Protein PA-X Virus Influenza A

Protein PA-X Virus Influenza A Berkontribusi pada Pertumbuhan Virus dan Penekanan Respons Antivirus dan Kekebalan Inang

INTISARI

Infeksi virus influenza menyebabkan penghambatan umum sintesis protein inang dalam sel yang terinfeksi. Penutupan inang ini dianggap memungkinkan virus untuk melarikan diri dari respons antivirus inang, yang membatasi replikasi dan penyebaran virus. Meskipun mekanisme penghentian inang tidak jelas, protein virus baru yang diekspresikan oleh pergeseran bingkai ribosom, PA-X, ditemukan memainkan peran utama dalam penghentian inang yang diinduksi virus influenza. Namun, sedikit yang diketahui tentang dampak ekspresi PA-X pada patogenisitas virus influenza A yang beredar saat ini dan respons antivirus inang. 

Dalam penelitian ini, kami menyelamatkan virus influenza A rekombinan, A/California/04/09 (H1N1, Cal), yang mengandung mutasi pada motif frameshift pada gen polimerase PA (Cal PA-XFS). Cal PA-XFS mengekspresikan PA-X secara signifikan lebih sedikit daripada Cal wild type (WT). Cal WT, tetapi bukan Cal PA-XFS, menginduksi degradasi mRNA-aktin inang dan menekan sintesis protein inang, mendukung gagasan bahwa PA-X menginduksi penghentian inang melalui peluruhan mRNA. Selain itu, Cal WT menghambat ekspresi beta interferon (IFN-β) dan bereplikasi lebih cepat daripada Cal PA-XFS dalam sel pernapasan manusia. 

Tikus yang terinfeksi Cal PA-XFS memiliki tingkat pertumbuhan virus yang lebih rendah secara signifikan dan ekspresi IFN-β mRNA yang lebih besar di paru-parunya  daripada tikus yang terinfeksi Cal WT. Catatan penting, lebih banyak antihemaglutinin dan antibodi penetral diproduksi pada tikus yang terinfeksi Cal PA-XFS daripada pada tikus yang terinfeksi Cal WT, meskipun tingkat replikasi virus di paru-paru lebih rendah. Data ini menunjukkan bahwa PA-X dari virus pandemi H1N1 memiliki dampak yang kuat pada pertumbuhan virus dan respon imun bawaan dan didapat dari inang terhadap virus influenza.

 

PENTING

Penghentian protein inang yang diinduksi virus dianggap sebagai faktor utama yang memungkinkan virus menghindari pengenalan kekebalan bawaan dan didapat. Kami memberikan bukti bahwa protein PA-X virus H1N1 influenza A 2009 berperan dalam replikasi virus dan penghambatan respons antivirus inang melalui aktivitas penghentian sintesis protein inangnya baik secara in vitro maupun in vivo. 

Kami juga menunjukkan bahwa, sementara pertumbuhan Cal PA-XFS dilemahkan di paru-paru hewan yang terinfeksi, mutan ini menginduksi respons humoral yang lebih kuat daripada Cal WT. Temuan kami dengan jelas menyoroti pentingnya PA-X dalam menangkal respons imun bawaan dan didapat dari inang terhadap virus influenza, patogen global yang penting. Karya ini menunjukkan bahwa penghambatan ekspresi PA-X dalam strain vaksin virus influenza dapat memberikan cara baru untuk melemahkan pertumbuhan virus dengan aman sambil menginduksi respons imun yang lebih kuat.

 

Gambar 1 Penyelamatan Cal PA-XFS yang memiliki mutasi pada motif frameshift.

(A) Representasi skematis protein Cal PA dan PA-X. Cal PA-X mengkodekan domain endonuklease terminal-N umum (residu asam amino 1 hingga 191) dari PA yang menyatu dengan wilayah terminal-C yang unik (41 asam amino) yang dihasilkan oleh kerangka pembacaan +1 mRNA PA melalui pemindahan bingkai ribosom. Motif frameshift ditampilkan dalam persegi panjang.

(B) Reaktivitas MAbs sebagaimana ditentukan oleh Western blotting. Sel 293T ditransfeksi dengan plasmid yang ditunjukkan selama 24 jam. Lisis sel menjadi sasaran Western blotting menggunakan MAb yang ditunjukkan. pPA, pCAGGSCalPAflag; p134A, pCAGGSCalPA-X134Aflag; p134AΔC, pCAGGSCalPA-X134AΔCflag.

(C) Sel A549 yang terinfeksi dengan Cal WT atau Cal PA-XFS atau sel 293T yang ditransfeksi dengan pCAGGSCalPA-X134Aflag diberi label dengan metionin dan sistein berlabel 35S. Lisis sel berlabel digunakan untuk imunopresipitasi (IP) oleh anti-PA-X atau anti-PA MAb atau untuk Western blotting (WB) menggunakan MAbs yang ditunjukkan. Data yang ditampilkan mewakili dua eksperimen independen.

Gambar 2 Pengaruh ekspresi PA-X pada sintesis protein inang dan tingkat mRNA aktin dalam sel manusia yang terinfeksi virus Cal.

(A)   sel A549 dibiarkan tidak terinfeksi atau terinfeksi Cal WT atau Cal PA-XFS pada MOI 1. Pada titik waktu yang ditunjukkan, sel diberi label dengan metionin dan sistein berlabel 35S selama 30 menit, dan total lisat diselesaikan oleh SDS-PAGE.

(B)   Jejak densitometri dari protein berlabel dalam sel yang dibiarkan tidak terinfeksi atau terinfeksi virus yang ditunjukkan pada panel A.

 

(C dan D) Sel A549 atau Calu-3 dibiarkan tidak terinfeksi atau terinfeksi Cal WT atau Cal PA-XFS pada MOI 3. Pada 4 atau 12 hpi, RNA total diekstraksi dari lisat sel dan menjadi sasaran analisis Northern blot menggunakan probe -aktin manusia antisense berlabel DIG. 18S dan 28S rRNA diwarnai dengan etidium bromida dan ditampilkan sebagai kontrol pemuatan. Data yang ditampilkan mewakili dua (A) atau tiga (C dan D) percobaan independen.

 

 

Gambar 3 Efek ekspresi PA-X pada pertumbuhan virus dan ekspresi IFN-β in vitro.

(A) Kinetika pertumbuhan virus dalam sel Calu-3. Sel-sel terinfeksi dengan Cal WT atau Cal PA-XFS pada MOI 0,025. Pada titik waktu yang ditunjukkan, 10% supernatan dikumpulkan dan dititrasi pada sel MDCK. Garis putus-putus menunjukkan batas deteksi pengujian. Data mewakili rata-rata dengan standar deviasi dari dua percobaan independen dengan pengujian yang dilakukan dalam rangkap tiga (n = 6).

(B) Sel Calu-3 dibiarkan tidak terinfeksi atau terinfeksi Cal WT atau Cal PA-XFS pada MOI 3. Pada titik waktu yang ditunjukkan, RNA total diekstraksi dan menjadi sasaran analisis qRT-PCR. Jumlah salinan dalam setiap sampel dihitung menggunakan kurva standar pengenceran serial 10 kali lipat dari produk gen IFN-β manusia. Perubahan lipatan adalah rasio jumlah salinan setiap sampel di atas sel yang terinfeksi tiruan pada 6 jam. Tingkat mRNA mewakili rata-rata dengan standar deviasi.

