Liposom Nanopropolis, Solusi Cerdas Lawan Stres Panas!

 

 

Dampak Menguntungkan Liposom Nanopropolis Sebagai Agen Anti-Stres pada Ayam Broiler yang Dipelihara dalam Kondisi Stres Panas Siklik

 

ABSTRAK

 

Penelitian ini mengkaji dampak penambahan liposom nano-propolis (NPRL) dalam pakan terhadap pertumbuhan, komponen biokimia darah, fungsi imun, dan status oksidatif ayam broiler yang terpapar stres panas siklik (HS). Ayam diberi pakan basal yang disuplemen dengan berbagai tingkat NPRL, yaitu 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan. Pakan yang disuplemen dengan NPRL secara signifikan meningkatkan indeks pertumbuhan dan pemanfaatan pakan, hemoglobin, dan sel darah merah (P < 0,01). Sel darah putih, limfosit, dan monosit menurun secara signifikan dengan penambahan NPRL (P < 0,001). Suplementasi pakan 250 atau 400 mg NPRL/kg menurunkan jumlah bakteri patogen (Salmonella, E. coli, dan Enterococci) (P < 0,01). Unggas yang diberi pakan NPRL (pakan 400 mg/kg) secara signifikan menurunkan regulasi gen mRNA IFNγ (p < 0,001), sementara kedua kelompok (NPRL100 dan NPRL250) memiliki hasil yang serupa (P > 0,05). Gen iNOS menurun secara signifikan dengan penambahan NPRL dalam pakan dengan cara yang bergantung pada dosis. Unggas dalam kelompok NRPL memiliki kadar mRNA interleukin-4 dan gen faktor nekrosis tumor yang lebih rendah. Aktivitas lisosom berkurang secara signifikan dengan penambahan NPRL 250 atau 400 mg dalam pakan (P < 0,001). Unggas dalam NPRL250 dan NPRL100 memiliki IgG yang lebih besar (P < 0,05) dibandingkan kelompok lainnya. Terkait biomarker terkait oksidatif, penambahan NPRL dalam pakan menurunkan kadar mieloperoksidase dan malondialdehid secara signifikan dibandingkan dengan kelompok HS (P < 0,001). Ayam broiler dalam kelompok NPRL400 memiliki kadar bilirubin total dan gamma-glutamiltransferase terendah. NPRL250 memiliki kadar urea terendah dibandingkan dengan kelompok lain (P < 0,001). Penambahan NPRL dalam pakan memperbaiki arsitektur hati dan usus ayam broiler yang terpapar stres panas siklik. Hasil ini menunjukkan bahwa penggunaan NPRL dalam pakan ayam broiler yang stres dapat meningkatkan ketahanan terhadap panas dengan meningkatkan metabolit darah dan imunitas, serta mengurangi peradangan dan stres oksidatif.

 

Kata kunci: stres panas, ayam pedaging, mikrobiota, kesehatan hati, nanoliposom

 

PENDAHULUAN

 

Tidak diragukan lagi, pemanasan global menimbulkan hambatan yang cukup besar bagi industri perunggasan, terutama di wilayah beriklim tropis. Kondisi ini menyebabkan hewan terpapar stres panas (heat stress / HS), yang mengakibatkan berbagai perubahan biologis (Kpomasse dkk., 2021; Part dkk., 2016). Oleh karena itu, HS merupakan tantangan lingkungan yang signifikan dalam bidang peternakan unggas (da Silva dkk., 2014). Selain itu, HS menurunkan hasil daging berdasarkan berat badan dan mengubah homeostasis redoks, status kesehatan, kelangsungan hidup, dan kesejahteraan unggas secara keseluruhan (Liu dkk., 2022). Lebih lanjut, HS memiliki efek merugikan pada reaksi imun hewan dan memicu respons inflamasi (Awad dkk., 2020). Stres panas juga mendorong perubahan tingkat transkriptomik, kerusakan DNA, dan peroksidasi lipid, serta akhirnya memodifikasi perubahan proteomik (Lu dkk., 2019; Awad dkk., 2020; Rafeeq dkk., 2023). Beberapa pendekatan mitigasi telah dikembangkan untuk mengurangi pengaruh berbahaya HS pada ayam pedaging melalui manipulasi pakan.

 

Sebagai contoh, temuan terbaru menunjukkan bahwa penambahan antioksidan alami bioaktif ke dalam pakan merupakan pendekatan yang menguntungkan untuk melawan efek buruk stres oksidatif (OS) yang disebabkan oleh HS (Puvača dkk., 2022). Fitokimia merupakan salah satu antioksidan alami yang paling banyak digunakan untuk meningkatkan pertumbuhan dan meningkatkan kekebalan unggas di lingkungan yang merugikan (Seven dkk., 2008; Awad dkk., 2019). Namun, terdapat keterbatasan dalam penggunaan fitokimia dalam produk ini karena volatilitasnya yang tidak stabil, kelarutan dalam air yang buruk, dan rasa yang tidak diinginkan (Aytekin dkk., 2020; Abdelnour dkk., 2023). Untuk mengatasi masalah ini, penggunaan nanoteknologi, seperti liposom sebagai konstruksi koloid berbentuk bola yang terbuat dari membran bilayer fosfolipid (Refaat dkk., 2021; Sheikholeslami dkk., 2022) dan partisi air internal dapat digunakan untuk meningkatkan fungsionalitas, stabilitas, dan bioaktivitasnya serta mengatasi efek OS.

 

Propolis (PRO) adalah salah satu produk perlebahan yang paling banyak digunakan. Propolis terdiri dari berbagai konstituen seperti asam fenolik, terpenoid, dan flavonoid, yang dianggap sebagai zat aktif biologis utama PRO (AL-Kahtani dkk., 2022; Kasote dkk., 2022). PRO adalah biomolekul polifenol alami dengan dampak antioksidan yang kuat (Kasote dkk., 2022). Sebagai bagian dari pilihan alami yang mendukung kesehatan umum dan status kekebalan tubuh (AL-Kahtani dkk., 2022), propolis memiliki dampak antiinflamasi, antivirus (Refaat dkk., 2021), antibakteri (Aytekin dkk., 2020), dan antioksidan (AL-Kahtani dkk., 2022) yang berkontribusi pada pelestarian integritas seluler di berbagai organ. Enkapsulasi PRO dengan dukungan liposom menguntungkan untuk tujuan biologis dan kimianya, sebagaimana dinyatakan oleh Abdelnour dkk. (2023), yang mengamati bahwa nano-propolis-liposom (NPRL) meningkatkan kualitas sperma dan kemampuan pembekuan pada kerbau.

 

Lebih lanjut, Refaat dkk. (2021) mengklarifikasi aksi antivirus NPRL terhadap COVID-19. Oleh karena itu, liposom merupakan transporter biokompatibel yang dapat dibuat dari lipid dengan fungsi biofisik dan dimuati molekul dari beberapa lingkungan hidrofilik dan lipofilik (Sheikholeslami dkk., 2022). Konstituen lipofilik, seperti PRO, seringkali diintegrasikan ke dalam lapisan ganda lipid untuk regulasi (Refaat dkk., 2021). NPRL telah menunjukkan beberapa aktivitas biologis seperti efek antivirus (Refaat dkk., 2021), sifat antimikroba, dan efek antioksidan (Aytekin dkk., 2020). Setelah penapisan literatur, tidak ada data yang tersedia mengenai penggunaan NPRL dalam mengatasi dampak buruk HS siklik terhadap kesehatan dan kinerja ayam pedaging. Beberapa penelitian sebelumnya (Shalmany dan Shivazad 2006; Attia dkk., 2014; Shaddel dkk., 2017; AL-Kahtani dkk., 2022; Hsiao dkk., 2022) telah mengungkapkan bahwa pakan broiler yang diperkaya dengan PRO dapat bermanfaat bagi kesehatan dan performa broiler dengan meminimalkan peradangan/stres oksidatif dan meningkatkan fungsi imun serta respons antioksidan. Kami berhipotesis bahwa NPRL dalam pakan akan mendukung kesehatan, imunitas, dan performa pertumbuhan ayam broiler yang mengalami HS siklik. Sejauh pemahaman kami, belum ada penelitian yang mengeksplorasi dampak NPRL terhadap komponen darah, pertumbuhan, karakteristik imun, dan modulasi mikrobiota pada ayam broiler yang mengalami stres panas. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengkaji dampak NPRL terhadap pertumbuhan, status redoks serum, mikrobiota, dan gen terkait inflamasi pada ayam broiler yang terpapar stres panas siklik.

 

BAHAN DAN METODE

 

Pernyataan Etika

Semua uji coba pada hewan telah dilakukan sesuai dengan prosedur yang disetujui oleh Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Institusional. Penelitian ini dilakukan di Universitas Tabuk, Arab Saudi.

 

Persiapan Liposom Nano-Propolis

 

PRO diperoleh dari Nature Care Company (Riyadh, Arab Saudi). Mengikuti protokol (Mutalik dkk., 2014), NPRL disiapkan melalui teknik hidrasi lapisan tipis konvensional dengan sedikit modifikasi. Singkatnya, PRO, kolesterol, dan lesitin kedelai dicampur dan dilarutkan dalam campuran pelarut organik (metanol dan kloroform, 1:2 v/v). Kemudian, campuran tersebut diuapkan dengan rotary evaporator hingga campuran pelarut organik menguap sepenuhnya. Setelah itu, nanoliposomal PRO diperoleh. NPRL ditambahkan ke dalam pakan sesuai dengan protokol penelitian. Morfologi NPRL dideteksi dengan JEM-2100F TEM (JEOL, Jepang) (Gbr. 1).

