Deteksi dan karakterisasi molekuler Chlamydia psittaci dan Chlamydia abortus pada burung peliharaan paruh bengkok di Provinsi Buenos Aires, Argentina

ABSTRAK

Untuk menentukan keberadaan dan keragaman genetik Chlamydia spp. di wilayah timur laut Provinsi Buenos Aires, Argentina, dilakukan pengambilan swab konjungtiva, orofaring, kloaka, serta jaringan dari total 90 burung peliharaan jenis paruh bengkok dengan berbagai usia dan manifestasi klinis. Melalui metode molekuler, Chlamydiaceae terdeteksi pada 30% (27/90) sampel, di mana 70,3% (19/27) positif Chlamydia psittaci dan 14,9% (4/27) positif Chlamydia abortus. Sembilan sampel positif C. psittaci dianalisis berdasarkan sekuens gen ompA, dengan 8 sampel tergolong dalam genotipe A dan 1 sampel dalam genotipe B. Terdapat hubungan signifikan antara keberadaan Chlamydia spp. dan manifestasi tanda klinis yang sesuai dengan klamidiosis, serta dengan usia burung (kurang dari satu tahun). Laporan ini berkontribusi pada peningkatan pemahaman mengenai agen klamidia di negara kami.

 

ISI STUDI

 

Chlamydia psittaci, agen penyebab klamidiosis, adalah bakteri intraseluler obligat yang sangat menular dan tersebar di seluruh dunia.¹¹  Infeksi C. psittaci telah dilaporkan pada berbagai spesies burung dan mamalia, serta diakui sebagai salah satu penyakit zoonosis utama yang ditularkan oleh burung.¹⁵  Tingkat keparahan klamidiosis pada burung bervariasi tergantung pada spesies dan usia burung yang terinfeksi, serta genotipe klamidia yang terlibat. Infeksi dapat muncul tanpa gejala atau menimbulkan berbagai tanda klinis yang dapat menyebabkan penyakit parah dengan tingkat kematian yang tinggi.¹¹

 

C. psittaci awalnya diklasifikasikan menjadi 9 genotipe: A–F, E/B, M56, dan WC, menggunakan analisis sekuens protein membran luar A (ompA). Setiap genotipe menunjukkan preferensi inang yang kuat: A pada burung paruh bengkok, B pada burung Columbiform; genotipe C terdeteksi pada burung Anseriform dan Galliform, D pada Galliform, E pada burung Columbiform, Anseriform, dan spesies burung lainnya, F pada burung paruh bengkok dan Galliform, WC pada sapi, dan M56 pada hewan pengerat. Kemudian, delapan genotipe baru diusulkan (1V, 6N, Mat116, R54, YP84, CPX0308, I, dan J), yang ditemukan pada burung paruh bengkok dan burung liar. Semua genotipe memiliki potensi zoonosis, yang menjadikannya risiko bagi kesehatan manusia. ^11,13

 

Pada manusia, gejalanya umumnya beragam dan mirip dengan influenza. Namun, kadang-kadang dapat mencakup pneumonia parah, endokarditis, ensefalitis, dan penyakit ginjal. Infeksi terjadi melalui inhalasi kotoran dan sekresi yang telah menjadi aerosol saat menangani hewan, bangkai, atau jaringan yang terinfeksi, di mana kotoran dan bulu berperan penting dalam penularan zoonosis. Orang yang sering terpapar atau bersentuhan dengan burung peliharaan atau burung dalam kurungan, baik di waktu senggang maupun secara profesional, berisiko lebih tinggi terkena infeksi. ^1,6,15

 