(C) Sel A549 dibiarkan tidak terinfeksi atau terinfeksi Cal WT atau Cal PA-XFS pada MOI 10. Tingkat protein IFN-β dalam supernatan kultur pada 12 atau 24 hpi ditentukan dengan menggunakan kit ELISA IFN-β manusia. Data mewakili rata-rata dengan standar deviasi. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik dengan uji t Student (*, P < 0,05).

 

Gambar 4 Kelangsungan hidup dan perubahan berat badan mencit yang terinfeksi virus Cal.

(A dan B) Tikus C57BL/6 diinfeksi tiruan atau terinfeksi Cal WT atau Cal PA-XFS dengan dosis 10¹, 10², 10³, atau 10⁴ PFU intranasal.

Kelangsungan hidup (A) dan berat badan (B) masing-masing tikus dipantau setiap hari hingga 16 dpi (n = 5). Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik dengan uji t Student (*, P < 0,05).

 

Gambar 5 Pertumbuhan virus, ekspresi mRNA IFN-β, dan patologi pada paru-paru mencit yang terinfeksi. Tikus C57BL/6 tiruan terinfeksi atau terinfeksi Cal WT atau Cal PA-XFS dengan dosis 102 PFU intranasal. Pada 2, 5, atau 8 dpi, empat tikus dari setiap kelompok dikorbankan secara manusiawi dan seluruh paru-paru yang diekstraksi dihomogenisasi dalam 1 ml PBS.

(A) Virus yang ada dalam homogenat dititrasi pada sel MDCK dengan uji plak.

(B) Total RNA diekstraksi dari 100 l homogenat, dan kadar mRNA IFN-β ditentukan dengan analisis qRT-PCR. Perubahan lipatan adalah rasio jumlah salinan setiap sampel di atas sampel kontrol pada 2 dpi. Data mewakili rata-rata dengan standar deviasi. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik dengan uji t Student (*, P < 0,05).

(C) Gambar representatif hematoxylin-and-eosin dari paru-paru yang tidak terinfeksi atau terinfeksi pada 8 dpi. Perbesaran asli, ×10.

Gambar 6 Titrasi antibodi netralisasi dalam serum mencit yang terinfeksi virus Cal. (A sampai C) Uji netralisasi dilakukan dengan menggunakan sampel serum yang dikumpulkan pada 16 dpi dari tikus yang masih hidup yang terinfeksi virus Cal dengan dosis 10¹, 10², atau 10³ PFU. Setiap sampel serum diencerkan secara serial dan dicampur dengan 150 PFU Cal WT, dan kemudian jumlah plak dihitung. Data disajikan sebagai persentase jumlah plak virus kontrol yang diinkubasi dengan PBS. (D) Pengenceran serum yang dihitung menunjukkan penghambatan plak 50%. Data yang ditampilkan adalah rata-rata dengan standar deviasi hasil dari 4 atau 5 (kontrol, 10¹, atau 10² PFU virus) atau 2 atau 3 (10³ PFU virus) individu tikus. Tanda bintang menunjukkan perbedaan yang signifikan secara statistik dengan uji t Student (*, P < 0,05).

Sumber:

Tsuyoshi Hayashi, Leslie AMacDonald, Toru Takomoto.  2015. Influenza A Virus Protein PA-X Contributes to Viral Growth and Suppression of the Host Antiviral and Immune Responses. J Virol 2015 Jun; 89(12):6442-52.doi:10.1128/JVI.00319-15. Epub 2015 Apr 8. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25855745/

 

Penemuan Mengejutkan: Glikosilasi di Hemagglutinin Bisa Ubah Virulensi dan Antigen Influenza H1N1!

Glikosilasi di Kepala Globular Protein Hemagglutinin Memodulasi Virulensi dan Sifat Antigenik Virus Influenza H1N1

 

INTISARI

 

Dengan penyebaran global pandemi virus influenza H1N1 (pH1N1) 2009, ada peningkatan kekhawatiran tentang evolusi melalui antigenic drift. Salah satu cara strain influenza H1N1 dan H3N2 musiman sebelumnya telah berevolusi dari waktu ke waktu adalah dengan memperoleh glikosilasi tambahan di kepala globular protein hemagglutinin (HA) mereka; glikosilasi ini diyakini melindungi daerah yang relevan secara antigenik dari respons imun antibodi. Kami menambahkan situs glikosilasi HA tambahan ke virus influenza A/Belanda/602/2009 rekombinan (rpH1N1), yang mencerminkan penampilan temporalnya pada virus H1N1 musiman sebelumnya. Glikosilasi tambahan mengakibatkan infeksi yang dilemahkan secara substansial pada tikus dan musang, sedangkan menghapus situs glikosilasi HA dari virus pra-pandemi mengakibatkan peningkatan patogenisitas pada tikus. Kami kemudian lebih langsung menyelidiki interaksi glikosilasi HA dan respons antibodi melalui analisis mutasi. Kami menemukan bahwa respons antibodi poliklonal yang ditimbulkan oleh tipe liar rpH1N1 HA kemungkinan diarahkan terhadap wilayah imunodominan, yang dapat dilindungi oleh glikosilasi pada posisi 144. Namun, glikosilasi rpH1N1 HA pada posisi 144 memunculkan respons poliklonal yang lebih luas yang mampu menetralkan silang semua virus pH1N1 mutan tipe liar dan glikosilasi. Selain itu, tikus yang terinfeksi dengan virus musiman baru-baru ini di mana situs glikosilasi dihilangkan, menimbulkan antibodi yang melindungi terhadap tantangan dengan virus pH1N1 yang jauh secara antigenik. Dengan demikian, akuisisi situs glikosilasi di HA virus influenza manusia H1N1 tidak hanya mempengaruhi patogenisitas dan kemampuan untuk melepaskan diri dari antibodi poliklonal yang ditimbulkan oleh strain virus influenza sebelumnya tetapi juga kemampuan mereka untuk menginduksi antibodi reaktif silang terhadap varian antigenik yang menyimpang.

 

Gambar 1. Akuisisi situs glikosilasi di HA subtipe H1N1 manusia dari waktu ke waktu sebelum munculnya virus H1N1 2009.

 

Penjajaran asam amino dari situs antigenik dalam HA1 strain H1N1 musiman yang beredar pada manusia sejak 1918 hingga sesaat sebelum munculnya virus pandemi H1N1 2009. Empat isolat pandemi H1N1 2009 yang representatif juga dimasukkan sebagai referensi. Alignment menunjukkan strain referensi prototipikal yang dipilih. Bayangan berwarna (ungu, kuning dan hijau) menggambarkan situs antigenik yang diketahui terdaftar di atas. Kotak kuning mewakili glikosilasi yang dilestarikan dan kotak merah mewakili glikosilasi yang muncul dan menghilang seiring waktu. Panah di sebelah kanan menunjukkan tahun glikosilasi muncul di posisi residu yang ditunjukkan.