Gambar 1.

 

Morfologi liposom nano-propolis dideteksi menggunakan JEM-2100F TEM (JEOL, Jepang), dan citra TEM menunjukkan bahwa NPRL memiliki morfologi sferis dan tidak ada agregasi (A). Histogram distribusi ukuran partikel (rata-rata/nm) ditentukan dari TEM (B).

 

Rancangan Penelitian dan Manajemen Unggas

 

Sebanyak 240 ekor anak ayam broiler Ross-308 jantan berumur satu hari ditimbang secara individual dan didistribusikan secara acak ke dalam 4 perlakuan investigasi yang identik (6 ulangan, masing-masing terdiri dari 10 ekor). Selama periode penelitian, unggas-unggas tersebut terpapar kondisi stres panas siklik (34°C dari pukul 09.00 hingga 17.00 dan 24°C untuk sisa waktu tersebut, dengan RH 65–70%). Unggas diberi pakan basal yang disuplemen dengan berbagai tingkat NPRL, yaitu 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan. Dosis NPRL ditambahkan sesuai dengan penelitian sebelumnya (Meligy dkk., 2023). Semua unggas ditempatkan dalam kandang baja tahan karat dengan paparan cahaya terus-menerus dan akses tak terbatas ke air dan pakan. Berdasarkan pedoman yang diuraikan dalam Ross Broiler Commercial Management Guide, anak ayam broiler dipelihara dari umur 1 hingga 10 hari. Dari umur 10 hingga 35 hari, kelompok-kelompok tersebut mengikuti rekomendasi yang diberikan dalam panduan yang sama (Corzo dkk., 2008). Pakan (Tabel 1) diformulasikan dalam bentuk mash dan dibagi menjadi 3 fase (starter untuk umur 1–10 hari, grower untuk umur 11–25 hari, dan finisher untuk umur 26–35 hari) untuk memenuhi kebutuhan nutrisi spesifik ayam.

 

Tabel 1. Bahan dan komposisi kimia dari pakan starter, grower, dan finisher yang digunakan dalam penelitian ini

Bahan	Starter	Grower	Finisher
	(1–10 hari)	(11–25 hari)	(26–35 hari)
Bungkil kedelai, 46%	37	32,2	24,4
Minyak kedelai	2,7	2,5	3,7
Jagung kuning	52,6	56,8	62,7
Tepung gluten jagung, 60%	3,5	4,2	5,1
Kalsium karbonat	1,1	1,1	1,05
Natrium bikarbonat	0,15	0,15	0,2
DL-Metionin, 99%	0,28	0,32	0,3
L-Lisin HCl, 98%	0,18	0,21	0,32
Dikalium fosfat	1,8	1,8	1,8
Garam	0,3	0,3	0,3
Kolin klorida, 60%	0,04	0,04	0,04
L-Treonin	0,05	0,08	0,09
Premiks	0,3	0,3	0,3

 

Analisis kimia berdasarkan bahan kering (DM)	Starter	Grower	Finisher
AME (kkal)	3000	3050	3150
Protein kasar, %	23,02	21,05	19,04
Fosfor tersedia, %	0,48	0,48	0,44
Natrium, %	0,18	0,18	0,18
Kalsium, %	0,96	0,96	0,87
Klorida, %	0,24	0,24	0,24

 

Campuran Hero (Hero pharm, Kairo, Mesir).

 

Komposisi (per 3 kg): Vitamin A 12.000.000 IU, vitamin D3 2.500.000 IU, vitamin E 10.000 mg, vitamin K3 2.000 mg, vitamin B2 5.000 mg, vitamin B1 1.000 mg, vitamin B6 1.500 mg, vitamin B12 10 mg, asam folat 1.000 mg, biotin 50 mg, asam pantotenat 10.000 mg, niasin 30.000 mg, yodium 300 mg, mangan 60.000 mg, zat besi 30.000 mg, seng 50.000 mg, selenium 100 mg, tembaga 4.000 mg, dan kobalt 100 mg.

 

Indeks pertumbuhan

 

Pada akhir penelitian, kami memperkirakan semua indeks terkait pertumbuhan, termasuk berat badan akhir (BBLR), rasio konversi pakan (FCR), dan pertambahan berat badan (PBB). BBLR dihitung pada akhir penelitian (setelah 35 hari perlakuan). BBLR akhir ditentukan dengan mengurangi BBLR setiap minggu dari berat badan awal (BBLR, g). Asupan pakan dihitung setiap minggu untuk setiap kandang, dan total asupan pakan (TFI, g) dihitung. Berdasarkan data yang diperoleh untuk BBLR (g), dan TFI (g), kami menghitung FCR sebagai berikut (TFI, g/BBLR, g).

 

Ciri Karkas

 

Setelah 35 hari perlakuan, ayam dipuasakan selama 12 jam. Lima ekor ayam dari setiap kelompok dipilih secara acak dan disembelih mengikuti proses Islam (Addeen dkk., 2014). Bobot karkas, hati, dan ampela dinilai dan dilaporkan dalam gram per kilogram berat hidup pada saat penyembelihan. Pengukuran dilakukan terhadap karkas, bobot potong, dan jeroan. Bobot potong dihitung dengan membagi jumlah bobot karkas dan bobot jeroan dengan bobot tubuh hidup.

 

Pengumpulan Sampel

 

Sampel darah (n = 6 pada setiap kelompok) dikumpulkan dari vena sayap ke dalam tabung steril, kemudian darah yang terkumpul dibiarkan pada suhu ruangan untuk memisahkan serum. Setelah 2 jam, sampel disentrifugasi pada 3000 g selama 20 menit. Hewan dikorbankan dengan dislokasi tulang leher mengikuti prosedur Islam. Setelah eksanguinasi dan eviserasi, seluruh bagian gastrointestinal segera dipisahkan. Sampel isi sekum dikumpulkan dan diawetkan pada suhu -20°C untuk penilaian mikrobiota. Jaringan hati diekstraksi dan dibekukan pada suhu -80°C hingga digunakan untuk analisis ekspresi gen. Untuk menilai pemeriksaan histopatologi, sampel hati dan usus diambil dan segera dimasukkan ke dalam formalin 10%.

 

Uji Metabolit Darah

 

Kreatinin, urea, gamma-glutamil transferase (GGT), dan bilirubin total dievaluasi menggunakan metode kolorimetri dengan kit komersial yang disediakan oleh Diamond Diagnostics Com., (Giza, Mesir), sesuai dengan panduan produsen. Aktivitas lisosom serum (LYZ) dinilai berdasarkan prosedur Micrococcus lysodeikticus mengikuti metodologi (Zhang dkk., 2005; Liu dkk., 2010). Kit ELISA untuk imunoglobulin serum IgG (No. Kat. MBS260043) dan IgM (No. Kat. MBS687565) disediakan oleh Biosourece Company menggunakan teknik ELISA sandwich antibodi ganda mengikuti metode sebelumnya dari Zhang dkk. (2005). Oksida nitrat (NO; ab272517) dan mieloperoksidase (MYO; ab285308) dinilai dalam serum ayam pedaging menggunakan metode kolorimetri mengikuti protokol (Liu dkk., 2010) dan (Zhang dkk., 2005), masing-masing menggunakan kit yang disediakan oleh perusahaan ABcam. Malondialdehid (MDA) dinilai untuk mengidentifikasi peroksidasi lipid dalam serum setelah (Richard dkk., 1992). Biomarker terkait antioksidan, termasuk superoksida dismutase (SOD), glutation (GSH), dan katalase (CAT), dinilai (Marklund dkk., 1974) dengan metode kolorimetri menggunakan kit komersial (Diamond Diagnostics, Mesir) sesuai dengan pedoman produsen dalam serum ayam pedaging.

 

Mikrobiota Sekum

 

Pada akhir pengujian, kandungan sekum unggas (6 ekor/kelompok) dikumpulkan untuk memperkirakan komunitas mikrobiota sebagai respons terhadap penambahan NPRL dalam pakan dengan HS siklik. Jumlah total bakteri (TBC), Salmonella, Enterococci, total ragi, jumlah E. coli, dan BAL (jumlah Lactobacillus) diperkirakan. Sampel digesta dihomogenkan dalam PBS (1 mL) dan diencerkan secara serial. Pengenceran kemudian dilapisi pada media agar selektif duplikat untuk menghitung klaster bakteri target. Salmonella, TBC, Enterococci, Lactobacillus spp., dan total ragi dihitung pada agar nutrisi pengeluaran, agar MacConkey, agar Lactobacillus MRS Agar (LMRS), dan agar dekstrosa kentang, masing-masing, berdasarkan metode (Tuohy et al., 2002) Cawan kemudian disimpan pada suhu 37°C selama 24 jam dalam lingkungan aerobik untuk mikroba, dan 1 minggu pada suhu 25°C untuk jamur, dan kemudian klaster dihitung.

