Kedua, lokus terpusat
yang diekspresikan dalam sel PEL laten mengkodekan protein v-IRF3 (atau
LANA-2), anggota superfamili IRF yang secara dominan menghambat fungsi IRF seluler
tertentu dan dengan demikian menghambat induksi interferon (Rivas et al, 2001).
Juga telah disarankan bahwa protein ini dapat merusak fungsi p53, tetapi
bagaimana hal ini dicapai tidak diketahui. Gen ini sampai saat ini ditemukan
hanya diekspresikan dalam sel PEL dan bukan pada sel KS - menunjukkan bahwa
beberapa gen latensi mungkin spesifik-limfoid.
Baru-baru ini (Chandriani dan Ganem, 2010), lokus laten
ketiga telah diidentifikasi - yang mengkode protein K1. Gen ini berada pada
tingkat latensi yang sangat rendah, dan diregulasi selama pertumbuhan litik.
Sifat-sifat ini membuatnya sulit untuk diidentifikasi sebagai gen laten, karena
di sebagian besar garis sel laten tingkat latar belakang reaktivasi spontan
membuatnya sulit untuk memastikan apakah mRNA K1 berasal dari sel yang
terinfeksi secara laten atau litik. Pembatasan pengenceran percobaan RT-PCR telah
menyelesaikan kontroversi ini, dan menunjukkan bahwa K1 memang dinyatakan dalam
latensi. K1 adalah protein yang menarik karena merupakan molekul pensinyalan
yang bekerja secara konstitutif yang meniru pensinyalan melalui reseptor
antigen sel B (Lee et al 1998; Lagunoff et al 1999; Lee et al 2002; Lee et al
2005). Ini secara analog analog dengan output LMP2 EBV, dan menimbulkan
pertanyaan apakah K1 dan LMP2 memainkan peran yang sama dalam sejarah alami
infeksi sel B yang persisten. Saat ini, bagaimanapun, terlalu sedikit yang
diketahui tentang latensi KSHV dalam inang manusia untuk mengetahui apakah
analogi ini akurat - kita tidak tahu, misalnya, apakah sel B positif KSHV harus
melintasi pusat germinal, atau apakah mereka melanjutkan untuk membangun tinggal
di sel B memori yang berumur panjang.
Pada bagian berikut, kami fokus pada produk gen KSHV laten
yang fungsinya telah diselidiki paling intensif.
(i) LANA
Yang paling dipahami dari fungsi-fungsi ini adalah LANA
(antigen nuklir terkait-Latensi), yang jelas memainkan peran dalam persistensi
dan pemisahan episom virus laten yang secara formal analog dengan EBNA-1
(Ballastas et al 1999). LANA adalah polipeptida besar dengan domain N- dan
C-terminal yang unik yang dipisahkan oleh wilayah pusat yang terdiri dari
serangkaian pengulangan asam. Domain C-terminal berisi wilayah pengikatan DNA
spesifik-urutan yang mengenali sekuens yang dikonservasi dalam pengulangan terminal
(TR) DNA virus (Ballestas & Kaye 2001; Garber dkk 2001, 2002; Cotter dkk
2001). Urutan ini mewakili inti dari asal replikasi plasmid virus laten
(disebut ori-P), dan dalam tes sementara, LANA dapat memicu putaran sintesis
DNA dari orp-plasmid yang mengandung - dengan cara yang mengingatkan replikasi
asal EBV laten oleh EBNA-1 (Hu et al 2002; Lim et al 2002; Grundhoff &
Ganem 2003). Seperti EBNA-1, LANA juga memainkan peran dalam pemisahan plasmid
virus ke sel anak dalam proliferasi sel (Ballestas et al 1999; Cotter et al
1999). Domain N-terminal LANA mengandung motif yang terutama bertanggung jawab
atas kepatuhannya terhadap kromosom metafase (Piolot et al, 2001), meskipun
wilayah pengikatan kromosom kedua dalam domain terminal C LANA juga telah diidentifikasi
(Viejo-Borbolla et al 2005; Kelley-Clarke et al 2007a, 2007b, 2009). Studi
terbaru menunjukkan bahwa banyak aktivitas pengikatan kromosom disebabkan oleh
interaksi N-terminus LANA dengan histones H2A dan H2B (Barbera et al 2006).