 

Gambar. 2. Pemodelan glikosilasi H1N1 dari waktu ke waktu (A) Garis waktu yang menggambarkan tahun perolehan glikosilasi di kepala globular protein HA. Angka berwarna merah menunjukkan posisi asam amino dari situs glikosilasi yang dilestarikan di antara isolat H1N1 manusia sejak kemunculannya pada tahun 1918, dan angka berwarna hitam menunjukkan posisi asam amino dari situs glikosilasi yang muncul pada tahun-tahun tertentu yang ditunjukkan di bagian bawah. Panah menunjukkan kegigihan situs glikosilasi melalui waktu, dan lingkaran mewakili hilangnya mereka. Garis terputus menunjukkan periode waktu dari 157 hingga 177 ketika virus H1N1 tidak beredar pada manusia. (B) Representasi monomer HA dengan situs antigenik disorot dalam warna merah dan situs glikosilasi berwarna kuning. Wilayah batang HA dilambangkan dengan perak. Posisi asam amino mengacu pada nomenklatur H1 (situs 71, 142, 144, 172 dan 177 sesuai dengan H3 penomoran 58, 128, 130, 158 dan 163, masing-masing). Angka berwarna merah menunjukkan situs glikosilasi yang dilestarikan. (C) Pemodelan struktural HA trimerik dengan glikosilasi seperti yang muncul dari waktu ke waktu dari tahun 1918 hingga munculnya virus pH1N1 2009. Struktur glikan untuk situs yang ditunjukkan dengan warna kuning telah dimodelkan ke Cal/09 HA (PDB 3LZG) dan juga digambarkan dengan warna kuning. Semua model dibuat dengan MacPyMol.

Gambar 3. Karakterisasi fenotipik virus mutan glikosilasi HA 2009 pH1N1 (A) Morfologi plak virus mutan glikosilasi HA yang diselamatkan/Belanda/602/2009 dalam sel MDCK. (B) Analisis Western blot dari lisat sel utuh yang diperoleh dari sel MDCK yang terinfeksi pada MOI 5 selama 12 jam. Lysates dijalankan di bawah kondisi non-pereduksi dan bercak dideteksi dengan antiserum poliklonal kelinci 3951 yang dibangkitkan terhadap virus PR8 yang kekurangan H1, yang telah dihilangkan dengan pengobatan asam dan DTT. ( C ) Kinetika pertumbuhan virus yang diselamatkan dalam sel epitel trakeobrokial manusia yang berbeda yang terinfeksi pada MOI 0,001. Data ditampilkan sebagai rata-rata titrasi virus yang dilakukan dalam rangkap tiga untuk setiap titik waktu yang ditunjukkan oleh uji plak standar dalam sel MDCK. Bilah kesalahan mewakili +/− SD pada setiap titik waktu.

Gambar 4. 2009 virus pH1N1 dengan glikosilasi tambahan di HA dilemahkan pada tikus dan musang (A – E) Infeksi tikus C57B/6 betina berusia 9 minggu dengan virus mutan glikosilasi Neth/09. Kelompok 5 tikus per virus rekombinan yang terinfeksi i.n. dengan dosis yang ditunjukkan. Bobot badan mewakili rata-rata setiap grup dan bilah kesalahan menunjukkan +/− SD pada setiap titik waktu. (F) Titer virus pada paru-paru mencit yang diinfeksi 1x10³ pfu masing-masing virus mutan diperoleh pada hari ke-2 (lingkaran), 5 (persegi), dan 7 (segitiga) p.i. seperti yang ditunjukkan. Bilah hitam mewakili titer virus rata-rata untuk 2 (panah) atau 3 tikus per kelompok pada setiap titik waktu dibandingkan dengan virus rNeth/09 WT. N.D. = Tidak terdeteksi. (G) Perubahan berat badan pada musang yang terinfeksi (n=3 per kelompok) dengan virus yang ditunjukkan. Bobot ditampilkan sebagai rata-rata dan bilah kesalahan mewakili +/− SD. pada setiap titik waktu. Perbedaan yang signifikan secara statistik (*) dari keseluruhan berat badan musang selama periode infeksi diperkirakan dengan uji pasangan cocok Wilcoxon. (H) Titer virus dalam pencuci hidung diperoleh setiap hari dari musang yang ditunjukkan pada (G). (I) Viral load dalam jaringan dari musang (n=3) pada hari ke 3 p.i. dengan virus yang ditunjukkan. Nilai direpresentasikan seperti pada (F).

Gambar 5. Aktivitas HI serum manusia setelah vaksinasi terhadap pandemi 2009 H1N1. Sampel serum sebelum dan sesudah vaksinasi diperoleh dari 52 subjek yang terdaftar dalam uji klinis untuk menguji keamanan dan imunogenisitas vaksin influenza H1N1 2009 yang inaktif, diuji HI-nya aktivitas melawan WT Neth/09 dan virus mutan glikosilasi. Untuk setiap subjek, perbedaan aktivitas HI antara pasca dan pra-vaksinasi (titer HI pasca-vaksinasi – titer HI pra-vaksinasi dalam jumlah sumur) ditentukan untuk menormalkan aktivitas HI yang sudah ada sebelumnya. Untuk setiap virus distribusi peningkatan aktivitas HI pasca vaksinasi diplot. Median distribusi ditandai dengan garis merah dan perbedaan yang signifikan secara statistik ditentukan dengan uji jumlah peringkat Wilcoxon.

Gambar 6. Penghapusan situs glikosilasi di HA Tx/91 meningkatkan virulensi pada tikus dan perlindungan silang terhadap strain pH1N1 2009 Karakterisasi fenotipik virus influenza A rekombinan yang membawa baik tipe liar atau glikosilasi penghapusan mutan A/Texas/36/ 1991 HAs (N71K + S73N, T144D, N177K) dan 7 gen sisanya dari PR8 (virus adalah 7:1 rPR8 yang mengekspresikan Tx/91 HA). (A ) Analisis Western blot dari lisat yang diperoleh dari sel MDCK yang terinfeksi pada MOI 5 selama 12 jam dengan virus mutan penghapusan glikosilasi masing-masing. Lisat dijalankan dalam kondisi reduksi dan bercak dideteksi dengan antibodi poliklonal 3951. (B) Tikus C57B/6 betina berumur 8 minggu yang terinfeksi dengan 1x10⁴ pfu dari setiap virus yang ditunjukkan. Rata-rata berat badan mencit n=5 per kelompok. Bilah kesalahan menunjukkan +/− SD untuk setiap titik waktu. (C) Tikus yang terinfeksi pada panel B diizinkan untuk melakukan serokonversi selama 27 hari dan pada saat itu mereka ditantang dengan 100 LD₅₀ Neth/09. Persen kelangsungan hidup ditampilkan. (D) Tikus yang terinfeksi 1x10⁴ pfu dari setiap mutan penghapusan glikosilasi, di mana situs glikosilasi yang sama dihilangkan dengan set alternatif substitusi asam amino dengan yang digunakan dalam B dan C. Pada 29 hari p.i. tikus ditantang dengan 100 LD₅₀ dari Neth/09. Persentase kelangsungan hidup setelah tantangan ditampilkan. Student’s t-test digunakan untuk menentukan signifikansi penurunan berat badan dan uji log-rank digunakan untuk menilai signifikansi (* P<0,05) dari hasil kelangsungan hidup.

