjaga setidaknya 2 meter dari orang lain dan hewan. Hindari taman anjing atau tempat umum di mana banyak orang dan anjing berkumpul.

• Sampai lebih banyak diketahui tentang virus, mereka yang menderita COVID-19 harus membatasi kontak dengan hewan peliharaan dan hewan lain, sama seperti Anda akan membatasi kontak Anda dengan orang lain. Mintalah anggota rumah tangga atau bisnis Anda yang lain untuk memberi makan dan merawat hewan apa pun, termasuk hewan peliharaan. Jika Anda memiliki hewan penolong atau Anda harus merawat hewan-hewan Anda, termasuk hewan peliharaan, maka kenakan kain penutup wajah; jangan berbagi makanan, mencium, atau memeluk mereka, dan cuci tangan Anda sebelum dan sesudah kontak dengan mereka.

• Pada saat ini, tidak ada bukti yang menunjukkan bahwa hewan peliharaan, termasuk hewan peliharaan dan ternak, yang mungkin terinfeksi oleh manusia secara tidak sengaja memainkan peran penting dalam penyebaran COVID-19.

• Pengujian rutin hewan untuk SARS-CoV-2 TIDAK dianjurkan. Dokter hewan sangat dianjurkan untuk menyingkirkan penyebab penyakit lainnya yang lebih umum pada hewan sebelum mempertimbangkan pengujian untuk SARS-CoV-2.

• Wabah manusia didorong oleh penularan dari orang ke orang dan, berdasarkan informasi terbatas yang tersedia hingga saat ini, risiko penyebaran hewan COVID-19 kepada orang dianggap rendah. Oleh karena itu, kami tidak melihat alasan untuk mengeluarkan hewan peliharaan dari rumah walaupun COVID-19 telah diidentifikasi dalam anggota rumah tangga, kecuali ada risiko bahwa hewan peliharaan itu sendiri tidak dapat dirawat dengan tepat.

Selama keadaan darurat pandemi ini, hewan dan manusia masing-masing saling membutuhkan bantuan satu dengan yang lainnya serta bantuan dokter hewan yang ada untuk mendukung kesehatan yang baik.

Sumber:

SARS-CoV-2 in animals. AVMA. June 11, 2020