Tetapi LANA juga berinteraksi dengan protein terkait kromatin lainnya seperti
Brd2 / RING3 dan Brd4 (Platt et al (1999); Viejo-Borbolla et al (2005);
Mattsson et al (2002); Ottinger et al 2006) dan meCBP2 (Krivithas et al 2002),
yang kontribusinya untuk kegiatan ini masih dalam studi. Interaksi Brd2 dan
Brd4 dimediasi oleh wilayah terminal-C LANA, dan telah diusulkan bahwa
interaksi ini dapat mengikat LANA untuk interfase kromosom melalui interaksi
antara Brd2 / 4 dan histone asetat H3 dan H4. meCBP2 berikatan dengan daerah
pengikatan kromosom N-terminal, dan ekspresi homolog manusia dalam sel tikus
membuat LANA mampu mengikat kromosom tikus.
Dengan berinteraksi dengan kromosom mitosis di satu sisi dan
episom virus di sisi lain, LANA dapat secara efektif menambatkan genom KSHV
untuk menjadi tuan rumah kromosom dan memungkinkan DNA KSHV untuk “menumpang”
ke inti anak perempuan selama mitosis. sel yang berkembang biak dengan cepat,
seperti sel PEL in vivo atau sel yang diabadikan dalam kultur. Dalam penilaian
peran dalam biologi KSHV, penting untuk dicatat bahwa latensi dalam sel PEL
sangat stabil, hal yang sama mungkin tidak berlaku untuk sel yang dilindungi
laten lainnya.
Ketika garis sel yang
paling aktif tumbuh (endotel, epitel atau fibroblastik) terinfeksi dalam
kultur, genom KSHV dengan cepat hilang kecuali jika seleksi genetik diterapkan
untuk pemeliharaannya (Grundhoff & Ganem 2004). Hal yang sama berlaku untuk
sel KS yang dikultur langsung dari biopsi KS (Flamand et al 1996; Aluigi et al
1996; Dictor et al 1996). Dengan demikian, sistem LANA / oriP berfungsi secara
tidak efisien di sebagian besar sel; Namun, percobaan dalam sel yang dikultur
menunjukkan bahwa modifikasi epigenetik cis-acting dapat menstabilkan episome
(Grundhoff et al 2004; Skalsky et al 2007a). Sifat pasti dari modifikasi ini
belum ditentukan. Agaknya, sel-sel PEL telah mengalami adaptasi in vivo,
sedangkan sebagian besar sel spindel KS tidak.
Temuan ini memiliki
implikasi patogenetik yang penting. Studi imunohistokimia dari lesi KS awal dan
akhir menunjukkan bahwa pada awal evolusi KS, hanya sekitar 30% sel spindel
yang mengandung KSHV laten (Dupin et al, 1999), sedangkan pada lesi lanjut
hampir semua sel spindel terinfeksi secara laten (Staskus et al 1997). Dua
kesimpulan mengalir dari fakta ini. Pertama, sel-sel gelendong KS yang
terinfeksi secara laten nampaknya memiliki keuntungan pertumbuhan atau
kelangsungan hidup secara in vivo, meskipun mereka tidak ditransformasi in
vitro. Yaitu, apa pun kelebihan latensi KSHV yang diberikan secara in vivo, itu
jauh kurang dramatis daripada apa yang tes kultur sel kita saat ini diarahkan
untuk dideteksi. Ini mungkin halus seperti perpanjangan umur yang sederhana,
atau peningkatan resistensi terhadap apoptosis yang disebabkan oleh paparan
molekul pensinyalan pro-apoptotik di lingkungan mikro. Kedua, jika latensi
tidak stabil, dan jika itu memberikan keuntungan kelangsungan hidup atau
pertumbuhan, maka salah satu (i) sel harus mengalami perubahan epigenetik yang
menstabilkan plasmid (seperti dalam PEL) atau (ii) episom yang hilang selama
pembelahan sel harus diganti oleh infeksi ulang eksogen. Menariknya, bukti yang
konsisten dengan peristiwa terakhir telah terakumulasi dalam penelitian KS
baru-baru ini (lihat Ganem (2010) untuk ditinjau).
Apa artinya semua ini
untuk latensi dalam konteks alaminya - individu seropositif KSHV yang sehat?
Kita belum tahu, karena sifat sel B yang terinfeksi dalam latensi masih belum
ditetapkan. Jika, seperti dalam EBV, latensi terutama berada dalam sel B memori
yang jarang membagi, maka mungkin tidak ada seleksi evolusioner yang meyakinkan
untuk sistem yang sangat efisien untuk pemeliharaan plasmid. Menariknya,
meskipun sistem EBV EBNA-1 / oriP pada awalnya diyakini berfungsi sangat
efisien, EBV juga menampilkan ketidakstabilan luar biasa karena tidak adanya
seleksi genetik - menunjukkan bahwa mesin pemeliharaan latensi EBV dan KSHV
dapat berfungsi pada efisiensi yang sebanding serta oleh mekanisme umum.