 

Pemeriksaan Histologis

 

Setelah penyembelihan, rongga perut unggas (n = 3 dari setiap kelompok) dibuka untuk mengambil jaringan hati dan usus untuk pemeriksaan histologis. Sampel dicuci dengan PBS dan direndam dalam formalin 10% selama 3 hari. Selanjutnya, spesimen didehidrasi dengan etanol konsentrasi bertahap, dibersihkan dengan xilena, dan terakhir dijenuhkan dalam parafin (Tarek dkk., 2013). Spesimen dipotong menjadi irisan setebal 2 μm menggunakan mikrotom. Irisan-irisan ini ditempatkan dalam bak apung bersuhu 37°C, ditempelkan pada kaca objek, dan dikeringkan. Irisan-irisan tersebut kemudian diwarnai menggunakan prosedur hematoksilin dan eosin. Pemeriksaan mikroskopis dilakukan untuk mendeteksi perubahan jaringan, dan gambar diambil menggunakan kamera digital (Al-Mufarrej dkk., 2019).

 

Analisis Ekspresi Gen

 

Jaringan hati digunakan untuk mengukur ekspresi gen inflamasi seperti interleukin-4 (IL-4), inducible nitric oxide synthase (iNOS), tumor necrosis factor α (TNFα), interferon-gamma (IFNγ), dan nuclear factor kappa B (NFκB). RNA diisolasi dari jaringan hati menggunakan reagen TRIzol (Invitrogen). RNA yang telah diisolasi diperiksa kemurniannya menggunakan spektrofotometer NanoDrop (260/280). Kit reverse transcription QuantiTect digunakan dengan 2 μg RNA total untuk sintesis cDNA, dan heksamer primer acak digunakan dalam reaksi RT-PCR 2-tahap. PCR rutin dan elektroforesis gel dilakukan untuk memvalidasi semua primer sebelum PCR waktu nyata (TaKaRa PCR Thermal Cycler Dices, Takara, Shiga, Jepang). PCR waktu nyata dilakukan, dan metode 2−ΔΔCT digunakan untuk analisis (Livak dan Schmittgen, 2001). Gen GAPDH digunakan sebagai kontrol endogen. Urutan primer yang digunakan dalam penelitian ini disajikan pada Tabel 2.

 

Tabel 2. Nama gen, serta urutan primer forward dan reverse yang digunakan dalam penelitian ini.

Nama gen	Urutan nukleotida (5’ - 3’)	Panjang produk (bp)	Nomor akses GenBank
Inos	F: ACCAAGGACTTACAGGTGTGG R: CTCAGGTCCTGCTGAACAGT	153	NM_204961.2
IFNγ	F: TTCAGCGGTTCATCAGAGGG R: AGCCACAAGGGCTACTCCTA	214	NM_205149.2
IL-4	F: CCTCCCTCAAGGTAAGGCTC R: GAGCAATGTGCCCAGAGTGT	156	NM_001007079
TNF-α	F: CGCCGTGGTGAACAGACT R: CGGTGCCATACCTCCATCTC	148	XM_046900549.1
NFκB	F: CCCATGGTAACTCGGGACAG R: ATACGGTCCATCTGCTGTTCG	208	NM_205134.1
GAPDH	F: TCAAATGGGCAGATGCAGGT R: TGATGGCATGGACAGTGGTC	230	NM_205518

 

¹ IL-4: Interleukin 4; IFNγ: interferon gamma; iNOS: inducible nitric oxide synthase; TNF-α: tumor necrosis factor alpha; NF-κB: nuclear factor kappa B.

 

Analisis Statistik

 

Data diedit menggunakan Microsoft Excel versi 16 (Microsoft Corporation, Redmond, WA). Hasil yang diperoleh diperiksa untuk sebaran normal dan homogenitas menggunakan uji Shapiro–Wilk. Data kemudian dianalisis dengan SPSS (Versi 21.0; IBM Co., Chicago, IL) menggunakan uji ANOVA satu arah (one-way ANOVA).

 

Perbandingan ganda antar-mean dilakukan menggunakan uji rentang berganda Duncan (Duncan’s multiple range test). Nilai P < 0,05 dianggap menunjukkan perbedaan yang signifikan.
Data disajikan sebagai rata-rata ± simpangan baku. Grafik dibuat menggunakan perangkat lunak GraphPad Prism versi 9.0 (GraphPad, University of California San Diego).

 

Performa Pertumbuhan

 

Bobot badan akhir (FBW) dan pertambahan bobot badan (FBWG) ayam broiler yang diberi pakan mengandung NPRL lebih tinggi (P < 0,05) dibandingkan ayam pada kelompok HS (Tabel 3). Kelompok NPRL250 dan NPRL400 menunjukkan hasil terbaik untuk FBW dan FBWG.

 

Suplementasi NPRL pada tingkat 250 atau 400 mg/kg pakan secara signifikan memperbaiki rasio konversi pakan (FCR) (P < 0,001). Ayam broiler yang mengalami stres panas memiliki total konsumsi pakan (TFI) dan FCR yang lebih tinggi dibandingkan kelompok yang diberi NPRL.

Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan bahwa suplementasi NPRL dapat meningkatkan pertumbuhan dan efisiensi penggunaan pakan pada ayam broiler yang dipelihara dalam kondisi stres panas (Tabel 3).

 

Tabel 3. Pengaruh penambahan NPRL dalam pakan terhadap parameter performa pertumbuhan ayam broiler yang dipelihara dalam kondisi stres panas siklik.

Item (%)	Kelompok Perlakuan¹				SEM	Nilai P
	HS	NPRL100	NPRL250	NPRL400
IBW (g)	41,75	42,00	42,00	41,50	0,277	0,924
FBW (g)	2330,00ᶜ	2428,75ᵇ	2505,00ᵃ	2523,75ᵃ	22,045	<0,001
BWG (g)	2288,25ᶜ	2386,75ᵇ	2463,00ᵃ	2482,25ᵃ	22,041	<0,001
TFI (g)	4377,50ᵃ	4202,50ᵇ	4110,00ᶜ	4107,50ᶜ	28,97	<0,001
FCR (g pakan/g pertambahan bobot)	1,91ᵃ	1,76ᵇ	1,66ᶜ	1,65ᶜ	0,027	<0,001
IBW (g)	41,75	42,00	42,00	41,50	0,277	0,924

---

¹HS = stres panas; NPRL100, NPRL250, dan NPRL400 = suplementasi NPRL masing-masing sebesar 100, 250, dan 400 mg/kg pakan.
Huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang signifikan (P < 0,05).

 

Singkatan:
IBW, initial body weight (bobot badan awal);
FBW, final body weight (bobot badan akhir);
BWG, body weight gain (pertambahan bobot badan);
TFI, total feed intake (total konsumsi pakan);
FCR, feed conversion ratio (rasio konversi pakan; g pakan/g pertambahan bobot badan).

ᵃ–ᶜ Nilai rata-rata pada baris dengan huruf berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik (P < 0,05).
SEM: standard error of the mean (galat baku rerata).

¹ Ayam dipelihara dalam kondisi stres panas siklik dan diberi pakan yang diperkaya nano-propolis liposomes (NPRL) pada berbagai tingkat suplementasi, yaitu 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan.

 

Hematologi Darah

 

Seperti ditunjukkan pada Tabel 4, kadar hemoglobin, sel darah merah (red blood cells / RBC, kecuali pada kelompok NPRL400), dan trombosit meningkat secara nyata pada semua kelompok yang diberi perlakuan NPRL dibandingkan dengan kelompok HS. Kelompok NPRL250 dan NPRL100 memiliki jumlah RBC lebih tinggi dibandingkan kelompok lainnya (P < 0,01), sedangkan kelompok NPRL400 menunjukkan nilai trombosit tertinggi.

 

Ayam yang diberi pakan mengandung NPRL pada tingkat 100, 250, atau 400 mg/kg menunjukkan penurunan nilai limfosit (P < 0,01), sel darah putih (white blood cells / WBC; P < 0,001), dan monosit (P < 0,05) dibandingkan kelompok tanpa perlakuan. Variabel hematologi lainnya tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan (P > 0,05) akibat suplementasi NPRL dalam pakan.

 

Tabel 4. Pengaruh suplementasi NPRL dalam pakan terhadap parameter hematologi darah ayam broiler yang dipelihara pada kondisi cekaman panas siklik.