 

SUMBER:

Rafael A. Medina, Silke Stertz, Balaji Manicassamy, Petra Zimmermann4, Xiangjie Sun, Randy A. Albrecht, Hanni Uusi-Kerttula, Osvaldo Zagordi, Robert B. Belshe, Sharon E. Frey, Terrence M. Tumpey and Adolfo García-Sastre. 2013. Glycosylations in the Globular Head of the Hemagglutinin Protein Modulate the Virulence and Antigenic Properties of the H1N1 Influenza Viruses.  Science Translational Medicine 29 May 2013: Vol. 5, Issue 187, pp. 187ra70.  DOI: 10.1126/scitranslmed.3005996

#H1N1 

#glikosilasi 

#hemagglutinin 

#virulensi 

#antigenik

 

Beberapa Jenis Virus Influenza

Ada empat jenis virus influenza: A, B, C dan D. Virus influenza manusia A dan B menyebabkan epidemi penyakit musiman (dikenal sebagai musim flu) hampir setiap musim dingin di Amerika Serikat. Virus influenza A adalah satu-satunya virus influenza yang diketahui menyebabkan pandemi flu, yaitu epidemi global penyakit flu. Sebuah pandemi dapat terjadi ketika virus influenza A yang baru dan sangat berbeda muncul yang menginfeksi manusia dan memiliki kemampuan untuk menyebar secara efisien antar manusia. Infeksi influenza tipe C umumnya menyebabkan penyakit ringan dan tidak dianggap menyebabkan epidemi flu manusia. Virus influenza D terutama menyerang ternak dan tidak diketahui menginfeksi atau menyebabkan penyakit pada manusia.

 

Virus influenza A dibagi menjadi subtipe berdasarkan dua protein pada permukaan virus: hemagglutinin (H) dan neuraminidase (N). Ada 18 subtipe hemagglutinin yang berbeda dan 11 subtipe neuraminidase yang berbeda (H1 hingga H18 dan N1 hingga N11, masing-masing). Meskipun ada 198 kombinasi subtipe influenza A yang berpotensi berbeda, hanya 131 subtipe yang telah terdeteksi di alam. Subtipe virus influenza A saat ini yang secara rutin bersirkulasi pada manusia meliputi: A(H1N1) dan A(H3N2). 

Genom virus influenza tipe A berupa rantai asam ribonukleat (ribo nucleic acid / RNA) untai tunggal, sense negatif, dengan panjang kurang lebih 13.588 nukleotida yang tersusun dalam delapan segmen yang dibungkus oleh protein nukleokapsid. 

Genom virus AI tipe A terdiri dari delapan segmen RNA, yang masing-masing menyandi hemagglutinin (HA), neuraminidase (NA), nucleoprotein (NP), matrix protein (M) M1, M2, nonstructural protein (NS) 1, NS2, polymerase acidic protein (PA), dan polymerase basic (PB) 1, PB1-F2, and PB2.

Delapan segmen gen ini bersama-sama membentuk ribonukleoprotein (RNP), dimana setiap segmen akan menyandi protein yang memiliki fungsi penting.  Struktur virus influenza A secara skematis dapat dilihat pada Gambar dibawah ini. 

Ini adalah gambar dari virus influenza. Virus influenza A diklasifikasikan berdasarkan subtipe berdasarkan sifat protein permukaan hemaglutinin (H) dan neuraminidase (N). 

Ada 18 subtipe HA yang berbeda dan 11 subtipe NA yang berbeda. Subtipe diberi nama dengan menggabungkan angka H dan N – misalnya, A(H1N1), A(H3N2).

Subtipe Influenza A dapat dipecah lebih lanjut menjadi “kelas” dan “sub-kelas” genetik yang berbeda. Lihat grafik “Virus Influenza” di bawah ini untuk gambaran visual klasifikasi ini.

Grafik ini menunjukkan dua jenis virus influenza (A,B) yang menyebabkan sebagian besar penyakit manusia dan bertanggung jawab atas musim flu setiap tahun. Virus influenza A diklasifikasikan lebih lanjut ke dalam subtipe, sedangkan virus influenza B diklasifikasikan lebih lanjut menjadi dua garis keturunan: B/Yamagata dan B/Victoria. Baik virus influenza A dan B dapat diklasifikasikan lebih lanjut ke dalam clade dan sub-clade tertentu (yang kadang-kadang disebut grup dan sub-grup).

 

Clade dan sub-clade dapat disebut sebagai "grup" dan "sub-grup", masing-masing. Klade atau kelompok influenza adalah subdivisi lebih lanjut dari virus influenza (di luar subtipe atau garis keturunan) berdasarkan kesamaan urutan gen HA mereka. Klade dan subklad ditunjukkan pada pohon filogenetik sebagai kelompok virus yang biasanya memiliki perubahan genetik yang serupa (yaitu, perubahan nukleotida atau asam amino) dan memiliki nenek moyang tunggal yang direpresentasikan sebagai simpul di pohon (lihat Gambar 1). Membagi virus ke dalam clade dan subclade memungkinkan ahli flu untuk melacak proporsi virus dari clade yang berbeda yang beredar.

 

Perhatikan bahwa clade dan sub-clade yang secara genetik berbeda dari yang lain belum tentu berbeda secara antigen (yaitu, virus dari clade atau sub-clade tertentu mungkin tidak memiliki perubahan yang berdampak pada imunitas inang dibandingkan dengan clade atau sub-clade lainnya).

Gambar 1 – ini adalah gambar pohon filogenetik. Dalam pohon filogenetik, virus terkait dikelompokkan bersama pada cabang. Virus influenza yang gen HA-nya memiliki perubahan genetik yang sama dan yang juga memiliki nenek moyang yang sama (simpul) dikelompokkan ke dalam “clades” dan “subclades” tertentu. Clade dan sub-clade ini kadang-kadang disebut sebagai "grup" dan "sub-grup".

Saat ini virus influenza A(H1N1) yang beredar terkait dengan pandemi virus H1N1 2009 yang muncul pada musim semi 2009 dan menyebabkan pandemi flu. Virus ini, yang secara ilmiah disebut "virus A(H1N1)pdm09," dan lebih umum disebut "2009 H1N1," terus beredar secara musiman sejak saat itu. Virus H1N1 ini telah mengalami perubahan genetik yang relatif kecil dan perubahan sifat antigeniknya (yaitu, sifat virus yang mempengaruhi kekebalan) dari waktu ke waktu.

 

Dari semua virus influenza yang secara rutin beredar dan menyebabkan penyakit pada manusia, virus influenza A(H3N2) cenderung berubah lebih cepat, baik secara genetik maupun antigenik. Virus influenza A(H3N2) telah membentuk banyak klad terpisah yang berbeda secara genetik dalam beberapa tahun terakhir yang terus bersirkulasi bersama.