Selain fungsinya dalam
pemeliharaan plasmid virus, LANA memiliki aktivitas tambahan yang mungkin juga
lebih langsung mempengaruhi perilaku sel yang terinfeksi secara laten. Ekspresi
LANA yang terisolasi di luar konteks infeksi mengungkapkan bahwa protein
menghambat transaktivasi yang dimediasi p53 - dan karenanya dapat memblokir
penangkapan siklus sel yang dimediasi p53 atau apoptosis (Fribourg et al 1999).
Konsisten dengan kegiatan ini, ekspresi LANA dalam sel endotel primer telah
terbukti memperpanjang kelangsungan hidup mereka dalam kultur (Watanabe et al
2003) meskipun tidak mengabadikannya. Namun, temuan bahwa sel-sel PEL manusia
yang mengekspresikan LANA masih menanggapi kerusakan DNA yang diinduksi
doxirubicin dengan aktivasi p53 dan penangkapan pertumbuhan menunjukkan bahwa
LANA tidak mengaburkan jalur p53 sepenuhnya (Petre, Sin dan Dittmer 2007). LANA
juga mengikat Rb dan merusak fungsi Rb (Radkov et al 2000), meskipun bukti dari
sel PEL juga menunjukkan bahwa gangguan ini hanya sebagian (Platt et al 2002).
Mitra interaksi LANA lainnya adalah GSK-3β, sebuah kinase yang menargetkan
protein sitosol β-catenin untuk ubiquitinasi dan penghancuran proteasomal
(Fujimoro et al 2003). LANA merelokasi
GSK-3β ke nukleus, sehingga memungkinkan sitosol β-catenin untuk lepas dari
kerusakan; kemudian dapat oligomerisasi dengan faktor transkripsi LEF, dan
heterodimer yang dihasilkan mengaktifkan program ekspresi gen proliferatif yang
mencakup c-myc, c-jun dan cyclin D. Sejalan dengan ini, ekspresi LANA telah
ditemukan untuk mempromosikan entri fase S.
LANA juga memiliki efek
pengaturan pada transkripsi yang berpotensi dapat mempengaruhi biologi sel yang
terinfeksi secara laten. Ekspresi LANA yang stabil dikaitkan dengan banyak
perubahan dalam ekspresi gen host, sebagaimana dinilai oleh profil array (Renne
et al, 2001). Ketika LANA terikat langsung dengan DNA, ia dapat menekan
transkripsi gen reporter yang berdekatan (Schwam et al 2000), suatu kegiatan
yang telah dikaitkan dengan perekrutan kompleks penekan mSin3 (Krivithas et al
2000) serta perekrutan pengubah epigenetik seperti meCBP2, Dnmt3a (Shamay et al
2006) dan histone methyltransferase SUV39H1 (Sakakibara et al 2004). Memang,
ekspresi LANA telah ditunjukkan untuk membungkam ekspresi TGF-β reseptor II,
mengganggu pensinyalan TGF dalam sel yang terinfeksi secara laten, menghasilkan
ketidakpekaan terhadap efek penghambatan pertumbuhan TGF-β (DiBartolo et al
2008).
LANA juga telah
diusulkan untuk secara negatif mengatur transkripsi gen litik virus (Li et al
2008), dan dengan demikian mempengaruhi kontrol latensi. Mekanisme potensial
termasuk (i) represi promotor RTA, yang dapat ditambatkan secara tidak langsung
melalui interaksi dengan Sp1 dan histones H2A / H2B (Lu, Day, Gao dan
Lieberman, 2006; Lan et al 2004) (ii) mengikat langsung LANA ke RTA (Lan et al
2004); (iii) pengikatan LANA ke RBPJk, sebuah kofaktor penting dari RTA, dengan
kemungkinan penargetan kompleks LANA yang represif ke situs RBP-Jk di promotor
litik kritis (Lan et al 2005) (Konsisten dengan peran untuk LANA dalam menekan
ekspresi gen litik) , Tindakan represif LANA pada program litik juga ditentang
oleh fosforilasi oleh kinase pim-1, yang ekspresinya memicu dan diperlukan
untuk reaktivasi litik (Cheng et al. 2009. Bajaj, B et al 2006). Penting untuk
disadari, Namun, bahwa sebagian besar sel yang terinfeksi oleh mutan
penghapusan LANA dari KSHV tidak secara spontan memasuki program litik (Li et
al 2008), menunjukkan bahwa ada jauh lebih banyak untuk kontrol latensi
daripada regulasi negatif dari siklus litik oleh LANA.