Chlamydia abortus menyebabkan aborsi pada hewan ruminansia dan merupakan salah satu penyebab utama aborsi pada domba dan kambing. Bakteri ini juga dapat menginfeksi sapi, babi, kuda, dan rusa. C. abortus menimbulkan risiko zoonosis bagi manusia karena dapat menyebabkan penyakit mirip influenza, atau dalam kasus yang jarang, pneumonia. Infeksi pada wanita hamil dapat menyebabkan aborsi dan komplikasi serius seperti gagal ginjal akut, koagulasi intravaskular diseminata (DIC), atau kegagalan pernapasan yang memerlukan ventilasi mekanis. Dalam sepuluh tahun terakhir, strain C. abortus burung telah terdeteksi pada berbagai spesies burung liar, meskipun hingga saat ini perannya dalam menyebabkan penyakit pada burung dan penularan zoonosis dari strain burung ini masih belum jelas. ^8,13

 

Meskipun C. psittaci dan C. abortus memiliki kepentingan zoonosis, hanya sedikit analisis yang dilakukan untuk mendukung penelitian evolusi dan epidemiologi. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendeteksi keberadaan dan memulai karakterisasi keragaman genetik Chlamydia melalui metode molekuler pada burung peliharaan paruh bengkok yang diterima di Departemen Patologi Burung dan Mamalia Berbulu di Fakultas Ilmu Kedokteran Hewan, Universitas La Plata, untuk diagnosis dan/atau kontrol klinis.

 

Antara Maret 2013 dan Maret 2015, sampel swab dan organ dari 90 burung peliharaan paruh bengkok yang berasal dari wilayah timur laut Provinsi Buenos Aires, Argentina, disertakan dalam penelitian ini. Sampel diambil dari 57 spesimen Amazona aestiva, 29 Myiopsitta monachus, 1 Cyanoliseus patagonus, 1 Nymphicus hollandicus, 1 Melopsittacus undulatus, dan 1 Agapornis sp. Sampel swab konjungtiva, orofaring, dan kloaka (n=81) masing-masing diperoleh untuk setiap burung, menggunakan satu swab. Sampel didinginkan dan dikirim ke laboratorium. Kami juga mempelajari organ visceral dari burung lain yang telah diotopsi (n=9). Organ yang dikumpulkan (hati, paru-paru, kantong udara, dan limpa) diproses, ditempatkan dalam tabung steril, dan disimpan pada suhu −20°C hingga diperlukan untuk analisis. Burung dengan berbagai usia dengan gejala dan lesi yang sesuai dengan klamidiosis, serta yang tidak menunjukkan manifestasi penyakit yang jelas, dianalisis.

 

Setiap swab disuspensikan kembali dalam 600μl larutan saline yang dapar fosfat (PBS) dan dihomogenisasi menggunakan vortex. Pelet disentrifugasi dan disuspensikan kembali dalam 200μl, kemudian DNA diekstraksi menggunakan Quick-gDNA™ MiniPrep Zymo Research USA, sesuai dengan petunjuk pabrik. Sekitar 25μg organ dari burung yang diotopsi digunakan untuk ekstraksi DNA menggunakan PureLink™ Genomic DNA Mini Kit Invitrogen USA, sesuai dengan petunjuk pabrik. DNA templat disimpan pada suhu −20°C hingga diperlukan untuk analisis.

 

Sebanyak 3 mikroliter DNA digunakan dalam reaksi rantai polimerase waktu nyata (real-time PCR) yang spesifik untuk keluarga Chlamydiaceae dan menargetkan gen 23S rRNA, seperti yang dijelaskan oleh Ehricht dkk. Sampel positif kemudian menjalani PCR waktu nyata lainnya yang spesifik untuk gen ompA dari C. psittaci, menggunakan primer CppsOMP1-F 5′-CACTATGTGGGAAGGTGCTTCA-3′ dan CppsOMP1-R 5′-CTGCGCGGATGCTAATGG-3′. Volume akhir reaksi PCR adalah 25μl, yang mengandung 12,5μl Bio-RadiQ™ SYBR GREEN Supermix®, 3μl sampel DNA, 1μl (0,2μM) dari masing-masing primer, dan 7,5μl air suling. Amplifikasi dilakukan dengan protokol berikut: denaturasi awal pada suhu 95°C selama 2 menit, diikuti oleh 45 siklus denaturasi pada suhu 95°C selama 5 detik, penempelan pada suhu 60°C selama 15 detik, dan perpanjangan pada suhu 72°C selama 30 detik, lalu perpanjangan akhir selama 2 menit pada suhu 72°C. Kurva disosiasi dilakukan dengan 51 siklus pada suhu 70°C selama 30 detik, dengan perubahan suhu 0,5°C dan suhu akhir 95°C.