 

Virus influenza B tidak dibagi menjadi subtipe, melainkan diklasifikasikan lebih lanjut menjadi dua garis keturunan: B/Yamagata dan B/Victoria. Mirip dengan virus influenza A, virus influenza B kemudian dapat diklasifikasikan lebih lanjut ke dalam clade dan sub-clade tertentu. Virus influenza B umumnya berubah lebih lambat dalam hal sifat genetik dan antigeniknya daripada virus influenza A, terutama virus influenza A(H3N2). Data surveilans influenza dari beberapa tahun terakhir menunjukkan ko-sirkulasi virus influenza B dari kedua garis keturunan di Amerika Serikat dan di seluruh dunia. Namun, proporsi virus influenza B dari setiap garis keturunan yang beredar dapat bervariasi menurut lokasi geografis.

 

Penamaan Virus Influenza

CDC mengikuti konvensi penamaan yang diterima secara internasional untuk virus influenza. Konvensi ini diterima oleh WHO pada tahun 1979 dan diterbitkan pada bulan Februari 1980 dalam Buletin Organisasi Kesehatan Dunia, 58(4):585-591 (1980). Pendekatan ini menggunakan komponen-komponen berikut:

Jenis antigenik (misalnya, A, B, C, D)

Inang asal (misalnya, babi, kuda, ayam, dll.). Untuk virus yang berasal dari manusia, tidak ada penunjukan inang asal yang diberikan. Perhatikan contoh berikut:

(Contoh bebek): avian influenza A(H1N1), A/duck/Alberta/35/76

(Contoh manusia): influenza musiman A(H3N2), A/Perth/16/2019

Asal geografis (mis., Denver, Taiwan, dll.)

Nomor regangan (mis., 7, 15, dll.)

Tahun pengumpulan (mis., 57, 2009, dst.)

Untuk virus influenza A, deskripsi antigen hemaglutinin dan neuraminidase diberikan dalam tanda kurung (misalnya, virus influenza A(H1N1), virus influenza A(H5N1))

Virus pandemi 2009 diberi nama berbeda: A(H1N1)pdm09 untuk membedakannya dari virus influenza musiman A(H1N1) yang beredar sebelum pandemi.

Ketika manusia terinfeksi virus influenza yang biasanya bersirkulasi pada babi (babi), virus ini disebut virus varian dan dilambangkan dengan huruf 'v' (misalnya virus A(H3N2)v).

Gambar 3 – Gambar ini menunjukkan bagaimana virus influenza diberi nama. Nama dimulai dengan jenis virus, diikuti tempat virus diisolasi, nomor strain virus, tahun diisolasi, dan terakhir subtipe virus.

 

Virus Vaksin Influenza

Satu influenza A(H1N1), satu influenza A(H3N2), dan satu atau dua virus influenza B (tergantung pada vaksinnya) termasuk dalam vaksin influenza setiap musim. Mendapatkan vaksin flu dapat melindungi terhadap virus flu yang seperti virus yang digunakan untuk membuat vaksin. Vaksin flu musiman tidak melindungi terhadap virus influenza C atau D. Selain itu, vaksin flu TIDAK akan melindungi dari infeksi dan penyakit yang disebabkan oleh virus lain yang juga dapat menyebabkan gejala seperti influenza. Ada banyak virus lain selain influenza yang dapat menyebabkan penyakit seperti influenza (ILI) yang menyebar selama musim flu.

 

Sumber :

CDC. https://www.cdc.gov/flu/about/viruses/types.htm

Terungkap! Ini Standar Madu Kelas Dunia

Kualitas Madu dan Standar Peraturan Internasional

 

Kriteria kualitas madu ditentukan dalam European Directive (1) dan dalam Codex Alimentarius Standard (2), keduanya sedang direvisi (3,4). Tinjauan dilakukan oleh anggota Komisi Madu Internasional (IHC), yang dibentuk pada tahun 1990 untuk merevisi metode dan standar madu. Komisi tersebut menyusun metode analisis yang saat ini digunakan dalam pengendalian madu rutin dan melakukan uji coba cincin bekerja sama dengan komisi madu dari Swiss Food Manual (SFM). Metode pertama kali diterbitkan di SFM (5) dan kemudian dalam bentuk yang sedikit dimodifikasi di tempat lain (6). Pekerjaan komisi ini diketuai oleh Stefan Bogdanov. Saat ini, IHC menangani kriteria komposisi untuk madu unifloral di bawah kepemimpinan Werner von der Ohe.

 

Karena metode analisis baru, lebih baik dan lebih cepat tersedia saat ini, pengenalan norma-norma baru, menggunakan metode baru ini diperlukan. Dalam publikasi terbaru kami meninjau secara ekstensif kandungan gula spesifik dan konduktivitas listrik madu, serta metode yang digunakan untuk penentuan kualitas madu (7). Dalam tulisan ini memfokuskan diskusi pada draft standar Codex Alimentarius dan Uni Eropa. Secara umum, Codex Alimentarius Standard berlaku untuk perdagangan madu di seluruh dunia, sedangkan norma regional lainnya, seperti European Honey Regulation, juga dapat ditetapkan, jika ada persyaratan kualitas regional, berbeda dengan Codex Alimentrius.

 

DRAFT UNTUK CODEX ALIMENTARIUS DAN STANDAR MADU UE

Draf terakhir untuk Codex Alimentarius Honey Standard diberikan secara lengkap pada lampiran di bawah ini. Jika diadopsi, standar ini harus diterapkan oleh pemerintah dalam perdagangan madu di seluruh dunia. Di sisi lain, kriteria komposisi khusus, yang diberikan dalam tabel satu dimaksudkan untuk penerimaan sukarela oleh mitra dagang madu.

 

APAKAH ADA PERBEDAAN ANTARA CODEX DAN STANDAR UE?

Rancangan yang diusulkan untuk standar madu di UE sangat mirip dengan standar Codex, tetapi berisi lebih sedikit detail spesifik. Berlawanan dengan rancangan Uni Eropa, dalam rancangan Codex ada paragraf khusus, yang berhubungan dengan kontaminasi, kebersihan dan pemalsuan gula, semua ini menjadi faktor kualitas yang penting saat ini. Di sisi lain, ada poin penting, yang terkandung dalam standar UE, tetapi tidak memiliki draft Codex. Jadi hanya proposal UE yang berisi definisi "industri" atau "toko roti"-madu:

 

"Madu, yang enak untuk dikonsumsi manusia, tetapi dapat memiliki rasa atau bau yang tidak spesifik, difermentasi, terlalu panas atau yang memiliki aktivitas diastase yang lebih rendah atau kandungan hidroksimetilfurfural yang lebih tinggi daripada yang ditentukan dalam norma".  Kualitas madu seperti itu diperlukan, karena madu untuk keperluan industri sering disterilkan karena alasan higienis.

 

Poin penting lainnya adalah pertanyaan tentang serbuk sari madu

Rancangan Eropa menyatakan, bahwa tidak ada komponen madu esensial yang dapat dihilangkan dari madu, sedangkan Codex paragraf 3.2 mengatakan, bahwa madu tidak boleh diproses sedemikian rupa, sehingga mengubah komposisi esensialnya. Kedua pernyataan tersebut ambigu. Mungkin ada interpretasi yang berbeda untuk pertanyaan, apakah serbuk sari madu merupakan komponen madu yang penting. Sedangkan dari segi nutrisi tidak terlalu penting, karena kandungan serbuk sari madu kurang dari 0,01% dari total, penting untuk penentuan asal botani dan geografis madu.