 

Parameter	Kelompok Perlakuan¹				SEM	Nilai P
	HS	NPRL100	NPRL250	NPRL400
Indeks Eritrogram
Hemoglobin (mg/dL)	9,50ᵇ	11,64ᵃ	10,98ᵃ	10,79ᵃ	0,256	0,002
RBC (10⁶/μL)	3,56ᵇ	4,71ᵃ	4,36ᵃ	3,71ᵇ	0,148	0,000
Trombosit (10³)	34,23ᶜ	39,61ᵇ	39,67ᵇ	42,23ᵃ	1,221	0,149
PCV (%)	27,47	29,33	28,00	28,66	0,468	0,664
Hematokrit (%)	37,17	37,26	37,09	37,25	0,065	0,818
MCV (μm³)	90,13	89,78	89,05	89,34	0,442	0,870
MCH (pg)	90,13	89,78	89,01	89,34	0,241	0,500
MCHC (g/dL)	29,01	30,63	29,45	29,21	0,359	0,587
Indeks Leukogram
WBC (10³/μL)	10,48ᵃ	8,29ᵇ	7,92ᵇ	7,86ᵇ	0,376	0,009
Limfosit (%)	86,25ᵃ	82,91ᵇ	81,28ᵇ	80,65ᵇ	0,780	0,017
Monosit (%)	1,22ᵃ	0,91ᵇ	0,93ᵇ	0,99ᵇ	0,042	0,005
Eosinofil (%)	0,38	0,36	0,34	0,41	0,007	0,146

 

¹ Ayam dipelihara di bawah kondisi cekaman panas siklik dan diberi pakan yang diperkaya dengan nano-propolis liposomes (NPRL) pada berbagai tingkat: 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan.

² RBCs: Red blood cells; PCV: Packed cell volume; WBC: White blood cells; MCV: Mean corpuscular volume; MCH: Mean corpuscular hemoglobin; MCHC: Mean corpuscular hemoglobin concentration.

ᵃ–ᶜ Nilai rata-rata dalam baris yang diikuti huruf berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik (P < 0,05).

Setiap nilai mewakili rata-rata dari 6 ekor ayam per perlakuan. SEM: standard error of the mean.
Data dianalisis menggunakan perangkat lunak SPSS (Versi 21.0; IBM Co., Chicago, IL) dengan uji ANOVA satu arah. Perbandingan ganda antar-mean dilakukan menggunakan uji rentang berganda Duncan.

 

Sifat Karkas

 

Dampak suplementasi pakan dengan nano-propolis liposomes (NPRL) pada tingkat 0, 100, 250, dan 400 mg/kg pakan disajikan pada Tabel 5. Berdasarkan data tersebut, tidak terdapat perbedaan yang signifikan (P > 0,05) di antara seluruh parameter karkas yang dievaluasi, termasuk hati, ampela, persentase karkas, dan jeroan, pada ayam pedaging yang dipelihara di bawah kondisi stres panas siklik dan diberi pakan yang disuplementasi dengan NPRL.

 

Tabel 5. Dampak suplementasi pakan dengan NPRL terhadap sifat karkas pada ayam pedaging yang dipelihara di bawah stres panas siklik.

Item (%)²	Kelompok Eksperimen¹	SEM	P value
	HS	NPRL100	NPRL250
Karkas	77,12	78,00	77,71
Persentase karkas (Dressing)	82,13	82,63	82,47
Hati	2,39	2,34	2,43
Ampela	1,89	1,91	1,90
Jantung	0,44	0,46	0,46
Jeroan (Giblet)	4,69	4,64	4,64

 

¹ Ayam yang dipelihara di bawah stres panas siklik dan diberi pakan yang disuplementasi dengan nano-propolis liposomes (NPRL) pada berbagai tingkat: 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan.

² Nilai rata-rata pada baris yang sama tidak berbeda secara signifikan (P < 0,05). Setiap nilai mewakili rata-rata dari 5 ayam per perlakuan. SEM: standar error rata-rata. Data dianalisis menggunakan SPSS (Versi 21.0; IBM CO., Chicago, IL) dengan uji ANOVA satu arah. Perbandingan ganda antar rata-rata dilakukan menggunakan uji Duncan.

 

Metabolit Serum

 

Tabel 6 menunjukkan pengaruh suplementasi NPRL terhadap metabolit darah ayam pedaging yang mengalami stres panas, termasuk kreatinin, urea, total bilirubin, dan gamma-glutamil transferase (GGT). Nilai kreatinin terendah terlihat pada kelompok NPRL250 dan NPRL400 (P < 0,001), sedangkan tidak terdapat perbedaan signifikan antara kelompok HS dan NPRL100 (P > 0,05) untuk kreatinin dan urea darah. Kelompok NPRL250 menunjukkan nilai urea terendah dibandingkan perlakuan lain (P < 0,001). Ayam pada kelompok NPRL400 memiliki kadar total bilirubin dan GGT terendah. Nilai total bilirubin pada NPRL100 dan NPRL250 relatif sama (P > 0,05). Semua kelompok yang diberi NPRL menunjukkan kadar GGT darah lebih rendah (P < 0,001) dibandingkan kelompok kontrol.

 

Tabel 6. Pengaruh NPRL terhadap metabolit darah pada ayam pedaging yang dipelihara di bawah stres panas siklik.

Item²	Kelompok penelitian¹	SEM	P value
	HS	NPRL100	NPRL250
Fungsi hati
Kreatinin, mg/dL	1,87a	1,76a	1,42b
Urea, mg/dL	82,35a	82,79a	66,20c
Fungsi ginjal
Total bilirubin, mg/dL	0,96a	0,810b	0,786b
GGT², IU/L	108,00a	68,33c	87,67b

 

¹ Ayam dipelihara di bawah stres panas siklik dan diberi pakan yang difortifikasi dengan nano-propolis liposom (NPRL) pada berbagai kadar; 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan.

² Gamma-glutamyl transferase (GGT). Setiap nilai merupakan rata-rata dari 6 ayam per perlakuan. Data dianalisis menggunakan SPSS (Versi 21.0; IBM CO., Chicago, IL) dengan uji ANOVA satu arah. Perbandingan ganda dilakukan menggunakan Duncan's multiple-range tests.
a–d Nilai rata-rata dalam baris yang memiliki huruf berbeda berbeda secara signifikan (P < 0,05). SEM: standar error rata-rata.

 

Biomarker Imunologis dan Terkait Oksidatif

 

Tabel 7 menjelaskan potensi efek suplementasi NPRL dalam pakan terhadap respons imun dan antioksidan ayam yang dipelihara di bawah stres panas siklik. Aktivitas LYZ pada ayam pedaging secara signifikan menurun akibat pemberian NPRL 250 atau 400 mg/kg pakan (P < 0,001). Nilai LYZ tertinggi tercatat pada kelompok HS, sedangkan kelompok NPRL100 menunjukkan nilai menengah (P < 0,001). Ayam yang diberi NPRL250 dan NPRL100 memiliki kadar IgG lebih tinggi (P < 0,05) dibanding kelompok lainnya. Sementara itu, ayam yang diberi NPRL 400 mg/kg pakan menunjukkan kadar IgM tertinggi.

 

Terkait biomarker stres oksidatif, suplementasi NPRL dalam pakan menurunkan kadar MYO dan MDA secara signifikan dibanding kelompok HS (P < 0,001). Kadar nitric oxide meningkat secara bermakna tergantung dosis (P < 0,001). Dalam status antioksidan, aktivitas SOD dan GSH meningkat secara signifikan seiring meningkatnya dosis NPRL (P < 0,001). Tidak ditemukan perbedaan kadar CAT serum di antara semua kelompok perlakuan dan HS (P = 0,79).

 

Tabel 7. Dampak suplementasi NPRL dalam pakan terhadap biomarker oksidatif dan imun adaptif pada ayam pedaging yang dipelihara di bawah stres panas siklik

Item²	Kelompok perlakuan¹	SEM	P value
	HS	NPRL100	NPRL250
Fungsi Imun
LYZ, µg/mL	230.00a	174.66b	160.33c
IgG, ng/mL	19.00c	39.00a	40.667a
IgM, ng/mL	13.33c	31.66b	30.00b
Stres Oksidatif
MYO, nmol/mL	23.33a	13.00b	12.66b
NO, nmol/mL	1.73d	2.087b	1.99c
MDA, nmol/mL	2.99a	2.60b	2.56b
Biomarker Antioksidan
SOD, mM/L	3.43b	3.627b	3.65b
GSH, mM/L	1.46c	1.37bc	1.82b
CAT, mM/L	2.44	2.47	2.49

 

¹ Ayam yang dipelihara di bawah stres panas siklik dan diberi pakan yang diperkaya nano-propolis liposom (NPRL) pada berbagai level; 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan.

² IgM dan IgG, imunoglobulin; MYO, myeloperoksidase; LYZ, aktivitas lisosom; NO, nitric oxide; MDA, malondialdehida; SOD, superoxide dismutase; GSH, glutathione; CAT, katalase.

a–d Nilai rata-rata pada baris dengan huruf berbeda berbeda secara signifikan (P < 0,05).

Setiap nilai mewakili rata-rata 6 ekor ayam per perlakuan. Data dianalisis menggunakan SPSS (Versi 21.0; IBM CO., Chicago, IL) dengan uji ANOVA satu arah. Perbandingan berganda antar rata-rata dilakukan dengan Duncan’s multiple-range test. SEM: standar error of the mean.

 

Hitungan Mikrobiota

 

Pakan penelitian secara signifikan memengaruhi komunitas mikroba usus (kecuali ragi) pada ayam pedaging yang dipelihara di bawah stres panas siklik (Gambar 2). Kelompok yang diberi NPRL secara signifikan menurunkan jumlah Salmonella spp. (Gambar 2B) dan E. coli (Gambar 2E) dibandingkan dengan kelompok HS (P < 0,001).