 

Sampel positif Chlamydia melalui PCR waktu nyata kemudian menjalani Nested-PCR untuk mengamplifikasi fragmen domain variabel III dan IV dari gen ompA Chlamydia spp. (576 pb) pada putaran pertama, dan untuk C. psittaci (404 pb), C. pecorum (441 pb), dan Chlamydia spp. (450 pb) pada putaran kedua. Semua reaksi PCR dilakukan menggunakan peralatan IQTM5 Multicolor Real-Time PCR Detection System (BIO-RAD Laboratories).

 

Produk yang diperoleh dimurnikan menggunakan AccuPrep® Gel Purification Kit (Bioneer Corporation, Seoul, Korea) dan dikirim untuk reaksi sekuensing nukleotida langsung menggunakan primer internal ke Macrogen, Inc. (Seoul, Korea). Sekuens yang dihasilkan di-align dan dipotong menggunakan Clustal X (Conway Institute UCD Dublin, Dublin, Ireland) dan sekuens konsensus dibandingkan melalui BLASTn 2.2.19 dengan fragmen gen ompA Chlamydia lain yang diperoleh dari bank data GenBank. Dendrogram dibangun menggunakan modul Tree Explorer dari program MEGA7 dengan metode Neighbor-Joining dan parameter p-distance. Dukungan statistik dihitung melalui non-parametric bootstrapping dengan 1000 pseudo-replikasi. ¹⁴

 

Analisis asosiasi antara keberadaan Chlamydia spp. dan variabel berikut: tanda klinis (ada atau tidak adanya tanda klinis), usia (burung yang berusia lebih muda atau lebih tua dari satu tahun), serta tanda klinis dan usia (burung yang sakit yang berusia kurang dari satu tahun atau lebih dari satu tahun), dilakukan melalui estimasi rasio odds (OR) (IC95%).

 

Analisis statistik dilakukan menggunakan program Epidemiological Analysis from the Tabulated Data, Epidat 3.1 (Dirección Xeral de Saúde Pública, Consellería de Sanidade-Xunta de Galicia, Área de Análisis y Sistemas de información Sanitaria, Organización Panamericana de la Salud). Untuk semua analisis yang dilakukan, signifikansi statistik ditentukan sebagai p<0,05.

 

Secara keseluruhan, dari semua sampel burung Psittaciform yang disaring, 96,7% (87/90) burung berasal dari Argentina, sementara 3,3% (3/90) merupakan burung eksotik. Selain itu, 52,2% (47/90) sampel berasal dari burung yang berusia kurang dari satu tahun, sementara 47,8% (43/90) dari burung yang berusia lebih dari satu tahun. Selain itu, 54,4% (49/90) sampel berasal dari burung yang gejala atau lesi makroskopisnya sesuai dengan chlamydiosis, dan 45,6% (41/90) dari burung yang secara klinis normal.

 

Dari 90 spesimen, 30% (27/90) sampel ditemukan positif melalui uji PCR waktu nyata (23S rRNA), dengan 48,1% (13/27) di antaranya milik spesies A. aestiva, 44,4% (12/27) milik M. monachus, 3,7% (1/27) milik C. patagonus, dan 3,7% (1/27) milik N. hollandicus.