 

Juga, madu digunakan dalam beberapa kasus untuk desensitisasi serbuk sari, karena kandungan serbuk sarinya yang rendah. Argumen dari industri madu adalah, bahwa penyaringan yang baik seringkali diperlukan untuk menghilangkan partikel asing kecil, yang menghambat kualitas madu. Di sisi lain, paragraf 6.1.7. dari Codex mengatakan, bahwa madu, yang mengalami proses penyaringan halus untuk meningkatkan kejernihannya harus diberi label untuk memberi tahu konsumen tentang proses ini.

 

Solusi terbaik adalah memasukkan sebuah paragraf, yang menyatakan, bahwa madu harus disaring dengan penyaring dengan ukuran mata saringan lebih besar dari 0,2 mm. Federasi perlebahan Eropa yang berbeda meresepkan penggunaan filter tersebut untuk peraturan madu mereka.

 

KADAR AIR (KELEMBABAN KONTEN)

Kadar air merupakan satu-satunya kriteria komposisi yang sebagai bagian dari Honey Standard harus dipenuhi dalam perdagangan madu dunia. Madu yang dengan kadar air yang tinggi lebih memungkinkan mengalami untuk berfermentasi. Nilai maksimum 21 g/100g disarankan dalam draft untuk standar baru. Pengecualian untuk madu semanggi tidak dibenarkan oleh pengukuran selama beberapa tahun terakhir. Dengan demikian, kadar air maksimum untuk madu semanggi juga harus 21 g/ 100 g. Dalam prakteknya, nilai setinggi 21 g/100 g sangat jarang dicapai. Dalam pengendalian madu rutin yang dilakukan oleh IHA selama tahun 1989-97 pada ca. 30.000 sampel madu 91-95% dari semua madu memiliki kadar air kurang dari 20 g/100g (8) Juga di Swiss standar 20 g/100 g berhasil digunakan dalam 20 tahun terakhir, sampai revisi terakhir dari Swiss Food Ordinance, di mana nilai maksimum Uni Eropa 21 g/100 g harus diterima. Banyak organisasi perlebahan nasional (misalnya Jerman, Belgia, Austria, Italia, Swiss, Spanyol, atau lainnya?) memiliki nilai kadar air maksimum 17,5 hingga 18,5 g/100 g untuk kelas khusus madu berkualitas.

 

KRITERIA KUALITAS TERTENTU

Menurut Codex Alimentarius, standar kualitas ini tidak wajib bagi pemerintah dan dapat disepakati secara sukarela, sementara menurut rancangan Uni Eropa standar tersebut harus dipenuhi oleh semua madu ritel komersial. Seperti yang dapat dilihat, hanya ada sedikit perbedaan pada kedua draf dan keduanya tidak mengandung kriteria kualitas penting seperti kandungan gula spesifik dan konduktivitas listrik (lihat Proposal untuk Standar Madu Baru).

 

KANDUNGAN GULA YANG JELAS

Di sebagian besar madu mekar, gula pereduksi yang nyata mewakili sebagian besar gula madu, tetapi dalam madu melon, situasinya seringkali sangat berbeda. Memang, banyak madu melon memiliki oligosakarida non-pereduksi dalam jumlah tinggi seperti melezitosa, maltotriosa, dan rafinosa. Karena temuan ini, standar untuk gula semu telah dimodifikasi dalam draft Codex, dibandingkan dengan standar sebelumnya: minimum 45 g/100 g telah diusulkan, dibandingkan dengan standar lama dengan minimum 60 g/100 g . Draft Eropa mempertahankan norma lama 60 g/100g. "Sukrosa semu" diukur secara tidak langsung sebagai perbedaan antara gula total dan gula pereduksi dan seringkali dapat berbeda dari sukrosa sejati. Di sini kedua draf tersebut serupa, draf Codex termasuk lebih banyak jenis madu daripada yang Eropa. IHC mengusulkan, bahwa pengecualian untuk kandungan sukrosa yang tampak dari madu rosemary dibuat. Memang, pengukuran 33 madu rosemary Spanyol menunjukkan, bahwa sebagian besar dari madu ini memiliki lebih dari 5% sukrosa.

 

Pengukuran gula pereduksi hanya mendeteksi perbedaan antara madu mekar dan madu, tetapi perbedaan ini dapat ditentukan dengan lebih mudah dengan metode lain, mis. dengan penentuan konduktivitas listrik. Ada banyak argumen untuk mengganti pengukuran gula pereduksi dengan gula tertentu.

 

KANDUNGAN PADATAN TIDAK LARUT AIR

Pengukuran bahan tidak larut merupakan sarana penting untuk mendeteksi pengotor madu yang lebih tinggi dari maksimum yang diizinkan. Itu diatur pada masa, ketika sebagian besar madu dunia dipanen dengan menekan sisir. Namun, saat ini hampir semua madu komersial dipanen dengan sentrifugasi. Tampaknya bagi kami bahwa maksimum yang diizinkan dalam Codex dan standar Eropa 0,1 g/100 g terlalu tinggi.

 

Sebagian besar nilai yang lebih rendah, dalam kisaran 0,005 hingga 0,05 g/100 g ditemukan. Lilin, yang tidak ditentukan dengan metode Codex, merupakan sumber utama kontaminasi yang tidak larut dalam air. Untuk tujuan ini teknik filtrasi lain dapat digunakan, mis. dengan filter kertas, tetapi metode seperti itu belum diusulkan secara resmi.

 

KANDUNGAN MINERAL (ABU)

Kadar abu merupakan kriteria kualitas untuk madu asal botani, madu mekar memiliki kadar abu yang lebih rendah daripada madu melon (9). Saat ini, pengukuran ini umumnya digantikan oleh pengukuran konduktivitas listrik. Kandungan abu dapat dipertahankan sebagai faktor kualitas selama masa transisi, sampai konduktivitas diterima sebagai standar di seluruh dunia.

 

KEASAMAN

Keasaman merupakan kriteria kualitas yang penting. Fermentasi madu menyebabkan peningkatan keasaman dan karena ini nilai keasaman maksimum telah terbukti bermanfaat, meskipun ada variasi alami yang cukup besar. Standar lama menetapkan maksimum 40 miliekuivalen/kg, yang telah ditingkatkan menjadi 50 miliekuivalen/kg dalam draft Codex, karena ada beberapa madu, yang memiliki keasaman alami lebih tinggi (10).

 

AKTIVITAS DIASTASE

Aktivitas diastase madu merupakan faktor kualitas, dipengaruhi oleh penyimpanan dan pemanasan madu dan dengan demikian merupakan indikator kesegaran madu dan panas berlebih. Meskipun ada variasi alami diastase yang besar, standar nilai DN minimum 8 saat ini telah terbukti bermanfaat. Dalam kontrol madu rutin jangka panjang di IHA lebih dari 92% sampel madu mentah (n = ca. 20.000) dan lebih dari 88% sampel madu ritel (n = ca. 1000) memiliki DN lebih besar dari 8 (8). Saat menafsirkan diastase dari hasil seseorang harus mempertimbangkan bahwa madu unifloral tertentu memiliki aktivitas diastatik rendah secara alami.