 

Jumlah bakteri penghasil asam laktat (Gambar 2D) tertinggi diamati pada kelompok NPRL250 dan NPRL100 (P < 0,001). Total bakteri (TBC, Gambar 2A) meningkat signifikan pada semua kelompok yang diberi NPRL, dengan hasil terbaik pada kelompok NPRL400. Jumlah Enterococci (Gambar 2C) pada ayam pedaging menurun signifikan setelah penambahan 250 atau 400 mg NPRL/kg pakan.

 

Fortifikasi pakan dengan NPRL secara signifikan menurunkan jumlah bakteri patogen (Salmonella, E. coli, dan Enterococci), serta meningkatkan total jumlah bakteri dan bakteri penghasil asam laktat pada ayam pedaging di bawah stres panas siklik. Sebaliknya, NPRL tidak memberikan efek signifikan terhadap jumlah ragi dalam mikrobiota sekum ayam, seperti ditunjukkan pada Gambar 2F.

 

Gambar 2.

 

(A–F). Pengaruh suplementasi pakan dengan NPRL terhadap kuantifikasi mikrobiota usus, termasuk total bakteri (A), Salmonella spp. (B), Enterococci (C), bakteri penghasil asam laktat (D), E. coli (E), dan ragi (F) pada ayam pedaging. Ayam dipelihara di bawah stres panas siklik dan diberi pakan yang difortifikasi dengan nano-propolis liposom (NPRL) pada berbagai tingkat; 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan.

a–c Nilai rata-rata dalam baris yang membawa huruf berbeda menunjukkan perbedaan signifikan secara statistik (P < 0,05). Setiap nilai merupakan rata-rata dari 6 ayam per perlakuan. SEM: standar error dari rata-rata. Analisis dilakukan menggunakan ANOVA satu arah. Gambar dibuat menggunakan perangkat lunak GraphPad Prism versi 9.0 (GraphPad).

 

Modulasi Transkriptomik

 

Gambar 3 menjelaskan bahwa ayam yang diberi pakan dengan NPRL (250 mg/kg pakan) menunjukkan penurunan ekspresi gen IFNγ secara signifikan (Gambar 3B; P < 0,001), sementara kedua kelompok lain (NPRL100 dan NPRL400) menunjukkan hasil yang serupa (P > 0,05). Penambahan NPRL dalam pakan juga menurunkan secara signifikan ekspresi gen iNOS (Gambar 3A). Semua ayam yang diberi perlakuan menunjukkan ekspresi gen IL-4 (Gambar 3C) dan TNF-α (Gambar 3D) lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol (P < 0,001). Selain itu, kelompok NPRL100 menunjukkan ekspresi gen TNF-α tertinggi dibandingkan kelompok lain (P < 0,001).

 

Gambar 3.

 

Tingkat Transkripsi Gen Inflamasi

 

Tingkat transkripsi gen yang mengkodekan peradangan, termasuk iNOS (A), IFNγ (B), IL4 (C), TNFα (D), dan NFκB (E) pada jaringan hati ayam broiler yang diekspos stres panas siklikal dan diberi pakan yang difortifikasi dengan NPRL pada berbagai tingkat; 0 (HS), 100 (NPRL100), 250 (NPRL250), dan 400 (NPRL400) mg/kg pakan. Setiap nilai merupakan rata-rata dari 6 ayam per perlakuan. Hasil disajikan sebagai rata-rata ± standar error dari rata-rata (SEM, batang error). a–c Nilai rata-rata pada kolom dengan huruf berbeda menunjukkan perbedaan signifikan secara statistik (P < 0,05). Analisis dilakukan menggunakan ANOVA satu arah. Gambar dibuat dengan perangkat lunak GraphPad Prism versi 9.0 (GraphPad).

Kelompok NPRL400 dan NPRL250 secara signifikan menurunkan mRNA NFκB (Gambar 3E) dibandingkan kelompok NPRL100 dan HS (P < 0,001). Secara keseluruhan, NPRL secara signifikan menurunkan ekspresi semua gen inflamasi.

 

Pemeriksaan Histologis

 

Seperti ditunjukkan pada Gambar 4, stres panas siklikal (HS) menyebabkan penumpukan vena sentral dengan tingkat nekrosis hati yang terlihat jelas dan disertai sel inflamasi mononuklear (Gambar 4A). Demikian pula, kelompok HS menunjukkan dilatasi sinusoid, degenerasi hepatosit dengan vakuola sitoplasma besar, infiltrasi darah, dan edema interstisial dengan sel Kupffer (Gambar 4A).

 

Ayam broiler yang diberi pakan difortifikasi dengan 100 mg NPRL/kg pakan (Gambar 4B) menunjukkan perbaikan sedang pada arsitektur hati mereka. Sementara itu, kelompok perlakuan lain, NPRL250 (Gambar 4C) dan NPRL400 (Gambar 4D), menampilkan parenkim hati normal dengan struktur hepato-portal dan sinusoid yang normal.

 

Ayam broiler yang diberi pakan kontrol dan diekspos HS (Gambar 5A) menunjukkan nekrosis sel kriptus dan sel villus yang belum matang (CD, panah merah), kerusakan sedang pada tinggi villus (VH, panah hitam), serta kerusakan pada sel epitel. Gambar 5B menunjukkan perubahan morfometri usus sedang, dengan beberapa sel kriptus nekrotik terlihat. Lebih lanjut, ayam yang diekspos HS siklikal dan diberi 250 (Gambar 5C) atau 400 (Gambar 5D) mg NPRL/kg pakan menunjukkan penampilan histologis CD (panah merah) dan VH (panah hitam) yang sebagian besar normal, mempertahankan permeabilitas usus, dan memiliki sel epitel sehat.

 

Gambar 4.

 

(A–D). Dampak Pemberian NPRL dalam Pakan terhadap Jaringan Hati Ayam Broiler yang Terpapar Stres Panas Siklikal. Ayam dipelihara dalam kondisi stres panas siklikal dan diberi pakan yang difortifikasi NPRL pada berbagai level; 0 (HS; Gambar A), 100 (NPRL100; Gambar B), 250 (NPRL250; Gambar C), dan 400 (NPRL400; Gambar D) mg/kg pakan. Skala = 20 μm, n = 3.

Jaringan hati ayam yang terpapar stres (Gambar 4A) menunjukkan vena sentral yang melebar dan kongesti, dengan tingkat nekrosis hati yang jelas serta infiltrasi sel inflamasi mononuklear (panah hitam). Ayam yang diberi 100 mg NPRL menunjukkan perbaikan sedang pada arsitektur hati mereka (Gambar 4B). Bagian hati pada kelompok NPRL250 (Gambar 4C) dan NPRL400 (Gambar 4D) menunjukkan struktur hepato-portal yang normal, termasuk vena sentral dan sel parenkim, dengan penurunan jumlah sel inflamasi yang diinduksi oleh HS (Gambar 4A).

 

Fambar 5.

 

(A–D). Dampak Pemberian NPRL dalam Pakan terhadap Jaringan Usus Ayam Broiler yang Terpapar Stres Panas Siklikal. Ayam dipelihara dalam kondisi stres panas siklikal dan diberi pakan yang difortifikasi NPRL pada berbagai level; 0 (HS; Gambar A), 100 (NPRL100; Gambar B), 250 (NPRL250; Gambar C), dan 400 (NPRL400; Gambar D) mg/kg pakan. Skala = 100 μm, n = 3.

Ayam broiler yang diberi pakan kontrol dan terpapar HS (Gambar 5A) menunjukkan nekrosis sel kriptus dan sel vilus yang belum matang (CD, panah merah) serta kerusakan sedang pada tinggi vilus (VH, panah hitam). Gambar 5B menunjukkan perubahan morfometri usus yang sedang, dengan beberapa sel kriptus yang mengalami nekrosis. Kelompok perlakuan (NPRL250; Gambar C) dan (NPRL400; Gambar D) menunjukkan tampilan histologis CD (panah merah) dan VH (panah hitam) yang sebagian besar normal.

 

PEMBAHASAN

 

Ayam broiler merupakan sumber protein hewani yang sangat baik untuk konsumsi manusia. Namun, perubahan iklim berdampak negatif terhadap kesehatan dan pertumbuhan broiler, yang menyebabkan kerugian ekonomi signifikan di industri broiler. Oleh karena itu, penting untuk mengurangi efek stres panas (HS) pada broiler melalui pendekatan yang berkelanjutan. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa HS siklikal menurunkan FBW, ADG, dan TFI, sekaligus meningkatkan FCR pada broiler. Namun, fortifikasi pakan dengan NPRL dapat meningkatkan ADG, FBW, dan TFI, serta memperbaiki FCR.

 

Selain itu, penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian NPRL dalam pakan meningkatkan hematologi darah dan status redoks, memodulasi mikrobiota, serta mengurangi jalur inflamasi dan stres oksidatif pada broiler yang terpapar HS. Hasil positif ini menunjukkan bahwa nanoteknologi dapat menjadi suplemen pakan yang bermanfaat bagi broiler untuk mengatasi dampak negatif HS siklikal. Sejalan dengan hasil kami, penambahan propolis (hingga 250 mg/kg) dalam pakan broiler secara signifikan meningkatkan berat badan dan asupan pakan (Açıkgöz et al., 2005; Shalmany dan Shivazad, 2006). Selain itu, Attia et al. (2014) menjelaskan bahwa pemberian propolis (300 mg/kg pakan) meningkatkan FBW dan FCR dibandingkan kontrol.