 

Selain itu, dari 27 sampel yang positif Chlamydia, 24 adalah swab dan 3 berasal dari burung yang diotopsi. Sebanyak 70,3% (19/27) sampel yang dianalisis ditemukan positif C. psittaci, sedangkan 14,9% (4/27) diuji positif untuk C. abortus (Tabel 1) (Materi tambahan). Mengenai produk yang diperoleh, 51,2% (14/27) di antaranya diurutkan dan dikarakterisasi secara genetik karena menunjukkan kualitas dan konsentrasi DNA yang baik. Analisis dendrogram sekuens gen ompA untuk C. psittaci mengungkapkan bahwa 8 sampel (LADEAP-A-235, LADEAP-A-236, LADEAP-A-248, LADEAP-A-249, LADEAP-A-261, LADEAP-A-273, LADEAP-A-289, LADEAP-A-290) mengelompok dengan genotipe A C. psittaci. Satu sampel (LADEAP-A-338) mengelompok dengan genotipe B C. psittaci, sementara sekuens sampel LADEAP-A-321 mengelompok berbeda dari genotipe C. psittaci lainnya. Sampel LADEAP-A-253 (A. aestiva), LADEAP-A-283 (M. monachus), LADEAP-A-291 (M. monachus), dan LADEAP-A-299 (A. aestiva) mengelompok dengan sekuens C. abortus (Gambar 1).

 

Tabel 1. Karakteristik kasus positif Chlamydia spp.

^a Untuk detail lebih lanjut, lihat materi tambahan.

^b Jumlah burung yang menunjukkan gejala atau tidak menunjukkan gejala.

^c Tidak ditentukan.

 

Gambar 1.

Dendrogram Neighbor-joining berdasarkan perbandingan fragmen gen ompA (sekitar 380bp) dari Chlamydia. Sampel yang termasuk dalam studi ini memiliki awalan LADEAP-A- dan nomor akses GenBank yang disediakan. Angka di atas cabang menunjukkan nilai bootstrap sebagai persentase dari 1000 pseudoreplikasi. C. caviae GPIC digunakan sebagai outgroup. Skala batang menunjukkan persentase keragaman urutan.

 

DNA C. pecorum tidak terdeteksi pada sampel yang diuji.

Sebanyak 74,07% (20/27) dari sampel burung yang positif Chlamydia, tanda klinis yang sesuai dengan penyakit secara jelas diamati. Terdapat hubungan yang signifikan antara keberadaan Chlamydia spp. dan manifestasi tanda klinis yang sesuai dengan klamidiosis. Peluang yang lebih tinggi untuk menemukan agen ini pada burung yang sakit dan berusia di bawah satu tahun juga teramati (Tabel 2).

 

Tabel 2. Nilai OR dan IC95% yang diestimasi untuk setiap kategori.

^a Perbedaan signifikan (p<0,05).

 

C. psittaci adalah salah satu bakteri avian yang paling banyak diteliti, dengan burung paruh bengkok sebagai salah satu sumber utama infeksi bagi manusia. ^1,15  Psittacosis adalah penyakit yang menyebar luas dan telah dikenal selama beberapa dekade di Argentina, dengan 638 kasus dilaporkan dan 82 kasus yang dikonfirmasi pada manusia untuk periode 2013–2014.⁷  Data ini mungkin tidak mencerminkan realitas psittacosis di negara kita, karena sering kali tidak terdiagnosis. Riwayat paparan atau kontak pasien dengan burung atau hewan lain sering kali diabaikan dalam konsultasi medis. Di sisi lain, prevalensi pada burung peliharaan paruh bengkok belum diketahui. Sepanjang penelitian ini, penggunaan metode molekuler memungkinkan kami untuk mendeteksi dan mengkarakterisasi secara genetik anggota keluarga Chlamydiaceae yang hadir pada burung peliharaan paruh bengkok. Melalui penggunaan strategi ini, sampel yang diperiksa mengungkapkan keberadaan C. psittaci dan C. abortus pada burung paruh bengkok dengan simptomatologi klinis penyakit, serta pada burung lainnya yang secara klinis normal.