V-cyclin
Lokus latensi utama
juga mengkode v-cyclin, produk ORF72 dan homolog virus dari cyclin seluler D.
Seperti homolog selulernya, v-cyclin (Chang et al, 1996) mengaktifkan cdk6,
tetapi tidak seperti cyclin D, ia kurang aktif di CD4. Meskipun kedua cyclins
dapat memicu fosforilasi Rb yang dimediasi oleh cdk6, v-cyclin memperluas
spesifisitas substrat enzim, yang mengarah ke fosforilasi p27, histone H1, Id-2
dan cdc25a (Gooden-Kent et al 1997; Li et al 1997) . Ekspresi V-cyclin dapat
menginduksi entri fase-S dalam sel 3T3 diam, dan dapat mengatasi hambatan
pertumbuhan yang dimediasi-Rb yang diinduksi oleh penghambat cdk (Swanton et al
1997). Faktanya, kompleks v-cyclin / cdk6 kurang sensitif terhadap penghambatan
oleh penghambat cdk seperti p27; selain itu, fosforilasi p27 oleh v-cyclin-cdk6
menargetkannya untuk degradasi pada proteosom, lebih lanjut melepaskan cdk6
dari kontrol p27. (Ellis et al 1999, Mann et al 1999).
Karena seluler cyclin D
sangat sering terlibat dalam kanker manusia, banyak yang menganggap bahwa
ekspresi v-cyclin merupakan pusat onkogenesis KS, dan istilah
"onkogen" sering diterapkan pada lokus ini. Namun, ada sangat sedikit
bukti yang mendukung klaim ini. Tentu saja, kegiatan in-vitro yang dikutip di
atas konsisten dengan promosi pertumbuhan sel. Tetapi pengamatan eksperimental
langsung pada tumor yang berhubungan dengan KSHV pada manusia gagal untuk
mengkonfirmasi harapan yang diperoleh dari studi ekspresi in vitro
tersebut. Misalnya, terlepas dari
kenyataan bahwa ekspresi berlebih v-cyclin mendestabilkan p27 dalam sel yang
dikultur, tumor PEL yang mengekspresikan v-cyclin sering menampilkan ekspresi
p27 yang melimpah (Carbone et al 2000). Dan fakta bahwa banyak tumor PEL
menghapus p16INK4a menunjukkan bahwa terlepas dari aksi v-cyclin, fungsi Rb
tidak sepenuhnya dibatalkan dalam sel B yang terinfeksi secara laten; lesi
mutasi lebih lanjut harus terakumulasi dalam jalur ini untuk transformasi
penuh. Apa yang dilakukan v-cyclin dalam ekonomi sel sebelum munculnya mutasi
seperti itu masih belum jelas, tetapi penelitian terbaru tentang ekspresi
v-cyclin dalam sel endotel primer bersifat instruktif. Sementara ekspresi
v-cyclin memicu peningkatan entri fase S (dan amplifikasi centrosome), ini
diikuti oleh aktivasi respon kerusakan DNA yang ditandai dengan induksi
mekanisme pos pemeriksaan antiproliferatif (fosforilasi ATM dan kinase Chk2),
stabilisasi p53 dan penangkapan pertumbuhan yang kuat, dengan kemudian induksi
penuaan seluler. Banyak fitur ini direproduksi oleh infeksi EC primer dengan
KSHV itu sendiri, menunjukkan bahwa ini bukan hasil dari ekspresi berlebihan
v-cyclin. Selain itu, konsisten dengan data ini, Vershuren et al (2002)
menunjukkan bahwa dalam sel yang dikultur, hilangnya p53 memungkinkan sel untuk
bertahan hidup di hadapan ekspresi v-cyclin yang sedang berlangsung. Secara
keseluruhan, temuan menunjukkan bahwa efek utama dari paparan v-cyclin adalah
untuk menginduksi stres replikasi. Mengapa fungsi seperti itu dipilih dalam
evolusi virus tidak jelas, karena tampaknya membatasi proliferasi sel yang
terinfeksi secara laten. Tampaknya aman untuk mengatakan bahwa kita benar-benar
dalam kegelapan tentang peran sebenarnya protein enigmatic ini dalam infeksi
KSHV in vivo. MHV68 mengkodekan homolog protein ini, dan pemeriksaan sistem itu
(lihat di bawah) telah mengaitkan beberapa fenotipe dengan kehilangan mutasi
v-cyclin. Paling tidak, sistem itu dapat menyediakan cara untuk menghasilkan
beberapa hipotesis baru tentang bagaimana v-cyclin dapat berfungsi dalam KSHV.
v-FLIP
Gen ketiga dalam
kelompok latensi utama mengkodekan v-FLIP, polipeptida kecil yang terdiri dari
dua domain efektor kematian tandem (DED). Singkatan singkatan dari protein
penghambat FLICE, dengan FLICE menjadi nama awal untuk caspase teraktivasi Fas.