 

Propolis dapat mengurangi efek negatif HS, sebagaimana dilaporkan oleh Mahmoud et al. (2015), yang menemukan bahwa PRO (250 atau 300 mg/kg pakan) dapat digunakan sebagai aditif pakan aman untuk meningkatkan ketahanan terhadap panas melalui peningkatan aktivitas berjalan dan pengurangan perilaku terengah-engah pada ayam. Selain itu, penambahan ekstrak etanol PRO (0,5–3 g) dalam pakan broiler yang terpapar HS (41°C) meningkatkan berat badan dan pemanfaatan pakan (Prakatur et al., 2019). Propolis dapat merangsang enzim pencernaan, meningkatkan kecernaan nutrien, serta meningkatkan TFI dan indeks pertumbuhan pada ayam broiler.

 

Shaddel et al. (2017) menyatakan bahwa PRO (2 g/kg pakan) meningkatkan indeks pertumbuhan dan efisiensi pakan ayam broiler. Perlakuan PRO (1 g/kg pakan) secara signifikan meningkatkan FBWG, FBW, dan TFI broiler (AL-Kahtani et al., 2022). Peningkatan FBW yang ditunjukkan dalam penelitian ini dapat mencerminkan potensi PRO sebagai promotor pertumbuhan efektif pada broiler maupun spesies unggas lainnya (Attia et al., 2014; Refaat et al., 2021; AL-Kahtani et al., 2022). Secara keseluruhan, efisiensi pakan (tingginya asupan pakan dan rendahnya FCR) juga meningkat pada broiler yang diberi PRO (Shalmany dan Shivazad, 2006; Shaddel et al., 2017; AL-Kahtani et al., 2022).

 

Nano-emulsi EO (campuran cengkeh, kayu manis, dan oregano; 400 mg/kg pakan) telah terbukti meningkatkan performa pertumbuhan broiler (Meligy et al., 2023). Sejalan dengan itu, dilaporkan bahwa nanokarier liposomal berisi resveratrol (hingga 150 mg/kg) meningkatkan laju pertumbuhan pada broiler yang terstres (Kishawy et al., 2023). Peningkatan faktor ini juga telah dilaporkan pada penggunaan propolis mentah, yang dikaitkan dengan peningkatan rasa pakan oleh asam benzoat dan flavonoid propolis, yang selanjutnya meningkatkan kecernaan protein. Peningkatan kecernaan nutrien pada broiler setelah fortifikasi dengan minyak esensial dapat diatribusikan pada peranannya dalam meningkatkan sekresi dan aktivitas enzim pencernaan.

 

Penjelasan lain diberikan oleh Kishawy et al. (2023) dan Meligy et al. (2023), yang menjelaskan bahwa nano-emulsi meningkatkan kecernaan nutrien pada ayam broiler, sehingga secara signifikan meningkatkan pertumbuhan dan status kesehatan. Selain itu, Kishawy et al. (2023) menekankan bahwa NPRL dapat berfungsi sebagai promotor pertumbuhan penting untuk mengurangi dampak negatif HS pada pertumbuhan broiler. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa ayam yang menerima nano-emulsi EO (400 mg/kg) memiliki performa pertumbuhan dan efisiensi pakan yang lebih baik. Laju pertumbuhan broiler yang lebih tinggi setelah pemberian NPRL, berbeda dengan PRO bebas pada penelitian sebelumnya, dapat dikaitkan dengan penggabungan PRO ke dalam kandidat nano yang unggul (Aytekin et al., 2020; Kasote et al., 2022), yang meningkatkan kemampuannya dalam menetralkan stres oksidatif dan peroksidasi lipid akibat kondisi HS (Seven et al., 2008). Temuan ini mendukung gagasan bahwa terapi NPRL dapat dianggap sebagai strategi protektif pada broiler untuk mengurangi efek merugikan HS.

 

Selain itu, hemoglobin dan RBCs secara signifikan meningkat pada darah broiler yang diberi pakan dengan 300 mg PRO. Sejalan dengan temuan kami, telah dilaporkan bahwa propolis (2 g/kg pakan) meningkatkan PCV dan jumlah heterofil dalam serum broiler (Attia et al., 2014). Penambahan PRO (100 mg/100 g pakan) secara signifikan menurunkan rasio H/L dan meningkatkan viabilitas sel leukosit. Baru-baru ini, Khalati dan Al-Salhie (2023) menjelaskan bahwa pemberian NPRL (100 dan 150 μl per liter air minum) secara signifikan meningkatkan beberapa variabel darah, termasuk hemoglobin, RBC, dan PCV pada broiler.

 

Sejalan dengan data kami, Khalati dan Al-Salhie (2023) menemukan bahwa bobot relatif limpa, jantung, gizzard, hati, dan bursa tidak terpengaruh oleh penambahan nano-propolis (50, 100, dan 150 µl/L air minum). Berbeda dengan data kami, Attia et al. (2014) menemukan bahwa PRO (300 mg/kg pakan) secara signifikan meningkatkan persentase dressing pada broiler. Shaddel et al. (2017) melaporkan bahwa bubuk PRO yang ditambahkan pada pakan meningkatkan bobot relatif crop, panjang dan paha gizzard, serta menurunkan bobot relatif hati broiler. Ayam broiler yang diberi PRO memiliki nilai urea serum, kreatinin, dan enzim hati (aspartate aminotransferase) lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol (Shaddel et al., 2017).

 

HS yang berkepanjangan dan tidak terkendali dapat mengganggu keseimbangan antara mekanisme pertahanan antioksidan dan stres oksidatif dengan mengurangi kadar enzim antioksidan dan meningkatkan stres oksidatif. Peningkatan signifikan pada kadar enzim SOD, TAC, dan CAT diamati pada broiler yang diberi PRO. Diketahui bahwa ROS berlebih akibat HS dapat menyebabkan kerusakan oksidatif, termasuk peroksidasi lipid serta kerusakan oksidatif DNA dan protein (Azad et al., 2010). Selain itu, HS dapat menurunkan kecernaan nutrien, kemungkinan akibat ROS yang berlimpah yang mengoksidasi dan merusak jaringan hati dan usus. HS dapat mengubah status oksidatif sel, meningkatkan kadar ROS akibat berkurangnya produksi enzim pertahanan seperti GSH-Px, TAC, SOD, bersamaan dengan produksi MDA yang berlebihan (Zhang et al., 2006). ROS dapat memicu peroksidasi kolesterol, mengurangi fluiditas membran dan fungsi reseptor, sehingga mengganggu fungsi membran (Arulselvan dan Subramanian, 2007). Terdapat peningkatan dosis-tersier pada TAC dan aktivitas antioksidan serta penurunan signifikan pada transkrip gen terkait inflamasi di jaringan hati pada semua kelompok ayam yang diberi berbagai level NPRL.

 

HS dapat menurunkan pertumbuhan ayam broiler karena kemampuannya untuk menimbulkan ketidakseimbangan oksidatif, sindrom metabolik, dan penghambatan sistem imun. Disfungsi imun membuat ayam lebih rentan terhadap penyakit. Oleh karena itu, mendukung ayam dengan agen imunomodulator selama HS dapat meningkatkan status kesehatan dan kesejahteraan mereka serta membantu mereka melawan efek HS. AL-Kahtani et al. (2022) menjelaskan bahwa terjadi peningkatan signifikan pada kadar IgM, IgA, dan IgG pada broiler yang diberi PRO (1 g/kg pakan). Pemberian PRO secara substansial meningkatkan kadar IgM dan IgA pada broiler yang terstres. Suplementasi selama tiga hari dengan 300 atau 600 µg/mL secara konsisten meredakan ekspresi tinggi mRNA COX-2, TNF-α, dan iNOS di limpa (Hsiao et al., 2022). HS dapat meningkatkan secara signifikan kadar ekspresi IL-10 dan IL-4 sebagai sitokin anti-inflamasi, sementara co-treatment dengan PRO menurunkan peningkatan ini (Hsiao et al., 2022).

 

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian PRO dan bee pollen dalam pakan broiler berdampak positif pada morfo-fisiologi usus mereka (Prakatur et al., 2019). Studi sebelumnya sejalan dengan data kami, menunjukkan bahwa PRO dapat meningkatkan kesehatan usus dengan menaikkan rasio villus height/crypt depth dan mempertahankan permeabilitas usus serta integritas sel epitel. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa HS dapat merusak kesehatan usus dan integritas epitel broiler (Meligy et al., 2023; Won et al., 2023). Penambahan beberapa nanopartikel, seperti minyak esensial campuran yang dikapsulasi dalam liposom (Meligy et al., 2023), meningkatkan struktur usus broiler yang terkena HS, kemungkinan melalui efek imunomodulator dan antioksidatif NPRL. Selain itu, Shaddel et al. (2017) dan AL-Kahtani et al. (2022) menemukan bahwa PRO dapat memperbaiki morfologi dan keseimbangan bakteri di saluran pencernaan.