 

DNA Chlamydiaceae terdeteksi pada 30% dari burung yang diuji, hasil ini lebih tinggi dibandingkan dengan yang diperoleh oleh penulis lain di negara kita yang menemukan 17,4% DNA⁵, bahkan lebih tinggi dari yang dilaporkan di Brasil (3,4–10,6%)¹², meskipun dalam kasus ini studi tersebut hanya berfokus pada C. psittaci. Dalam studi terbaru yang dilakukan di pusat negara, C. pneumoniae, C. pecorum, dan infeksi campuran C. pneumoniae/C. pecorum ditemukan pada burung paruh bengkok yang dikurung, yang dipelihara sebagai hewan peliharaan di rumah tangga dan dikurung di kebun binatang.⁵ Berbeda dengan apa yang telah dilaporkan dalam studi sebelumnya tentang topik ini, kami secara jelas mendeteksi C. psittaci dan C. abortus pada burung peliharaan paruh bengkok.

 

C. psittaci adalah spesies Chlamydia yang paling sering terdeteksi dalam sampel burung yang dianalisis, yang mencerminkan sirkulasi spesies ini di antara burung peliharaan paruh bengkok di area tempat penelitian dilakukan. Sebuah laporan singkat dari Argentina menunjukkan bahwa C. psittaci dari tiga burung beo yang terkait dengan kasus manusia memiliki genotipe yang sama. ²

 

Laporan kami menunjukkan bahwa 7,7% dari burung asimptomatik diuji positif untuk Chlamydiaceae. Pada burung yang sakit, ditemukan kemungkinan yang secara signifikan lebih tinggi pada burung yang berusia kurang dari satu tahun. Berdasarkan hasil yang diperoleh, tampaknya bijaksana untuk melakukan tes diagnostik secara rutin untuk mendeteksi keberadaan C. psittaci pada semua burung paruh bengkok yang baru diperoleh, dan untuk mengevaluasi ulang burung-burung ini secara berkala sepanjang hidup mereka. Selain itu, 22,2% burung yang mengandung C. psittaci menunjukkan simptomatologi yang kompatibel dengan chlamydiosis, persentase yang sejalan dengan laporan oleh Varompay dkk. di Belgia.¹⁵  Penulis tersebut melaporkan bahwa burung yang secara klinis sehat dan diuji negatif untuk Chlamydia sebelumnya telah menerima pengobatan antibiotik untuk Chlamydia. Dalam studi kami, burung-burung tersebut tidak menerima perawatan antibiotik sebelum pengambilan sampel.

 

Studi kami mengungkapkan sirkulasi penting dari genotipe C. psittaci A pada burung peliharaan paruh bengkok di dalam area di mana penelitian dilakukan, sesuai dengan temuan sebelumnya di negara lain.⁹  Baru-baru ini di Argentina, Cadario dkk.² menemukan hanya genotipe C. psittaci A dalam kasus psittacosis manusia dan burung terkait di beberapa wilayah Argentina. Namun, di wilayah tengah negara kami, Frutos dkk.⁵  menemukan genotipe WC yang hadir baik pada manusia maupun burung. Genotipe A dianggap sebagai salah satu strain yang paling virulen pada burung dan manusia, dengan burung paruh bengkok sebagai pembawa utama genotipe ini, dan dianggap sebagai sumber utama infeksi bagi manusia.^6,11  Genotipe lain terdeteksi dalam studi ini, yaitu genotipe B, yang terutama terkait dengan burung merpati, meskipun juga dilaporkan pada burung paruh bengkok.⁹ Kalmar dkk.⁶  menemukan genotipe C. psittaci B pada tiga pekerja dari tempat perlindungan burung yang berhubungan dengan burung di mana genotipe yang sama terdeteksi. Sejauh yang kami ketahui, ini adalah laporan pertama mengenai genotipe B pada burung di Argentina, yang menunjukkan adanya genotipe baru yang beredar di burung dari negara kami.