 

KANDUNGAN HIDROKSIMETILFURFURAL

Faktor kualitas madu utama ini merupakan indikator kesegaran madu dan panas berlebih. Dalam madu segar praktis tidak ada hidroksimetilfurfural (HMF), tetapi meningkat selama penyimpanan, tergantung pada pH madu dan suhu penyimpanan. Beberapa federasi lebah Eropa (Jerman, Belgia, Italia, Austria, Spanyol) memasarkan sebagian madu mereka sebagai ”madu berkualitas”, dengan kandungan maksimum 15 mg/kg.

 

Dalam perdagangan internasional, nilai maksimum 40 mg/kg telah terbukti memuaskan. Dalam pengendalian madu rutin jangka panjang di IHA selama 10 tahun terakhir, lebih dari 90% sampel madu mentah (n = 30.000) dan lebih dari 85% sampel madu eceran (n = 2000) memiliki HMF kurang dari 30 mg /kg (8).

 

Usulan Codex maksimal 60 mg/kg. Usulan untuk nilai maksimum yang lebih tinggi didasarkan pada pengalaman bahwa HMF meningkat pada penyimpanan madu di negara-negara beriklim hangat. Proposal standar UE terbaru menuntut maksimum 40 mg/kg, karena dalam kondisi Eropa standar ini telah terbukti valid.

 

PROPOSAL UNTUK STANDAR INTERNASIONAL BARU

 

KONDUKTIVITAS LISTRIK

Konduktivitas adalah kriteria yang baik dari asal botani madu dan hari ini ditentukan dalam kontrol madu rutin, bukan kadar abu. Pengukuran ini tergantung pada kadar abu dan asam madu; semakin tinggi kandungannya , semakin tinggi konduktivitas yang dihasilkan (9). Ada hubungan linier antara kadar abu dan konduktivitas listrik (11):

C = 0,14 + 1,74 A

dimana C adalah daya hantar listrik dalam mili Siemens cm-1 dan A kadar abu dalam g/100 g.

 

Data konduktivitas ekstensif pada ribuan madu komersial baru-baru ini diterbitkan (7). Berdasarkan data ini kami mengusulkan bahwa madu mekar, campuran madu mekar dan madu harus memiliki kurang dari 0,8 mS/cm dan madu madu dan kastanye harus memiliki lebih dari 0,8 mS/cm (lihat tabel 5). Pengecualian adalah madu Arbutus, Banksia, Erica, Leptospermum, Melaleuca, Eucalyptus dan Tilia serta campurannya, yang memiliki variasi konduktivitas yang sangat tinggi (7).

Tabel 1 Standar Kualitas Madu menurut draft CL 1998/12-S Codex Alimentarius dan Darft 96/0114 (CNS) dari EU

* - draft Eropa mengacu pada madu honeydew dan campuran honeydew dan madu bunga, akasia, Banksia dan madu Citrus

** - IHC juga mengusulkan agar Rosemarinus dimasukkan dalam daftar ini (lihat teks)

Standar khusus untuk madu dengan asal botani dan geografis yang berbeda dapat dijelaskan ketika karakterisasi madu lebih lanjut diperlukan. Pengukuran konduktivitas mudah dan cepat dan hanya membutuhkan instrumentasi yang murah. Hal ini sangat banyak digunakan untuk diskriminasi antara honeydew dan madu mekar dan juga untuk karakterisasi madu unifloral. Oleh karena itu, pengenalan standar konduktivitas internasional direkomendasikan sebagai hal yang mendesak.

 

KANDUNGAN GULA TERTENTU

Berdasarkan data ekstensif, yang kami terbitkan baru-baru ini (7), standar umum untuk kandungan minimum jumlah fruktosa dan glukosa 60 g/100 g untuk semua madu mekar dan 45 g/100 g untuk semua madu melon dapat diusulkan (tabel 5). Standar ini dapat dipenuhi pada lebih dari 99% madu yang dianalisis. Untuk sukrosa situasinya lebih kompleks. Di sini standar umum 5 g/100 g dapat dipenuhi di lebih dari 99% madu yang dianalisis, dengan pengecualian beberapa madu unifloral seperti madu Banskia, Citrus, Hedysarum, ;Medicago dan Robinia hingga 10 g/100 g dan madu Lavandula dengan hingga 15 g/100 g sukrosa. Jumlah kandungan fruktosa dan glukosa sangat dekat dengan jumlah semua gula pereduksi, karena fruktosa dan glukosa sebagian besar mewakili lebih dari 90% dari semua gula pereduksi.

 

Memang, standar minimum yang diusulkan untuk jumlah glukosa dan fruktosa 45 dan 60 g/100 g untuk madu dan madu mekar hampir identik dengan standar yang diusulkan untuk gula pereduksi yang nyata masing-masing 45 dan 65 g/100 g. Di sisi lain, standar yang diusulkan untuk sukrosa sejati sangat mirip dengan standar untuk sukrosa semu (tabel 2). Pengecualian adalah perbedaan untuk madu honeydew, di mana "standar sukrosa yang nyata" adalah 15 g/100 g, sedangkan standar sukrosa spesifik hanya 5 g/100 g dan untuk beberapa madu Australia dan Selandia Baru, yang merupakan standar untuk gula pereduksi (tabel 2), tetapi tidak dalam standar yang diusulkan untuk gula tertentu (tabel 5) karena tidak ada data gula khusus yang tersedia untuk madu ini.

 

Tabel 2. Kandungan gula dan konduktivitas listrik: proposal untuk standar madu baru

Pengenalan standar untuk kandungan gula tertentu akan memiliki konsekuensi positif lainnya untuk kontrol rutin madu. Saat ini kandungan gula yang tampak dari sampel madu komersial diperiksa untuk kompatibilitas standar, tetapi tidak menghasilkan banyak informasi tentang kualitas madu. Di sisi lain, gula sampel madu dianalisis untuk mendapatkan informasi tentang berbagai aspek kualitas madu. Dengan demikian, rasio fruktosa/glukosa dan konsentrasi sukrosa merupakan kriteria yang baik untuk membedakan antara madu unifloral yang berbeda. Juga, kandungan gula yang lebih tinggi yang berbeda seperti melezitosa, maltotriosa merupakan indikator yang baik dari kandungan madu madu. Spektrum gula spesifik juga menghasilkan informasi tentang keaslian madu dan pemalsuan gula.

 

FAKTOR KUALITAS DI LUAR STANDAR

Ada beberapa kriteria kualitas yang berguna, yang digunakan untuk penentuan kualitas madu di luar peraturan madu internasional.

 

AKTIVITAS INVERTASE

Aktivitas invertase sangat sensitif terhadap panas dan kerusakan penyimpanan dan digunakan sebagai indikator kesegaran. Diusulkan bahwa madu segar dan tidak dipanaskan harus memiliki nomor invertase (IN) lebih dari 10; untuk madu dengan aktivitas enzimatik rendah, IN lebih dari 4 direkomendasikan (12). Meskipun, seperti madu diastase, aktivitas invertase memiliki variasi alami yang besar (13) penggunaannya telah terbukti dalam pengendalian kualitas madu. Standar invertase kesegaran juga digunakan dalam standar madu dari asosiasi peternak lebah di Jerman, Belgia dan Spanyol.