Nama v-FLIP berasal dari fakta bahwa protein tersebut homolog dengan protein
FLIP seluler, yang menghambat aktivasi caspase 8 oleh Fas-FasL sistem dengan
berinteraksi dengan protein adaptor seperti FADD melalui DED mereka (Thome et
al, 1997). Studi awal menunjukkan bahwa KSHV v-FLIP juga berbagi kegiatan ini
(Djerbi et al 1999, Belanger et al 2001), tetapi banyak kelompok gagal untuk
menegaskan hasil ini (lih. Chugh et al 2005). Sebaliknya, ada konsensus umum
bahwa KSHV v-FLIP adalah aktivator NFkB (Chaudhary et al 1999). Ini dicapai
melalui pengikatan protein ke subunit NEMO (atau γ) dari IkB kinase (IKK) (Liu
et al 2002; Field et al 2003; Bagneris et al 2008). Ikatan ini adalah acara
pengaktifan; fosforilasi IkB yang dihasilkan memicu proteolisis yang bergantung
pada ubiquitin di sitoplasma, melepaskan subunit NFkB yang terikat, yang
kemudian dapat bermigrasi ke dalam nukleus untuk mengaktifkan ekspresi gen.
Jalur alternatif aktivasi NFkB juga diregulasi oleh v-FLIP (Matta dan Chaudhary
2004).
Dalam konteks latensi,
aktivasi NFkB ini memiliki sejumlah konsekuensi. Pertama, aktivasi NFkB
menghalangi masuknya siklus litik dalam banyak (tetapi tidak semua) sel, dengan
demikian menstabilkan latensi. Penghambatan zat kimia (Brown et al 2003) atau
genetik (Grossmann dan Ganem, 2008) meningkatkan produksi spontan penanda
litik, seperti halnya knockdown yang dimediasi siRNA atau ablasi mutasi
ekspresi v-FLIP (Zhao et al 2007; Ye et al 2008) - dengan jelas menetapkan
bahwa aktivasi NFkB yang dimediasi FLIP bertentangan dengan regulasi gen
litik. Studi terbaru oleh Izumiya et al
(2009) mengungkapkan bahwa NFkB aktif secara langsung menghambat kemampuan RTA
untuk mengaktifkan gen litik, dengan (i) mengikat dan menyita kofaktor RTA
RBP-Jκ, dan (ii) menghalangi kemampuan RBPJuk untuk mengikat DNA, dan mekanisme
penting dimana RTA ditargetkan untuk banyak promotor litik virus. Meskipun
memuaskan bahwa gen laten dapat menstabilkan latensi dengan cara ini, sebuah
paradoks tetap: selama siklus litik, ada aktivasi dramatis NFkB (Sgarbanti et
al 2004; Sadagopan et al 2007; Grossmann dan Ganem 2008), mungkin karena
ekspresi beberapa gen virus, termasuk ORF 75, ORF K15 (Konrad et al 2009) dan
mungkin GPCR yang dikodekan oleh ORF74 (Schwarz dan Murphy 2001). Mengapa
induksi ini tidak mengganggu siklus litik tetap tidak jelas - mungkin aktivasi
NFkB terjadi setelah sebagian besar induksi gen yang dimediasi RTA selesai;
sebagai alternatif, mekanisme lain dapat diinduksi yang membatalkan atau
mengurangi efek penghambatan NFkB pada RTA.
Perlu dicatat bahwa
aktivasi angka-angka NFkB mencolok dalam program-program latensi dari ketiga
gammaherpesvirus yang sedang dipertimbangkan dalam ulasan ini. Dalam EBV, LMP-1
adalah aktivator konstitutif yang kuat dari NFkB, dan pensinyalan LMP-1
menghambat reaktivasi litik dari latensi (Adler et al 2002). Demikian pula,
bukti dari MHV68 menunjukkan bahwa, dalam sistem itu juga, aktivasi NFkB
diperlukan untuk menstabilkan latensi (lihat di bawah, dan Krug et al 2007).