 

Mengingat DNA yang diperoleh dari sampel positif Chlamydiaceae melalui PCR waktu nyata tidak mencukupi, tidak mungkin untuk menentukan tipe mereka dan, akibatnya, tidak dapat diketahui apakah anggota lain dari keluarga Chlamydiaceae hadir di burung yang diteliti. Dalam penelitian ini, kami menemukan C. abortus pada 4 burung paruh bengkok, 2 di antaranya menunjukkan tanda-tanda klinis yang kompatibel dengan chlamydiosis sementara 2 sisanya asimptomatik. Pembawa asimptomatik ini mungkin mewakili reservoir C. abortus di daerah kami.

 

Namun, dendrogram neighbor-joining yang digunakan untuk mengklasifikasikan spesies chlamydia dibangun berdasarkan fragmen 380bp, yang terlalu pendek untuk menarik kesimpulan yang definitif. Fragmen yang lebih besar dan beberapa lokus yang berbeda harus dianalisis untuk mendapatkan hasil yang lebih akurat.¹³

 

Sejauh yang kami ketahui, tidak ada laporan sebelumnya mengenai C. abortus pada burung di Argentina. Di sisi lain, ini memberikan bukti lebih lanjut tentang sirkulasi spesies ini di burung peliharaan di wilayah kami; meskipun demikian, aspek epidemiologis dan pentingnya C. abortus pada burung ini belum dapat ditentukan. Berdasarkan temuan ini, perlu diingat bahwa memelihara burung paruh bengkok dalam penangkaran mengimplikasikan risiko zoonosis dari infeksi C. psittaci dan risiko potensial infeksi C. abortus.

 

Pada burung yang dianalisis dan diuji positif untuk Chlamydia, manifestasi tanda klinis mungkin bergantung pada virulensi strain, faktor inang, dan/atau berbagai interaksi antara inang dan patogen.⁶

 

A. aestiva dan M. monachus adalah burung yang paling banyak diteliti dan juga paling dicari sebagai hewan peliharaan di Argentina, umumnya karena perdagangan ilegal. Sering kali, burung-burung ini disimpan hingga dijual dalam kondisi lingkungan yang tidak memadai, dengan tingkat kebersihan yang di bawah standar dan nutrisi yang buruk. Meskipun beberapa penulis menunjukkan bahwa faktor-faktor di atas dapat memengaruhi perkembangan penyakit, kami tidak dapat menegaskan fakta ini dalam studi kami karena kami menggunakan metode pengambilan sampel berdasarkan kenyamanan, bukan metode pengambilan sampel acak dengan populasi kontrol.

 

Dalam literatur, studi mengenai infeksi Chlamydia pada burung biasanya terbatas pada pencarian C. psittaci; oleh karena itu, sedikit yang diketahui tentang keberadaan agen chlamydia lainnya. Temuan baru mengonfirmasi bahwa pengetahuan kami tentang variasi Chlamydia pada burung masih bersifat parsial.

 

Studi ini memberikan identifikasi lebih lanjut dan karakterisasi molekuler Chlamydia pada burung peliharaan paruh bengkok di Argentina, dan ini merupakan kontribusi untuk meningkatkan pemahaman kami tentang berbagai bakteri yang ada di kerajaan hewan.