 

KONTEN PROLIN

Kandungan prolin madu merupakan kriteria kematangan madu dan dalam beberapa kasus, juga pemalsuan gula (14). Nilai minimum untuk madu asli 180 mg/kg diterima di laboratorium kontrol madu. Namun, harus diperhitungkan bahwa ada variasi prolin yang cukup besar, tergantung pada jenis madu (15).

 

ROTASI SPESIFIK

Nilai keseluruhan untuk rotasi optik adalah resultan dari nilai gula madu yang berbeda. Pengukuran rotasi spesifik saat ini digunakan di Yunani; Italia dan Inggris untuk membedakan antara madu mekar dan madu. Di Italia ditemukan bahwa madu mekar (16,17) memiliki nilai rotasi optik negatif, sedangkan madu melon memiliki nilai positif (16). Apakah metode ini mampu membedakan madu ini di wilayah geografis lain masih harus diperiksa dalam studi masa depan.

 

KESIMPULAN

 

Saat ini perlu merangkum keadaan pengetahuan tentang faktor-faktor kualitas, yang harus digunakan dalam peraturan madu internasional untuk penentuan kualitas madu.

Karena faktor kualitas ini berlaku di seluruh dunia, tidak mungkin mereka memenuhi standar kualitas semua negara. Beberapa kriteria, yang hanya berlaku di negara-negara terpisah dapat ditentukan.

Juga, beberapa asosiasi peternak lebah Eropa menetapkan kriteria kualitas yang lebih ketat untuk madu yang dijual di bawah label mereka daripada yang berlaku untuk madu eceran umum. Misalnya, nilai maksimum 17,5 -18,5% untuk kelembaban dan 15 mg/kg untuk kandungan hidroksimetilfufural dan nilai minimum 10 unit bilangan invertase ditentukan.

Selain kriteria komposisi yang dibahas, laboratorium madu khusus juga menggunakan sejumlah kriteria kualitas lain untuk menentukan asal botani dan geografis madu, terutama karakterisasi madu unifloral.

Dalam pekerjaan selanjutnya, IHC akan menyusun dan menyelaraskan metode dan kriteria yang digunakan untuk tujuan ini. Memang, sampai saat ini kriteria kualitas kimia untuk madu unifloral hanya berlaku di negara yang berbeda, tetapi tidak diakui secara resmi dalam perdagangan madu internasional.

1.Standar madu internasional ditetapkan dalam European Honey Directive dan Codex Alimentarius Standard for Honey, keduanya saat ini sedang direvisi.

2.Pengetahuan saat ini tentang kriteria kualitas yang berbeda perlu ditinjau.

3.Rancangan standar, harus mencakup standar dan metode untuk penentuan faktor kualitas berikut: kelembaban, abu, keasaman, hidroksimetilfurfural, gula pereduksi semu, sukrosa semu, aktivitas diastase dan bahan yang tidak larut dalam air.

4.Selama 30 tahun terakhir sangat sedikit penelitian tentang pengurangan gula dan kadar abu madu.

5.Penelitian banyak membahas gula spesifik dan konduktivitas listrik sebagian besar digunakan.

6.Perlu dikembangkan standar madu internasional untuk jumlah kandungan fruktosa dan glukosa, kandungan sukrosa dan konduktivitas listrik.

7.Perlu dikembangkan penggunaan faktor kualitas lain, seperti aktivitas invertase, prolin dan rotasi spesifik.

 

DAFTAR PUSTAKA

1.Council Directive of 22 July 1974 on the harmonization of the laws of the Member States relating to honey, 74/409/EEC, Official Journal of the European Communities, No L 221/14 1974.

2.Codex Alimentarius Standard for Honey, Ref. Nr. CL 1993/14-SH  FAO and WHO, Rome 1993.

3.Proposal for a directive of the European council relating to honey, EU document 96/0114, 1996.

4.Codex Alimentarius draft revised for honey at step 6 of the Codex Procedure. CX 5/10.2, CL 1998/12-S 1998.

5.Swiss Food Manual, (Schweizerisches Lebensmittelbuch) Chapter 23 A: Honey. Eidg. Drucksachen und Materialzentralle, Bern 1995.

6.Bogdanov S., Martin P. and  Lüllmann C.: Harmonised methods of the European honey commission. Apidologie (extra issue) 1-59 (1997).

7.Bogdanov, S. et al.  Honey Quality and International Regulatory Standards: Review of the Work of the International Honey Commission. Mitt. Gebiete Lebensm. Hyg., 90, in press.

8.Lüllmann, C.: Annual Reports of the Institute for Honey Analysis (1989-1997).

9.Vorwohl, G.: Die Beziehung zwischen der elektrischen Leitfähigkeit der Honige und ihrer trachtmässigen Herkunft. In: Ann. de Abeille 7, 301-309 (1964).

10.Horn, H. und Lüllmann, C.: Das grosse Honigbuch, Ehrenwirth, München 1992.

11.Piazza, M.G., Accorti,  M. e Persano Oddo, L.:  Electrical conductivity, ash, colour and specific rotatory power in Italian unifloral honeys. Apicoltura 7, 51-63 (1991).

12.Duisberg, H. und Hadorn, H.: Welche Anforderungen sind an Handelshonige zu stellen? Mitt. Gebiete Lebensm.  Hyg. 57, 386-407 (1966).

13.Persano Oddo, L., Piazza, M. and Pulcini, P.: The invertase activity of honey, Apidologie 30, 57-66, 1999

14.Von der Ohe, W., Dustmann, J. H., und von der Ohe, K.: Prolin als Kriterium der Reife des Honigs. Dtsch. Lebensm. Rundsch. 87, 383-386 (1991).

15.Bosi, G. and Battaglini, M.,: Gas chromatographic analysis of free and protein amino acids in some unifloral honeys. J. Apicult. Res. 17, 152-166 (1978).

16.Persano Oddo, L., Piazza, M. G., Sabatini,  A. G. and Accorti, M.: Characterization of unifloral honeys. Apidologie 26, 453-465 (1995).

17.Battaglini, M. e Bosi, G.: Caratterizzazione chimico-fisica dei mieli monoflora sulla base dello spettro glucidico e del potere rotatorio specifico. - Scienza e tecnologia degli Alimenti 3, 217-221 (1973).

 

SUMBER:

Honey Quality and International Regulatory Standards:  Review by the International Honey Commission. 2015.

Stefan Bogdanov (ketua, Swiss), Cord Lüllmann (wakil ketua, Jerman), Peter Martin (sekretaris, Inggris), Werner von der Ohe4, Harald Russmann, Günther Vorwohl (Jerman); Livia Persano Oddo, Anna-Gloria Sabatini, Gian Luigi Marcazzan, Roberto Piro, (Italia); Christian Flamini, Monique Morlot, Joel Lhéritier, Raymond Borneck (Prancis); Panagyotis Marioleas, Angelica Tsigouri (Yunani); Jacob Kerkvliet (Belanda), Alberto Ortiz (Spanyol), Tzeko Ivanov (Bulgaria), Bruce D'Arcy, Brenda Mossel (Australia) dan Patricia Vit (Venezuela)). https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/0005772X.1999.11099428

#StandarMadu

#CodexHoney

#KualitasMadu

#PerlebahanDunia

#FoodSafety