Selain efek stabilisasi
pada latensi, NFkB dikenal untuk mengaktifkan program pro-inflamasi dan
anti-apoptosis pada banyak jenis sel. Aktivitas inflamasi disebabkan oleh
upregulasi sejumlah sitokin dan kemokin, sementara sinyal kelangsungan hidup
sel dianggap dimediasi oleh upregulasi faktor-faktor terkait reseptor Bcl-xL,
A1, dan TNF (TRAF) 1 dan 2, di antara faktor-faktor lainnya. Pemeriksaan
langsung produksi kemokin (Xu dan Ganem, 2008; Punj et al 2009) dan ekspresi
gen (Sakakibara et al 2009; Thurau et al 2009) dalam v-FLIP yang ditransduksi sel
HUVEC menegaskan induksi sejumlah besar faktor proinflamasi dan antiapoptotik .
Jelas, ekspresi v-FLIP dalam sel spindel KS yang terinfeksi secara laten
merupakan penyebab utama dari lingkungan mikro proinflamasi yang menjadi ciri
KS; protein latensi virus kedua, Kaposin B, juga dianggap berkontribusi penting
untuk aktivitas ini (lihat di bawah). Karena sel-sel endotel yang terinfeksi
tidak diabadikan secara in vitro, sulit untuk menilai kontribusi pensinyalan
antiapoptotik v-FLIP terhadap masa hidup sel gelendong, meskipun itu membuat
sel-sel lebih tahan terhadap anoikis (Efklidou et al 2008) dan terhadap
pembunuhan yang diinduksi superoksida (Thurau et al 2009). Namun, ekspresi
v-FLIP yang sedang berlangsung sangat penting untuk kelangsungan hidup sel PEL
- knockdown siRNA dari vFLIP (atau penghambatan aktivasi NFkB) dalam sel PEL
yang abadi memicu kematian sel B yang cepat (Guaspari et al 2004; Keller et al
2000).
Akhirnya, aktivasi NFkB
oleh vFLIP memiliki konsekuensi tambahan untuk sel-sel endotel yang terinfeksi:
hal itu menyebabkan mereka menjalani penataan ulang sitoskeleton aktin yang
menghasilkan bentuk memanjang ("spindel") sehingga karakteristik
endotelium yang terinfeksi di KS. (Grossmann et al 2006; Matta et al 2007).
Perubahan bentuk ini tidak diamati pada infeksi laten dari semua jenis sel
lain, dan mungkin mencerminkan induksi produk gen spesifik endotel. Apakah ini
penting untuk fenotip latensi pada endotelia, atau hanya epifenomenon, tidak
jelas.
Lokus Kaposin
Unit transkripsi utama
lainnya yang aktif dalam latensi mengkodekan keluarga protein Kaposin dan
serangkaian mikroRNA virus. Seperti yang dirangkum dalam Gambar 3, promotor
Kaposin laten menghasilkan mRNA bersambungan utama yang tubuhnya meliputi dua
set 23 nt. pengulangan langsung (DR) dari sekuens kaya-GC diikuti oleh ORF
pendek (60 kodon) yang disebut ORF-K12. (Yang kedua, promotor litik terletak
hanya 5 'ke DR, memungkinkan peningkatan regulasi kaposin lebih lanjut selama
pertumbuhan litik (Sadler et al 1999)). Awalnya,
hanya ORFK12 yang diakui memiliki potensi pengkodean, menghasilkan polipeptida
domain dua-transmembran yang sekarang disebut Kaposin A. Namun, setelah itu,
diakui bahwa DR juga dapat menghasilkan produk protein melalui inisiasi
translasi pada kodon CUG di tengah-tengahnya. Salah satu inititator CUG ini
menghasilkan Kaposin B, polipeptida kecil yang sebagian besar dihasilkan oleh
terjemahan urutan DR1 dan DR2; CUG kedua, yang terletak di kerangka bacaan yang
berbeda, memungkinkan DR1 dan DR2 diterjemahkan dalam bingkai dengan Kaposin A
untuk menghasilkan protein fusi yang disebut Kaposin C (Sadler et al 1999).
