Cell line Timus Anjing (Cf2Th)

 

 Mengenal Cell line Timus Anjing (Cf2Th)

Cell line yang berasal dari timus janin anjing normal atau fetal canine thymus (Cf2Th) telah dikultur dan dikembangkan sejak 1967. Selama kultivasi, sel-sel telah berubah secara morfologis dari fibroblast menjadi datar, tampilan fusiform dan secara kariologis dari diploid (2n = 78) dengan 76 autosom telosentris menjadi hipodiploid dengan kromosom atelosentris yang baru terbentuk. Sel mempertahankan aktivitas enzim karakteristik anjing (G6PD dan LDH) serta fluoresensi membran sel dan bebas dari mikoplasma. Cell line dapat menghasilkan tumor pada tikus ATST.

Tidak ada virus endogen yang terdeteksi di sel-sel ini. Cell line ini sudah distok dan benihnya telah didistribusikan ke banyak laboratorium dan sel-selnya telah berfungsi sebagai substrat eksperimen di sejumlah karya tulis ilmiah yang diterbitkan tentang onkologi meskipun dengan sebutan yang berbeda. Informasi ini ditawarkan untuk menetapkan asal muasal Cell line yang berharga ini dan untuk membuat daftar karakteristik yang dapat berfungsi untuk memantau kemurniannya dan untuk membedakannya dari Cell line lain yang ada pada asal anjing yang juga umum digunakan.

 

DESKRIPSI CELL ILNE TIMUS ANJING (cf2th)

Organisme: Canis familiaris

Jaringan Anjing: timus

Penyakit: normal

Umur: bayi baru lahir

Jenis kelamin: betina

 

PENCEGAHAN KESELAMATAN

ATCC sangat menganjurkan agar sarung tangan dan pakaian pelindung selalu digunakan dan masker wajah penuh selalu digunakan saat menangani botol beku. Penting untuk diperhatikan bahwa beberapa botol bocor saat direndam dalam nitrogen cair dan perlahan-lahan akan terisi dengan nitrogen cair. Setelah pencairan, konversi nitrogen cair kembali ke fase gasnya dapat mengakibatkan wadahnya meledak atau meledakkan tutupnya dengan kekuatan berbahaya yang menyebabkan puing-puing yang beterbangan.

 

PETUNJUK PEMBUKAAN DAN PENYIMPANAN

Periksa semua wadah apakah ada kebocoran atau kerusakan cell line.

Keluarkan sel beku dari kemasan es kering dan segera tempatkan sel pada suhu di bawah ¬130 ° C, sebaiknya dalam uap nitrogen cair, sampai siap digunakan.

 

PROSEDUR PENANGANAN SEL BEKU

Untuk memastikan tingkat kelangsungan hidup tertinggi, cairkan vial dan mulai kultur sesegera mungkin setelah diterima. Jika pada saat kedatangan, penyimpanan lanjutan dari kultur beku diperlukan, maka vial tersebut harus disimpan dalam fase uap nitrogen cair dan tidak pada ¬70 ° C. Penyimpanan pada ¬70 ° C akan mengakibatkan hilangnya viabilitas.

 

1. Cairkan vial dengan digoyangkan secara lembut dalam penangas air 37 ° C. Untuk mengurangi kemungkinan kontaminasi, jauhkan lubang air dan tutupnya dari air. Pencairan harus cepat kurang lebih 2 menit.

 

2. Keluarkan vial dari penangas air segera setelah isinya mencair, dan dekontaminasi dengan mencelupkan atau menyemprotkan etanol 70%. Semua operasi mulai saat ini harus dilakukan di bawah kondisi aseptik yang ketat.

 

3. Pindahkan isi vial ke dalam labu kultur jaringan berukuran 75 cm2 dan encerkan dengan media kultur lengkap yang direkomendasikan (lihat informasi batch spesifik untuk rasio pengenceran yang direkomendasikan). Penting untuk menghindari alkalinitas media yang berlebihan selama pemulihan sel. Disarankan bahwa sebelum penambahan isi vial, bejana kultur yang berisi media tumbuh ditempatkan ke dalam inkubator setidaknya selama 15 menit agar media mencapai pH normalnya (7,0 hingga 7,6).

 

4. Inkubasikan kultur pada suhu 37 ° C dalam inkubator yang sesuai.

 

Direkomendasikan di atmosfer udara dengan 5% CO2 jika menggunakan media yang dijelaskan pada lembar produk cell line masing-masing.

