Informasi Laboratorium Diagnostik Rabies

 

Garis Besar

Diagnosis laboratorium yang cepat dan akurat untuk rabies pada manusia dan hewan sangat penting untuk pemberian perawatan medis terkait rabies tepat waktu, yang juga disebut profilaksis pasca pajanan (PEP). Laboratorium diagnostik dapat menentukan apakah hewan terinfeksi rabies dalam beberapa jam. Hasil ini dapat membantu memutuskan apakah PEP yang mahal diperlukan, serta berpotensi menghindarkan pasien dari stres fisik, emosional, dan finansial yang tidak perlu.

 

Diagnosis pada Hewan

Hewan yang menunjukkan tanda-tanda rabies harus segera disuntik mati oleh tenaga profesional dan spesimennya dikirim ke laboratorium rabies yang berkompeten untuk pengujian. Diagnosis rabies dapat dilakukan setelah deteksi virus rabies dari bagian mana pun dari otak yang terinfeksi, tetapi untuk menyingkirkan rabies, pengujian harus mencakup irisan lengkap dari jaringan batang otak dan serebelum. Pengujian rabies mengharuskan hewan untuk disuntik mati. Tidak ada metode yang disetujui untuk pengujian rabies ante-mortem (sebelum kematian) pada hewan. Di Amerika Serikat, hasil pengujian rabies biasanya tersedia dalam 24 hingga 72 jam setelah hewan disuntik mati. Meskipun pajanan rabies yang dicurigai memerlukan perhatian medis segera, kebanyakan orang yang dicurigai terpapar rabies dapat menunda profilaksis pasca pajanan hingga hasil tes ini diterima. Pengujian rabies pada hewan harus dilaporkan kepada departemen kesehatan negara bagian dan CDC.

 

Diagnosis pada Manusia

 

Beberapa tes diperlukan untuk mendiagnosis rabies ante-mortem (sebelum kematian) pada manusia; tidak ada tes tunggal yang cukup. Pengujian dilakukan pada sampel air liur, serum, cairan tulang belakang, dan biopsi kulit dari folikel rambut di bagian tengkuk. Pengujian post-mortem (setelah kematian) memerlukan pengumpulan jaringan dari batang otak dan serebelum. Karena risiko paparan rabies bagi tenaga kesehatan dan kontak dekat di masyarakat, pasien yang meninggal dengan dugaan rabies harus selalu menjalani autopsi dan pengujian rabies post-mortem. Pengujian rabies pada manusia harus dilaporkan ke departemen kesehatan negara bagian dan CDC.

 

Metode Pengujian Diagnostik

Deteksi antigen atau RNA virus rabies dengan metode berikut dapat mengonfirmasi infeksi rabies, tetapi tes standar emas (gold standard) harus digunakan untuk memastikan tidak adanya infeksi. Menyingkirkan infeksi juga membutuhkan pengujian jaringan yang tepat, termasuk irisan lengkap batang otak dan serebelum untuk pengujian post-mortem pada manusia dan hewan. Pengujian rabies ante-mortem pada manusia yang negatif menjadi indikasi kuat bahwa pasien tidak terinfeksi rabies; namun, pengujian konfirmasi post-mortem harus dilakukan jika tidak ada diagnosis alternatif yang ditemukan.

 

Tes Antibodi Fluoresen Langsung (DFA)

Tes DFA didasarkan pada pengamatan bahwa hewan yang terinfeksi virus rabies memiliki protein virus rabies (antigen) di jaringan mereka. Karena rabies ada di jaringan saraf (bukan darah seperti banyak virus lainnya), jaringan ideal untuk menguji antigen rabies adalah jaringan otak. Jaringan terinervasi lainnya mungkin memiliki antigen; namun, pengujian dengan jaringan ini kurang akurat dalam mendeteksi rabies dibandingkan dengan jaringan otak.

 

Bagian terpenting dari tes DFA adalah antibodi anti-rabies yang diberi label fluoresen. Ketika antibodi berlabel diinkubasi dengan jaringan otak yang dicurigai terinfeksi rabies, mereka akan mengikat antigen rabies. Antibodi yang tidak terikat dapat dicuci dan area tempat antigen berada akan terlihat sebagai area berwarna hijau apel di bawah mikroskop fluoresen. Jika virus rabies tidak ada, tidak akan ada pewarnaan.

 

Karena sensitivitas dan spesifisitasnya yang tinggi, tes DFA adalah salah satu metode diagnostik "gold standard" untuk mendeteksi rabies dan telah dievaluasi dengan ketat oleh laboratorium kesehatan internasional, nasional, dan negara bagian.