Kaposin A
Kaposin A adalah
polipeptida hidrofobik kecil yang ditemukan pada membran permukaan sel dan
intraseluler (Tomkowicz et al 2002). Ini awalnya menarik perhatian karena
ekspresi berlebih dari ORF ini pada fibroblast tikus yang diabadikan tetapi
tidak ditransformasi menyebabkan (tidak efisien) transformasi dalam kultur,
sebagaimana dinilai oleh pertumbuhan agar-agar lunak; klon yang dihasilkan
adalah tumorigenik pada tikus telanjang (Muralidhar et al 1998). Hal ini
menjadikan kaposin A kandidat yang jelas untuk berperan dalam deregulasi
pertumbuhan di KS dan PEL, walaupun fakta bahwa infeksi laten KSHV tidak
mengabadikan atau mengubah sel berarti bahwa hasilnya tidak dapat secara
langsung dialihkan untuk menjelaskan tumorigenesis KSHV secara in vivo.
Bagaimana fungsi Kaposin A tetap menjadi teka-teki. Data terbaik menunjukkan
bahwa Kaposin A mengikat cytohesin-1, GEF untuk GTPase keluarga ARF dan
regulator adhesi sel yang dimediasi integrin (Kliche et al, 2001). Bukti
genetik menunjukkan bahwa jalur ini terlibat dalam transformasi sel tikus,
tetapi hubungan transformasi tersebut dengan keuntungan pertumbuhan sel yang
terinfeksi KSHV in vivo tidak diketahui. Baru-baru ini, Kaposin A ditemukan
berinteraksi dengan Septin 4, aktivator proapoptosis caspase 3 yang diduga;
kaposin A mengikat antagonis efek proapoptosis septin 4 dalam sel transfected
dalam kultur, menunjukkan peran potensial untuk kaposin A dalam perpanjangan
umur (Lin et al 2007). Namun, peran tersebut belum ditunjukkan secara in vivo.
Kaposin B
Protein kecil ini
sebagian besar terdiri atas 23 repeat kaya prolin dan arginin yang berasal dari
terjemahan DRs 1 dan 2. Komposisi asam amino yang sederhana dan kurangnya motif
katalitik yang diketahui menunjukkan bahwa protein ini mungkin berfungsi
sebagai perancah atau adaptor protein, mendorong mencari protein yang
berinteraksi. Yang paling dipahami adalah MAP kinase-related protein kinase 2
(MAPKAPK2 atau MK2), target jalur pensinyalan p38 (McCormick dan Ganem, 2005).
MK2 ada dalam nukleus sebagai enzim tidak aktif; ketika jalur pAP MAP kinase
diaktifkan (oleh sinyal inflamasi, stres oksidatif atau syok osmotik), p38
memfosforilasi MK2, yang mengaktifkan aktivitas kinase dan juga menyebabkannya
mentranslokasi ke sitoplasma, di mana ia memfosforilasi banyak target hilirnya
(Duraisamy et al 2008). Beberapa di antaranya, seperti tristetraprolin (TTP),
bertindak untuk menstabilkan mRNA yang mengandung unsur-unsur kaya AU (AREs)
(Sandler dan Stoeklin 2008). ARE ditemukan di banyak sitokin dan mRNA faktor
pertumbuhan, dan karenanya aktivasi MK2 terkait dengan peningkatan regulasi
produksi sitokin. Yang penting, pengikatan MK2 oleh kaposin B adalah peristiwa
aktif, mempromosikan fosforilasi oleh p38 dan dengan demikian merangsang
pelepasan sitokin selama latensi (McCormick dan Ganem, 2005). Dengan demikian,
Kaposin B adalah gen KSHV laten kedua yang berkontribusi terhadap lingkungan
mikro proinflamasi di KS (v-FLIP menjadi yang pertama). Kedua gen memiliki mode
aksi yang saling melengkapi, dengan transkripsi sitokin v-FLIP yang
meningkatkan sementara Kaposin B memperpanjang paruh waktu dari transkrip yang
dihasilkan. Bersama-sama, gen-gen ini
memberikan penjelasan yang memuaskan untuk sifat inflamasi lesi KS. Namun,
mereka memunculkan paradoks yang lebih dalam. Pada sebagian besar virus DNA
besar, produk gen telah berevolusi menjadi tumpul alih-alih menumbuhkan respons
peradangan dan imun pejamu (Johnston dan McFadden 2003). Evolusi virus terutama
didorong oleh faktor-faktor yang mempengaruhi replikasi dan penyebaran virus;
patogenesis dan penyakit adalah tontonan, hanya relevan dalam situasi (mis.
infeksi saluran pernapasan atau diare) di mana penyakit meningkatkan penyebaran
virus. Kelangkaan KS relatif terhadap infeksi oleh KSHV (lihat di atas) berarti
bahwa ia tidak dapat memainkan peran utama dalam pembentukan evolusi genom
virus. Dengan demikian, kami menyimpulkan bahwa sesuatu tentang lingkungan
mikro inflamasi menguntungkan untuk replikasi dan penyebaran KSHV. Sebagai
contoh, perekrutan sel B yang sesuai atau monosit ke lokasi infeksi dapat
memfasilitasi infeksi limfoid yang lebih luas; selain itu, perubahan
permeabilitas lokal dapat membantu memastikan jalan keluar dan penyebaran sel
yang terinfeksi. Sayangnya, tidak adanya model hewan yang nyaman dari infeksi
KSHV telah menghambat pemeriksaan definitif masalah menarik ini.