 

Pemberian NPRL secara signifikan meningkatkan VH (villus height). Menariknya, jumlah sel goblet meningkat pada perlakuan NPRL dalam kondisi HS. Hal ini kemungkinan karena NPRL terkait dengan sintesis mukin di sel goblet, dan tambahan PRO dalam bentuk nano dapat merangsang sintesis mukin, sehingga meningkatkan jumlah sel goblet (de Melo Garcia et al., 2022). PRO dilaporkan sebagai suplemen alami yang meningkatkan luas permukaan penyerapan rongga usus, sehingga meningkatkan ketersediaan nutrien dan metabolisme (Yen et al., 2017) dan akhirnya meningkatkan berat badan. Hasil yang menjanjikan dari penelitian ini menekankan pentingnya evaluasi lebih lanjut mengenai dosis suplemen yang diteliti, untuk memaksimalkan efek positifnya terhadap homeostasis usus dan, secara keseluruhan, kesehatan broiler.

 

HS dapat mengganggu keseimbangan populasi mikroba di usus broiler. Namun, perlakuan NPRL dalam penelitian ini membantu memulihkan keseimbangan mikrobiota usus, yang kemungkinan berkontribusi pada peningkatan performa dan kesehatan broiler. HS dapat memengaruhi mikrobiota broiler, menyebabkan ketidakseimbangan komunitas mikroba usus. Perlakuan NPRL dalam penelitian ini membantu mengembalikan keseimbangan mikrobiota usus, yang kemungkinan berkontribusi pada peningkatan performa dan kesehatan broiler dengan menurunkan jumlah Salmonella spp., Enterococci, dan E. coli. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa HS dapat memicu disbiosis mikrobiota (Shi et al., 2019; Ringseis et al., 2022). Sejalan dengan data kami, HS meningkatkan prevalensi E. coli, C. perfringens, dan Coliforms, sekaligus menurunkan jumlah Bifidobacterium dan Lactobacillus (Awad et al., 2019).

 

Disbiosis mikrobiota ditandai dengan meningkatnya bakteri patogen dengan mengorbankan bakteri menguntungkan (Awad et al., 2020). Ketidakseimbangan ini dapat menyebabkan malabsorpsi nutrien, disfungsi barrier usus, dan infeksi lokal. Dilaporkan bahwa PRO (1,5 g/kg pakan) dapat meningkatkan jumlah bakteri menguntungkan seperti bakteri asam laktat dan menurunkan bakteri patogen C. perfringens (Elsherif et al., 2021) pada broiler, sebagaimana diamati dalam penelitian ini. Hal ini kemungkinan menunjukkan potensi aksi antimikroba NPRL. Pemberian PRO dalam pakan dapat mempertahankan homeostasis mikrobiota dengan mengontrol protein yang terkait dengan inflamasi dan permeabilitas usus pada broiler (Kasote et al., 2022).

 

Namun, penelitian ini menunjukkan efek positif NPRL pada permeabilitas usus. Sejauh pengetahuan kami, belum ada penelitian sebelumnya yang menilai konsekuensi fortifikasi pakan dengan NPRL terhadap mikrobiota usus pada broiler yang terkena HS. Penelitian ini berfokus pada pengaruh pemberian NPRL terhadap pertumbuhan, respons imun dan inflamasi, serta mikrobiota usus broiler, khususnya dalam kondisi HS. Akan sangat bermanfaat untuk membandingkan dan menilai efek kelompok pakan yang digunakan dalam penelitian ini dengan kondisi normal, suatu perbandingan yang tidak dilakukan dalam penelitian saat ini. Oleh karena itu, diperlukan penelitian lanjutan untuk membandingkan potensi efek pemberian NPRL pada broiler dalam kondisi normal dan HS.

 

KESIMPULAN

 

Liposom telah terbukti sebagai nanocarrier yang efektif untuk menyampaikan propolis, meningkatkan bioaktivitas dan stabilitasnya. NPRL melindungi propolis dari kondisi lingkungan dan saluran pencernaan hingga mencapai jaringan target, sehingga meningkatkan efektivitas kerjanya. Hal ini didukung oleh peningkatan pertumbuhan pada ayam broiler yang diberi NPRL meskipun terpapar panas berlebih, karena NPRL mengurangi kerusakan oksidatif, mempertahankan kesehatan usus, dan meningkatkan kapasitas antioksidannya. Studi molekuler lebih lanjut menunjukkan potensi NPRL dalam memodulasi ekspresi gen inflamasi. Penelitian ini membuktikan, untuk pertama kalinya, bahwa NPRL dapat secara efektif mengurangi dampak stres panas pada ayam broiler.

 