 

Positif DFA

Negatif DFA

 

Tes Imunohistokimia Cepat Langsung (DRIT)

DRIT untuk rabies berfungsi mirip dengan DFA dalam mendeteksi keberadaan antigen virus rabies di jaringan hewan. Seperti DFA, DRIT bergantung pada pengamatan bahwa protein virus rabies ada di jaringan yang terinfeksi, terutama dalam sistem saraf. Jaringan yang disukai untuk pengujian DRIT adalah jaringan otak karena konsentrasi antigen rabies yang tinggi. Namun, jaringan terinervasi lainnya mungkin juga mengandung antigen, meskipun akurasinya sedikit lebih rendah dibandingkan dengan jaringan otak. Komponen utama tes DRIT adalah pewarnaan imunohistokimia cepat dengan antibodi anti-rabies. Antibodi ini diberi label dengan penanda fluoresen atau kromogenik dan, ketika diinkubasi dengan jaringan yang dicurigai, mengikat antigen rabies secara spesifik. Antibodi berlebih kemudian dicuci, dan area yang mengandung antigen rabies akan tampak berpendar atau berwarna di bawah mikroskop. Sebaliknya, tidak adanya pewarnaan menunjukkan tidak adanya virus rabies. Seperti DFA, DRIT memiliki sensitivitas dan spesifisitas tinggi, menjadikannya alat diagnostik yang andal untuk rabies. Tes ini telah dievaluasi secara menyeluruh oleh laboratorium kesehatan internasional, nasional, dan negara bagian, sehingga statusnya sebagai metode "gold standard" untuk diagnosis rabies semakin kukuh.

 

Realtime Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)

Tes LN34 PCR untuk rabies adalah tes diagnostik baru yang menggunakan metodologi real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (real-time RT-PCR) untuk mendeteksi keberadaan materi genetik virus rabies. Jaringan terbaik untuk pengujian rabies dengan tes apa pun adalah otak, dan pengecualian rabies dengan tes LN34 memerlukan irisan lengkap batang otak dan sampel representatif dari serebelum. Biopsi kulit dari tengkuk dan sampel air liur dapat diuji dengan LN34 untuk mendeteksi rabies pada kasus dugaan rabies ante-mortem pada manusia. Tes inovatif ini menargetkan daerah konservatif dari genom virus termasuk daerah pemimpin dan gen nukleoprotein, yang memastikan deteksi kuat di semua virus yang dapat menyebabkan rabies. Tes LN34 bekerja melalui reaksi tabung tunggal di mana materi genetik virus diperbanyak menjadi banyak salinan dan dideteksi oleh probe fluoresen. Tes LN34 PCR menawarkan banyak keuntungan, termasuk sensitivitas, spesifisitas, dan waktu respons yang cepat. Selain itu, versatilitasnya memungkinkan pengujian pada berbagai jenis sampel, termasuk jaringan yang terdekomposisi atau difiksasi formalin, yang mungkin tidak dapat diuji dengan teknik diagnostik lain. Seperti tes DFA, jaringan terbaik untuk pengujian rabies dengan LN34 adalah jaringan otak, dan pengecualian rabies memerlukan irisan lengkap dari batang otak dan sampel representatif dari serebelum. Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) dan Organisasi Kesehatan Hewan Dunia (WOAH) mengakui tes LN34 sebagai tes "gold standard", dan tes ini semakin diakui dan diadopsi secara global untuk diagnosis dan pemantauan rabies.

 

Imunohistokimia (IHC)

Metode IHC sensitif dan spesifik untuk mendeteksi antigen virus rabies pada jaringan yang difiksasi dengan formalin. Jaringan yang difiksasi dengan formalin harus terlebih dahulu diproses dengan metode histologi rutin, dimasukkan ke dalam parafin, dan disiapkan sebagai slide parafin yang difiksasi dengan formalin.

Antigen virus rabies dideteksi menggunakan antibodi monoklonal atau poliklonal anti-rabies yang spesifik. Pengujian IHC lebih sensitif dan spesifik dibandingkan metode pewarnaan histologi, seperti pewarnaan hematoksilin dan eosin (H&E) serta pewarnaan Sellers.

Sel saraf otak yang terinfeksi rabies dengan inklusi intrasitoplasma. Pewarnaan merah menunjukkan keberadaan antigen virus rabies menggunakan metode pewarnaan kompleks Streptavidin-biotin.

Jaringan otak yang diuji negatif rabies dengan metode IHK, menunjukkan tidak adanya antigen virus rabies yang terdeteksi.