 

REFERENSI

[1]   J.M. Branley, B. Roy, D.E. Dwyer, T.C. Sorrell. Real-time PCR detection and quantitation of Chlamydophila psittaci in human and avian specimens from a veterinary clinic cluster. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 27 (2008), pp. 269-273

[2]   M.E. Cadario, M.C. Frutos, M.B. Arias, J.A. Origlia, V. Zelaya, M.J. Madariaga, C.S. Lara, V. Re, C.G. Cuffini. Epidemiological and molecular characteristics of Chlamydia psittaci from 8 human cases of psittacosis and 4 related birds in Argentina. Rev Arg Microbiol, 49 (2017), pp. 323-327

[3]   R. Ehricht, P. Slickers, S. Goellner, H. Hotzel, K. Sachse. Optimized DNA microarray assay allows detection and genotyping of single PCR-amplifiable target copies. Mol Cell Probes, 20 (2006), pp. 60-63

[4]   A. Essig, D. Longbottom. Chlamydia abortus: new aspects of infectious abortion in sheep and potential risk for pregnant women. Curr Clin Microbiol Rep, 2 (2015), pp. 22-34

[5]   M.C. Frutos, M.S. Monetti, L.G. Vaulet, M.E. Cadario, M.R. Fermepin, V.E. Ré, C.G. Cuffini. Genetic diversity of Chlamydia among captive birds from central Argentina. Avian Pathol, 44 (2015), pp. 50-56

[6]   I.D. Kalmar, V. Dicxk, L. Dossche, D. Vanrompay. Zoonotic infection with Chlamydia psittaci at an avian refuge centre. Vet J, 199 (2014), pp. 300-302

[7]   Ministerio de Salud, Secretaría de Promoción y Programas Sanitarios. Psitacosis. Boletín Integrado de Vigilancia. 2014;240 SE 53:84.

[8]   A. Pantchev, R. Sting, R. Bauerfeind, J. Tyczka, K. Sachse. New real-time PCR tests for species-specific detection of Chlamydophila psittaci and Chlamydophila abortus from tissue samples. Vet J, 181 (2009), pp. 145-150

[9]   T. Piasecki, K. Chrząstek, A. Wieliczko. Detection and identification of Chlamydophila psittaci in asymptomatic parrots in Poland. BMC Vet Res, 8 (2012), pp. 233

[10] K. Sachse, H. Hotzel. Detection and differentiation of Chlamydiae by nested PCR. Methods Mol Biol, (2003), pp. 123-136

[11] K. Sachse, K. Laroucau, D. Vanrompay. Avian chlamydiosis. Curr Clin Microbiol Rep, 2 (2015), pp. 10-21

[12] F. Santos, D.C. Leal, T.D.F. Raso, B.M.P.S. Souza, R.M. Cunha, V.H.R. Martinez, S.M. Barrouin-Melo, C.R. Franke. Risk factors associated with Chlamydia psittaci infection in psittacine birds. J Med Microbiol, 63 (2014), pp. 458-463

[13] M. Szymańska-Czerwińska, A. Mitura, K. Niemczuk, K. Zaręba, A. Jodełko, A. Pluta, S. Scharf, B. Vitek, R. Aaziz, F. Vorimore, K. Laroucau, C. Schnee. Dissemination and genetic diversity of chlamydial agents in Polish wildfowl: isolation and molecular characterisation of avian Chlamydia abortus strains. PLoS ONE, 12 (2017), pp. e0174599

[14] K. Tamura, J. Dudley, M. Nei, S. Kumar. MEGA4: molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) software version 4.0. Mol Biol Evol, 24 (2007), pp. 1596-1599

[15] D. Vanrompay, T. Harkinezhad, M. Van de Walle, D. Beeckman, C. Van Droogenbroeck, K. Verminnen, R. Leten, A. Martel, K. Cauwerts. Chlamydophila psittaci transmission from pet birds to humans. Emerg Infect Dis, 13 (2007), pp. 1108-1110

 

SUMBER:

Javier A. Origlia, Maria E. Cadario, María C. Frutos, Norberto F. Lopez, Santiago Corva, Maria F. Unzaga, Miguel V. Piscopo, Cecilia Cuffini, Miguel A. Petruccelli. 2019. Detection and molecular characterization of Chlamydia psittaci and Chlamydia abortus in psittacine pet birds in Buenos Aires province, Argentina. Revista Argentina de Microbiología. 51 (2): 130-135 (April - Juni 2019).