Kaposin C
Sampai saat ini, tidak
ada penelitian yang diterbitkan telah memeriksa kaposin C secara rinci. Dengan
demikian, kita tidak tahu apakah aktivitas pensinyalan yang dikaitkan dengan
kapusin A atau B dibagi dengan kerabat mereka yang terikat membran.
MiRNA virus
Seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 3, unit transkripsi Kaposin juga mengkodekan 12
pra-miRNA, 10 di antaranya berasal dari intron dari mRNA Kaposin laten (2
sisanya ditemukan dalam tubuh transkrip). (Cai et al 2005; Samols et al 2005;
Cai et al 2006; Pfeffer et al 2005). Pra-miRNA ini dilestarikan dalam semua
isolat KSHV (Marshall et al 2007), tetapi tidak dilestarikan pada virus herpes
lainnya (Schafer et al 2007). 12 pre-miRNA KSHV sebenarnya menghasilkan 18
miRNA dewasa (Umbach dan Cullen 2010), terutama karena beberapa dari mereka
dapat menyumbangkan kedua helai prekursor jepit rambut mereka ke RISC. (Selain
itu, prekursor RNA untuk miR-K10 mengalami peristiwa pengeditan RNA dalam
urutan unggulannya yang menghasilkan miRNA yang terkait tetapi berbeda; Gandy
et al 2007). Karena mereka dinyatakan dalam latensi, mereka memiliki kesempatan
untuk menargetkan mRNA seluler dan viral dan dapat mempengaruhi fenotip sel
yang terinfeksi secara laten dengan cara yang penting.
Penelitian dengan gen
reporter dan garis sel yang terinfeksi akhir-akhir ini menunjukkan bahwa
beberapa KSHV miRs dapat menurunkan regulasi trombospondin, antagonis
angiogenesis yang dikenal - dengan demikian, mereka dapat berkontribusi pada
fenotipe neovaskular KS (Samols et al 2007). Salah satu miRNA virus, miRK11,
berbagi identitas urutan benih dengan miRNA inang limfoid spesifik (miR155)
yang targetnya mempengaruhi diferensiasi sel B (Skalsky dkk 2007b; Gottwein dkk
2007); miRNA ini mungkin memainkan peran penting dalam infeksi sel B dan
mungkin dalam pengembangan PEL. Demikian pula, beberapa miRNA virus telah
terbukti mengatur stabilitas latensi. Satu, miRK9-3p (sebelumnya K9 *),
menargetkan urutan dalam 3'RUT RTA; inaktivasi fungsional miRNA ini mengarah
pada peningkatan 2-3 kali lipat reaktivasi litik spontan (Bellare dan Ganem,
2009). Sebaliknya, microRNA virus lain, miRK5, menargetkan fungsi host
(BCLAF-1) yang menekan reaktivasi litik 2 kali lipat; sebagai hasilnya, miRNA
ini secara sederhana meningkatkan reaktivasi tersebut (Ziegelbauer et al 2009).
Fenotipe yang terakhir, yang basis molekulernya masih belum dipahami, mungkin
berkontribusi untuk mempertahankan reversibilitas latensi. Penting untuk
dicatat bahwa microRNA virus bukan penentu utama regulasi latensi - peran itu
termasuk dalam regulasi transkripsional RTA. Sebaliknya, mereka tampaknya
menjadi efektor tambahan yang memungkinkan untuk fine-tuning proses. Formulasi yang menarik membayangkan bahwa
miRK9-3p, misalnya, dirancang untuk menekan transkrip RTA yang menyimpang yang
timbul dari variasi stokastik kecil di tingkat dasar transkripsi (Bellare dan
Ganem, 2009). Dengan cara ini, miRNA mencegah "suara transkripsi"
dari memicu masuk yang tidak tepat ke dalam siklus litik.
#Virus
#KSHV
#Latensi
#Onkogenesis
#Imunologi
RSS Feed (xml)