 

Pemeriksaan histologis

Histopatologi umum

Pemeriksaan histologis jaringan biopsi atau otopsi kadang-kadang berguna dalam mendiagnosis kasus rabies yang tidak terduga dan belum diuji dengan metode rutin. Ketika jaringan otak dari hewan dan manusia yang terinfeksi virus rabies diwarnai dengan pewarna histologis, seperti hematoxylin dan eosin, tanda-tanda ensefalomielitis mungkin dikenali oleh ahli mikroskopis terlatih. Metode ini tidak spesifik dan tidak dianggap sebagai diagnostik untuk rabies.

 

Sebelum metode diagnostik saat ini tersedia, diagnosis rabies dilakukan menggunakan metode ini selain riwayat klinis kasus. Sebagian besar ciri histopatologi signifikan, atau perubahan pada jaringan yang disebabkan oleh penyakit, pada infeksi rabies dideskripsikan pada kuartal terakhir abad ke-19. Setelah keberhasilan eksperimen vaksinasi rabies oleh Louis Pasteur, para ilmuwan termotivasi untuk mengidentifikasi lesi patologis virus rabies.

 

Bukti histopatologi ensefalomielitis rabies (peradangan) pada jaringan otak dan meninges meliputi hal-hal berikut:

1. Infiltrasi mononuklear
2. Perivaskular cuffing oleh limfosit atau sel polimorfonuklear
3. Fokus limfositik
4. Nodul Babe yang terdiri dari sel glial
5. Badan Negri

Perivascular cuffing

Perivascular cuffing atau peradangan di sekitar pembuluh darah. Infiltrat sel inflamasi perivaskular pada jaringan otak yang diwarnai dengan hematoxylin & eosin. (Pembesaran 100x)

 

Nodul Babe

 

Perivascular cuffing

Perivascular cuffing atau peradangan di sekitar pembuluh darah. Infiltrasi sel inflamasi perivaskular pada jaringan otak yang diwarnai hematoxylin & eosin. (Pembesaran 200x)

 

Serologi Rabies

 

Siapa yang harus menjalani tes serologi rutin untuk virus rabies?

Biasanya, tes antibodi penetral virus rabies, seperti rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT), digunakan untuk memantau kadar antibodi pada orang yang mungkin memiliki risiko pekerjaan terpapar virus rabies (misalnya, dokter hewan, pekerja laboratorium virus rabies, dll.).

 

Dalam beberapa kasus, tes serologi semacam ini digunakan untuk memeriksa respons imun seseorang yang menjalani profilaksis pasca-pajanan rabies ketika terdapat penyimpangan besar dalam jadwal vaksinasi, atau terdapat kekhawatiran tentang status imun pasien. Laboratorium Referensi Rabies Nasional CDC menawarkan tes serologi untuk manusia dan hewan berdasarkan kasus per kasus. Persetujuan sebelum pengiriman serum diperlukan.

 

Bagi kebanyakan orang dan hewan yang telah menyelesaikan rejimen vaksinasi rabies yang disetujui, tes serologi rutin tidak diperlukan untuk mendokumentasikan serokonversi, kecuali:

·       Orang tersebut mengalami imunosupresi.

·       Terdapat penyimpangan signifikan dalam jadwal profilaksis.

·       Pasien memulai vaksinasi di luar negeri dengan produk yang kualitasnya diragukan; atau

·       Status antibodi orang tersebut dipantau secara rutin karena paparan virus rabies akibat pekerjaan.

 

Regulasi Kit Tes Diagnostik

Baru-baru ini, tes diagnostik point-of-care semakin banyak tersedia untuk publik. Studi menjanjikan yang dilakukan di Afrika, Asia, dan Amerika Serikat telah menemukan bahwa beberapa tes point-of-care dapat menunjukkan sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi. Namun, belum ada tes point-of-care untuk rabies yang divalidasi secara ketat dan tidak ada yang disetujui untuk digunakan oleh USDA, Laboratorium Referensi Rabies Nasional CDC, WHO, atau WOAH.

 

Secara umum, jika suatu produk diagnostik mengandung semua bahan yang dibutuhkan untuk menjalankan tes tertentu, termasuk petunjuk tentang interpretasi hasil, dan jika niat pabrikan adalah untuk menyediakan produk point-of-care yang mandiri, aplikasi semacam ini dapat dianggap sebagai kit diagnostik dan berada di bawah regulasi oleh United States Department of Agriculture (USDA), Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), Center for Veterinary Biologics.

 

Sumber:

CDC. Information for Diagnostic Laboratories. https://www.cdc.gov/rabies/php/laboratories/diagnostic.html#