 

Catatan: Agen krioprotektif tidak perlu dihilangkan. Jika diinginkan bahwa zat krioprotektif dihilangkan segera, atau agar diperoleh suspensi sel yang lebih pekat, sentrifugasi suspensi sel pada kira-kira 125 x g selama 5 sampai 10 menit. Buang supernatan dan encerkan kembali sel dengan media pertumbuhan segar pada rasio pengenceran yang direkomendasikan dalam informasi batchnya.

 

PROSEDUR PENANGANAN UNTUK KULTUR DALAM FLASK

Labu diisi dengan sel (lihat informasi batch spesifik) yang tumbuh dan diisi penuh dengan media di ATCC untuk mencegah hilangnya sel selama pengiriman.

1. Setelah diterima, periksa kultur secara visual untuk mencari bukti makroskopis dari setiap kontaminasi mikroba. Menggunakan mikroskop terbalik (sebaiknya dilengkapi dengan optik kontras fase), periksa dengan cermat untuk membuktikan tidak terdapat kontaminasi mikroba. Periksa juga untuk menentukan apakah sebagian besar sel masih menempel di dasar labu; selama pengiriman kultur kadang-kadang ditangani secara kasar dan banyak sel sering terlepas dan tersuspensi dalam media kultur (tetapi masih dapat hidup).

2. Jika sel masih menempel, angkat secara aseptik semua kecuali 5 sampai 10 mL media pengiriman. Media pengiriman dapat disimpan untuk digunakan kembali. Inkubasi sel dalam incubator di atmosfer udara pada suhu 37 ° C dalam 5% CO2 sampai siap untuk disubkultur.

 

3. Jika sel tidak menempel pada labu, secara aseptik keluarkan seluruh isi labu dan sentrifugasi pada 125 x g selama 5 sampai 10 menit. Sedot media pengiriman dan simpan. Encerkan kembali sel pellet dalam 10 mL media ini dan tambahkan ke labu 25 cm2. Inkubasi labu dalam incubator di atmosfer udara pada suhu 37 ° C dalam 5% CO2 sampai sel siap untuk disubkultur.

 

MEDIUM PERTUMBUHAN LENGKAP

Media Dulbecco's Modified Eagle's Medium dengan asam amino non-esensial sebanyak 80% dan serum janin sapi sebanyak 20%.

 

PROSEDUR SUBKULTUR

Volume yang digunakan dalam protokol ini adalah untuk labu 75 cm2; secara proporsional mengurangi atau menambah jumlah media pemisahan sel untuk wadah kultur ukuran lain.

1. Angkat dan buang media kultur.

2. Bilas sebentar lapisan sel dengan 0,25% (w / v) larutan Trypsin¬0.03% (w / v) EDTA untuk menghilangkan semua bekas serum yang mengandung penghambat tripsin.

3. Tambahkan 2,0 sampai 3,0 mL larutan Trypsin¬EDTA ke labu dan amati sel di bawah mikroskop sampai lapisan sel tersebar (biasanya dalam 5 sampai 15 menit).

Catatan: Untuk menghindari penggumpalan, jangan mengguncang sel dengan memukul atau mengocok labu sambil menunggu sel terlepas. Sel yang sulit dilepaskan dapat ditempatkan pada suhu 37 ° C untuk memudahkan penyebaran.

4. Tambahkan 6,0 hingga 8,0 mL media pertumbuhan lengkap dan aspirasi sel dengan pipet lembut.

5. Tambahkan alikuot yang sesuai dari suspensi sel ke labu kultur baru.

6. Inkubasi kultur pada 37 ° C. Rasio Subkultivasi: Rasio subkultivasi 1: 2 hingga 1: 6 direkomendasikan, Pembaruan Media: 2 - 3 kali per minggu

Catatan: Untuk informasi lebih lanjut tentang disosiasi enzimatik dan subkultur cell line, lihat Bab 10 dalam Kultur Sel Hewan, Manual Teknik Dasar oleh R. Ian Freshney, edisi ke-3, diterbitkan oleh Alan R. Liss, N.Y., 1994.

 

MEDIA CRYOPRESERVATION

Media kultur lengkap yang dijelaskan di atas dilengkapi dengan DMSO 5% (v / v). Kultur sel yang diuji DMSO tersedia sebagai Katalog ATCC No. 4¬X.

 

KEMANFAATAN

Cell line ini telah digunakan untuk mempropagasi retrovirus dari embrio kucing dan paru-paru dan ginjal babon. Sel-sel tersebut juga rentan terhadap retrovirus xenotropik dari mencit AKR dan BALB/c.