DAFTAR PUSTAKA

1. Abdelnour S.A., Hassan M.A., Shehabeldin A.M., Omar M.E., Khalil W.A., Aman R.M. Effects of propolis-loaded nanoliposomes fortification in extender on buffalo semen cryopreservation. Sci. Rep. 2023;13:10621. doi: 10.1038/s41598-023-37424-2. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
2. Açıkgöz Z., Yücel B., Altan Ö. The effects of propolis supplementation on broiler performance and feed digestibility. Arch. Geflügelk. 2005;69:117–122. [Google Scholar]
3. Addeen A., Benjakul S., Wattanachant S., Maqsood S. Effect of Islamic slaughtering on chemical compositions and post-mortem quality changes of broiler chicken meat. Int. Food Res. J. 2014;21:897–907. [Google Scholar]
4. AL-Kahtani S.N., Alaqil A.A., Abbas A.O. Modulation of antioxidant defense, immune response, and growth performance by inclusion of propolis and bee pollen into broiler diets. Animals. 2022;12:1658. doi: 10.3390/ani12131658. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
5. Al-Mufarrej S., Al-Baadani H., Fazea E. Effect of level of inclusion of clove (Syzygium aromaticum) powder in the diet on growth and histological changes in the intestines and livers of broiler chickens. S. Afr. J. Anim. Sci. 2019;49:166–175. [Google Scholar]
6. Arulselvan P., Subramanian S.P. Beneficial effects of Murraya koenigii leaves on antioxidant defense system and ultra structural changes of pancreatic β-cells in experimental diabetes in rats. Chem.-Biol. Interact. 2007;165:155–164. doi: 10.1016/j.cbi.2006.10.014. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
7. Attia Y.A., Al-Hamid A.E.A., Ibrahim M.S., Al-Harthi M.A., Bovera F., Elnaggar A.S. Productive performance, biochemical and hematological traits of broiler chickens supplemented with propolis, bee pollen, and mannan oligosaccharides continuously or intermittently. Livest. Sci. 2014;164:87–95. [Google Scholar]
8. Awad E.A., Najaa M., Zulaikha Z.A., Zulkifli I., Soleimani A.F. Effects of heat stress on growth performance, selected physiological and immunological parameters, caecal microflora, and meat quality in two broiler strains. Asian-Aus. J. Anim. Sci. 2020;33:778–787. doi: 10.5713/ajas.19.0208. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
9. Awad E.A., null n., Zulkifli I., null n., Soleimani A.F., null n., Law F.L., null n., Ramiah S.K., null n., Mohamed-Yousif I.M., null n., Hussein E.A., null n., Khalil E.S., null n. Response of broilers to reduced-protein diets under heat stress conditions. World's Poult. Sci. J. 2019;75:583–598. [Google Scholar]
10. Aytekin A.A., Tuncay Tanrıverdi S., Aydın Köse F., Kart D., Eroğlu İ., Özer Ö. Propolis loaded liposomes: evaluation of antimicrobial and antioxidant activities. J. Liposome Res. 2020;30:107–116. doi: 10.1080/08982104.2019.1599012. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
11. Azad M., Kikusato M., Maekawa T., Shirakawa H., Toyomizu M. Metabolic characteristics and oxidative damage to skeletal muscle in broiler chickens exposed to chronic heat stress. Comparative Biochem. Physiol. Part A. 2010;155:401–406. doi: 10.1016/j.cbpa.2009.12.011. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
12. Corzo A., Dozier Iii W., Kidd M. Valine nutrient recommendations for Ross× Ross 308 broilers. Poult. Sci. 2008;87:335–338. doi: 10.3382/ps.2007-00307. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
13. da Silva V.P., van der Werf H.M., Soares S.R., Corson M.S. Environmental impacts of French and Brazilian broiler chicken production scenarios: An LCA approach. J. Environ. Manag. 2014;133:222–231. doi: 10.1016/j.jenvman.2013.12.011. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
14. de Melo Garcia P.H., Guerra R.R., de Oliveira J.S., de Lima Júnior D.M., de Almeida V.V.S., da Silva E.G., Ribeiro N.L. 2022. Red propolis extract in the diet of confined sheep: morphometric alterations of the digestive system. [DOI] [Google Scholar]
15. Elsherif H., Orabi A., Ali A., Samy A. Castor and propolis extracts as antibiotic alternatives to enhance broiler performance, intestinal microbiota and humoral immunity. Adv. Anim. Vet. Sci. 2021;9:734–742. [Google Scholar]
16. Hsiao F.S.-H., Artdita C.A., Hua K.-F., Tsai C.-J., Chien Y.-H., Chen Y.-W., Cheng Y.-H., Yu Y.-H. Optimization of emulsification conditions on ethanol extract of taiwanese green propolis using polysorbate and its immunomodulatory effects in broilers. Animals. 2022;12:446. doi: 10.3390/ani12040446. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
17. Kasote D., Bankova V., Viljoen A.M. Propolis: chemical diversity and challenges in quality control. Phytochem. Rev. 2022;21:1887–1911. doi: 10.1007/s11101-022-09816-1. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
18. Khalati R.H., Al-Salhie K.C. Hematological parameters and relative weight of some organs for broiler chickens supplemented by different levels of nano propolis. Texas J. Agric. Biol. Sci. 2023;13:115–121. [Google Scholar]
19. Kishawy A.T.Y., Ibrahim D., Roushdy E.M., Moustafa A., Eldemery F., Hussein E.M., Hassan F.A.M., Elazab S.T., Elabbasy M.T., Kanwal R., Kamel W.M., Atteya M.R., Zaglool A.W. Impact of resveratrol-loaded liposomal nanocarriers on heat-stressed broiler chickens: Effects on performance, sirtuin expression, oxidative stress regulators, and muscle building factors. Front. Vet. Sci. 2023;10 doi: 10.3389/fvets.2023.1137896. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
20. Kpomasse C.C., Oke O.E., Houndonougbo F.M., Tona K. Broiler production challenges in the tropics: a review. Vet. Med. Sci. 2021;7:831–842. doi: 10.1002/vms3.435. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
21. Liu D., Guo Y., Wang Z., Yuan J. Exogenous lysozyme influences Clostridium perfringens colonization and intestinal barrier function in broiler chickens. Avian Pathol. 2010;39:17–24. doi: 10.1080/03079450903447404. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
22. Liu W.-C., Huang M.-Y., Balasubramanian B., Jha R. Heat stress affects jejunal immunity of Yellow-Feathered broilers and is potentially mediated by the microbiome. Front. Physiol. 2022;13:1022. doi: 10.3389/fphys.2022.913696. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
23. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2− ΔΔCT method. Methods. 2001;25:402–408. doi: 10.1006/meth.2001.1262. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
24. Lu P., Xue W., Zhang X., Wu D., Ding L., Wen C., Zhou Y. Heat-induced protein oxidation of soybean meal impairs growth performance and antioxidant status of broilers. Poult. Science. 2019;98:276–286. doi: 10.3382/ps/pey344. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
25. Mahmoud U.T., Abdel-Rahman M.A.M., Darwish M.H.A., Applegate T.J., Cheng H.-w. Behavioral changes and feathering score in heat stressed broiler chickens fed diets containing different levels of propolis. Appl. Anim. Behav. Sci. 2015;166:98–105. [Google Scholar]
26. Marklund S., Marklund G. Involvement of the superoxide anion radical in the autoxidation of pyrogallol and a convenient assay for superoxide dismutase. Eur. J. Biochem. 1974;47:469–474. doi: 10.1111/j.1432-1033.1974.tb03714.x. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
27. Meligy A.M.A., El-Hamid M.I.A., Yonis A.E., Elhaddad G.Y., Abdel-Raheem S.M., El-Ghareeb W.R., Mohamed M.H.A., Ismail H., Ibrahim D. Liposomal encapsulated oregano, cinnamon, and clove oils enhanced the performance, bacterial metabolites antioxidant potential, and intestinal microbiota of broiler chickens. Poult. Sci. 2023;102 doi: 10.1016/j.psj.2023.102683. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
28. Mutalik S., Salian S.R., Avadhani K., Menon J., Joshi H., Hegde A.R., Kumar P., Kalthur G., Adiga S.K. Liposome encapsulated soy lecithin and cholesterol can efficiently replace chicken egg yolk in human semen cryopreservation medium. Syst. Biol. Reprod. Med. 2014;60:183–188. doi: 10.3109/19396368.2014.902521. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
29. Part C.E., Edwards P., Hajat S., Collins L.M. Prevalence rates of health and welfare conditions in broiler chickens change with weather in a temperate climate. Royal Soc. Open Sci. 2016;3 doi: 10.1098/rsos.160197. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
30. Prakatur I., Miskulin M., Pavic M., Marjanovic K., Blazicevic V., Miskulin I., Domacinovic M. Intestinal morphology in broiler chickens supplemented with propolis and bee pollen. Animals. 2019;9:301. doi: 10.3390/ani9060301. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
31. Puvača N., Tufarelli V., Giannenas I. Essential oils in broiler chicken production, immunity and meat quality: review of Thymus vulgaris, Origanum vulgare, and Rosmarinus officinalis. Agriculture. 2022;12:874. [Google Scholar]
32. Rafeeq M., Bilal R.M., Batool F., Yameen K., Farag M.R., Madkour M., Elnesr S.S., El-Shall N.A., Dhama K., Alagawany M. Application of herbs and their derivatives in broiler chickens: a review. World's Poult. Sci. J. 2023;79:95–117. [Google Scholar]
33. Refaat H., Mady F.M., Sarhan H.A., Rateb H.S., Alaaeldin E. Optimization and evaluation of propolis liposomes as a promising therapeutic approach for COVID-19. Int. J. Pharmac. 2021;592 doi: 10.1016/j.ijpharm.2020.120028. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
34. Richard M.J., Portal B., Meo J., Coudray C., Hadjian A., Favier A. Malondialdehyde kit evaluated for determining plasma and lipoprotein fractions that react with thiobarbituric acid. Clin. Chem. 1992;38:704–709. [PubMed] [Google Scholar]
35. Ringseis R., Eder K. Heat stress in pigs and broilers: role of gut dysbiosis in the impairment of the gut-liver axis and restoration of these effects by probiotics, prebiotics and synbiotics. J. Anim. Sci. Biotechnol. 2022;13:1–16. doi: 10.1186/s40104-022-00783-3. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
36. Seven P.T., Seven I., Yılmaz M., Şimşek Ü. The effects of Turkish propolis on growth and carcass characteristics in broilers under heat stress. Anim. Feed Sci. Technol. 2008;146:137–148. [Google Scholar]
37. Shaddel-Tili A., Eshratkhah B., Kouzehgari H., Ghasemi-Sadabadi M. The effect of different levels of propolis in diets on performance, gastrointestinal morphology and some blood parameters in broiler chickens. Bulg. J. Vet. Med. 2017;20:215–224. [Google Scholar]
38. Shalmany S.K., Shivazad M. The effect of diet propolis supplementation on Ross broiler chicks performance. Int. J. Poult. Sci. 2006;5:84–88. [Google Scholar]
39. Sheikholeslami B., Lam N.W., Dua K., Haghi M. Exploring the impact of physicochemical properties of liposomal formulations on their in vivo fate. Life Sci. 2022;300 doi: 10.1016/j.lfs.2022.120574. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
40. Shi D., Bai L., Qu Q., Zhou S., Yang M., Guo S., Li Q., Liu C. Impact of gut microbiota structure in heat-stressed broilers. Poult. Sci. 2019;98:2405–2413. doi: 10.3382/ps/pez026. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
41. Tarek K., Mohamed M., Omar B., Hassina B., Messaouda I. Histological changes in liver and pectoral muscles of broiler chickens slaughtered with and without naming of Allah. Int. J. Poult. Sci. 2013;12:550–552. [Google Scholar]
42. Tuohy K.M., Ziemer C.J., Klinder A., Knöbel Y., Pool-Zobel B.L., Gibson G.R. A human volunteer study to determine the prebiotic effects of lactulose powder on human colonic microbiota. Microb. Ecol. Health Dis. 2002;14:165–173. [Google Scholar]
43. Won S.Y., Han G.P., Kwon C.H., Lee E.C., Kil D.Y. Effect of individual or combination of dietary betaine and glycine on productive performance, stress response, liver health, and intestinal barrier function in broiler chickens raised under heat stress conditions. Poult. Sci. 2023;102 doi: 10.1016/j.psj.2023.102771. [DOI] [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
44. Yen C.-H., Chiu H.-F., Wu C.-H., Lu Y.-Y., Han Y.-C., Shen Y.-C., Venkatakrishnan K., Wang C.-K. Beneficial efficacy of various propolis extracts and their digestive products by in vitro simulated gastrointestinal digestion. Lwt. 2017;84:281–289. [Google Scholar]
45. Zhang H., Guo Y., Yuan J. Effects of conjugated linoleic acids on growth performance, serum lysozyme activity, lymphocyte proliferation,and antibody production in broiler chicks. Arch. Anim. Nutr. 2005;59:293–301. doi: 10.1080/17450390500247808. [DOI] [PubMed] [Google Scholar]
46. Zhang L., Wang L., Shi Z., Wei X., Chen J., Zhao R. Expression of SGLT1 mRNA in duodenum, jejunum and ileum of weaning pigs and the effect of cysteamine on it. J. Agric. Biotechnol. 2006;14:850–854. [Google Scholar]

 

SUMBER

Eldiasty, J. G., Al-Sayed, H. M. A., Farsi, R. M., Alghotmi, K. M., Alatawi, F. S., Al Ghabban, A. J., Alnawwar, W. H., Alatawi, A. O., & Hamdy, H. M. (2024). The beneficial impacts of nano-propolis liposomes as an anti-stressor agent on broiler chickens kept under cyclic heat stress. Poultry Science, 103(6), 103695.

#nanopropolis 

#strespanas 

#broilersehat 

#nanoteknologiunggas 

#pakanunggul