 

TINGKAT BIOSAFETY: 

Prosedur keselamatan yang tepat harus selalu digunakan dengan bahan ini. Keselamatan laboratorium dibahas dalam publikasi terbaru dari Biosafety di Laboratorium Mikrobiologi dan Biomedis dari Pusat Layanan dan Pengendalian dan Pencegahan Penyakit dan Institut Nasional untuk Kesehatan Departemen Kesehatan dan Layanan Kemanusiaan AS.

 

GARANSI ATCC

Produk ATCC® bergaransi selama 30 hari sejak tanggal pengiriman, dan garansi ini hanya berlaku jika produk disimpan dan ditangani sesuai dengan informasi yang disertakan pada lembar informasi produk ini. Jika produk ATCC® adalah sel hidup atau mikroorganisme, ATCC mencantumkan formulasi media yang terbukti efektif untuk produk ini. Sementara media lain yang tidak ditentukan juga dapat memberikan hasil yang memuaskan, perubahan media atau tidak adanya aditif dari media yang direkomendasikan ATCC dapat mempengaruhi pemulihan, pertumbuhan dan / atau fungsi produk ini. Jika formulasi media alternatif digunakan, jaminan ATCC untuk kelangsungan hidup tidak lagi berlaku.

 

DISCLAIMER

Produk ini dimaksudkan untuk tujuan penelitian laboratorium saja. Ini tidak dimaksudkan untuk digunakan pada manusia. Sementara ATCC menggunakan upaya yang wajar untuk memasukkan informasi yang akurat dan terkini pada lembar produk ini, ATCC tidak membuat jaminan atau pernyataan tentang akurasinya. Kutipan dari literatur ilmiah dan paten disediakan untuk tujuan informasional saja. ATCC tidak menjamin bahwa informasi tersebut telah dikonfirmasi akurat. Produk ini dikirim dengan syarat Anda bertanggung jawab atas penyimpanan, penanganan, dan penggunaannya yang aman. ATCC tidak bertanggung jawab atas kerusakan atau cedera yang timbul dari penerimaan dan / atau penggunaan produk ini. Meskipun upaya yang wajar telah dilakukan untuk memastikan keaslian dan keandalan materi yang disimpan, ATCC tidak bertanggung jawab atas kerusakan yang timbul dari kesalahan identifikasi atau kesalahan penyajian materi tersebut. Silakan lihat Perjanjian Transfer Material (MTA) terlampir untuk detail lebih lanjut mengenai penggunaan produk ini. MTA juga tersedia di situs Web kami di www.atcc.org Informasi tambahan tentang kultur ini tersedia di situs web ATCC di www.atcc.org. © ATCC 2021. Semua hak dilindungi undang-undang. ATCC adalah merek dagang terdaftar dari American Type Culture Collection. [01/01]

 

DAFTAR PUSTAKA

Nelson-Rees WA, et al. Source, alterations, characteristics and use of a new dog cell line (Cf2Th). In Vitro 12: 665-669, 1976. PubMed: 190163

Farzan M, et al. HIV-1 Entry and Macrophage Inflammatory Protein-1beta-mediated Signaling Are Independent Functions of the Chemokine Receptor CCR5. J. Biol. Chem. 272: 6854-6857, 1997. PubMed: 9054370

Campbell M, et al. The simian foamy virus type 1 transcriptional transactivator (Tas) binds and activates an enhancer element in the gag gene. J. Virol. 70: 6847-6855, 1996. PubMed: 8794326

Russell DW, Miller AD. Foamy virus vectors. J. Virol. 70: 217-222, 1996. PubMed: 8523528

Hay, R. J., Caputo, J. L., and Macy, M. L., Eds. (1992), ATCC Quality Control Methods for Cell Lines. 2nd edition, Published by ATCC.

Caputo, J. L., Biosafety procedures in cell culture. J. Tissue Culture Methods 11:223-227, 1988.

Fleming, D.O., Richardson, J. H., Tulis, J.J. and Vesley, D., (1995) Laboratory Safety: Principles and Practice. Second edition, ASM press, Washington, DC.

Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th ed. HHS. U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Washington DC: U.S. Government Printing Office; 2007. The entire text is available online.

Sumber:

Nelson-Rees WA, et al. 1976. Source, alterations, characteristics and use of a new dog cell line (Cf2Th). In Vitro 12: 665-669, 1976. PubMed: 190163