Diagnosa COVID-19 : Temuan serologis dan molekuler selama infeksi SARS-CoV-2: studi kasus pertama di Finlandia, Januari hingga Februari 2020

Pada 31 Desember 2019, satu klaster etiologi kasus pneumonia yang tidak diketahui dilaporkan di Wuhan, Provinsi Hubei, Tiongkok ^[1].  Virus Severe Acute Respiratory Syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) diisolasi oleh para ilmuwan Tiongkok pada 7 Januari 2020. Hingga saat ini, virus SARS-CoV-2 yang menimbulkan pandemi penyakit COVID-19 menyebar ke seluruh dunia.

Anu Haveri et al. menggambarkan urutan waktu kejadian di sekitar kasus COVID-19 pertama yang diimpor ke Finlandia, dan merangkum data klinis, molekuler dan serologis. Isolasi virus SARS-CoV-2/Finland/1/2020 yang telah berhasil dengan baik memungkinkan mereka untuk menggunakan uji mikronetralisasi atau microneutralisation (MN) Assay berdasarkan timbulnya cytopathic effect (CPE) untuk mendeteksi level antibodi yang menetralkan secara spesifik virus SARS-CoV-2. Sampel serum diagnostik kasus dan tiga kontak dekat dianalisis dan dibandingkan dengan sampel serum dari populasi orang Finlandia yang dikumpulkan pada tahun 2019.

Presentasi klinis dan konfirmasi laboratorium dari kasus ini

Kasus COVID-19 pertama di Finlandia adalah seorang turis Tiongkok berusia 30-an, yang telah meninggalkan Wuhan pada 22 Januari 2020 dan tiba di Finlandia pada 23 Januari 2020. Gejala pertamanya adalah pilek pada 26 Januari 2020 dan mual pada 27 Januari 2020. Karena demam tinggi (39°C), kelemahan dan batuk lalu ia mencari perawatan medis pada 28 Januari 2020. Kecurigaan COVID-19 sehingga dia dibawa langsung ke Rumah Sakit Pusat Lapland di Rovaniemi, di mana ia diisolasi dan diambil sampelnya pada tanggal 28 dan 29 Januari 2020 untuk dikonfirmasi adanya infeksi SARS-CoV-2 dengan uji laboratorium (Gambar 1). Infeksi SARS-CoV-2 dikonfirmasi dari sampel nasofaring pada tanggal 29 Januari 2020 oleh Laboratorium Rumah Sakit Universitas Helsinki atau Helsinki University Hospital Laboratory (HUSLAB), dan selanjutnya dikonfirmasi di Institut Kesehatan dan Kesejahteraan Finlandia atau Finnish Institute for Health and Welfare (THL) (Tabel). Kedua laboratorium melakukan pengujian RT-PCR untuk tiga target: amplop (E). RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) dan nucleocapsid (N). Primer dan probe didasarkan pada Corman et al. metode^[2]. Nilai ambang siklus atau Cycle threshold (Ct) values di atas 37 dianggap negatif.

Gambar 1.

Tabel 1.

Pasien kasus ini memiliki gejala ringan selama periode isolasi. Dia diuji PCR-negatif dalam sampel tanggal 3 dan 4 Februari 2020 dan, karena dianggap asimptomatik, dikeluarkan dari rumah sakit pada 5 Februari 2020. Satu sampel tambahan untuk serologi dan PCR diambil masing-masing pada tanggal 14 dan 17 Februari 2020.  Secara keseluruhan terdapat 21 kontak dekat dapat diidentifikasi dan bisa diperoleh 17. Empat belas masih di Finlandia dan ditempatkan di karantina selama 14 hari. Informasi tentang tiga kontak dekat yang telah meninggalkan negara itu dikomunikasikan kepada pihak yang berwenang di negara masing-masing. Untuk empat kontak dekat yang tersisa, tidak bisa diketahui secara rinci.  Dua dari 21 kontak dekat terpapar erat dan oleh karena itu sampel pada hari 4, 10, 12 dan 14 setelah gejala pertama dari kasus indeks (index case). Tindak lanjut dari semua kontak berakhir pada 11 Februari 2020 tanpa peristiwa transmisi sekunder.

Isolasi virus SARS-CoV-2/Finlandia/1/2020

Virus SARS-CoV-2 SARS-CoV-2/Finland/1/2020 diisolasi di laboratorium tingkat keamanan 3 atau biosafety level 3 (BSL-3) dalam sel Vero E6 dari Hari ke 4 swab nasofaring atau nasopharyngeal (NPS) swab dan nasofaring aspirat atau nasopharyngeal aspirate (NPA) spesimen (Tabel). Sampel diinokulasi ke dalam sel selama 1 jam dalam inkubator 5% CO2 pada suhu 37°C dan media kultur baru (Eagle's minimum essential medium (EMEM) ditambah dengan 2% serum janin sapi (FBS), 0,6 ug / mL penicillin, 60 ug / mL streptomisin, 2 mM L-glutamin, 20 mM HEPES) ditambahkan untuk inkubasi. Pada Hari ke 4 inkubasi, setengah dari kultur dipasase sesara blind-passage ke sel Vero E6 segar dan sisanya dari bagian asli diinkubasi lebih lanjut. Setelah 4 hari inkubasi, CPE yang jelas terdeteksi dalam kultur yang berasal dari NPA.  Perkembangbiakan virus stok dilakukan dengan cara pasase menggunakan dosis virus yang rendah sekali lagi dalam sel Vero E6, dan kultur virus dipanen pada Hari ke-3. Konsentrasi virus mengikuti uji RT-PCR.  Nilai Ct untuk pasase virus pertama pada hari ke 6 inkubasi adalah 17,65 dan untuk pasase virus ke 2 pada hari ke-2, sebelum timbul CPE adalah 20,63, sedangkan spesimen NPS tetap pada nilai Ct antara 35 dan 36.

Sequencing seluruh genom SARS-CoV-2 / Finlandia / 1/2020

Hampir lengkap coding region daripada SARS-CoV-2 (nomor akses GenBank: MT020781) diurutkan dari NPS yang dikumpulkan pada Hari 4 (Tabel) dan wilayah pengkodean lengkap diurutkan dari isolat virus yang diperoleh setelah tiga bagian dalam sel Vero E6. Virus ini memiliki substitusi pertama C21707T dibandingkan dengan strain referensi Wuhan-Hu-1 yang dikumpulkan di Wuhan Tiongkok, Desember 2019 (NC_045512)^[3] yang menyebabkan substitusi histidin menjadi tirosin (H49Y) dalam domain N-terminal dari domain Spike glikoprotein.

Respons antibodi selama infeksi SARS-CoV-2

Sampel serum dikumpulkan dari kasus indeks pada Hari ke 4, 9, 10 dan 20 dari timbulnya gejala pertama (Gambar 1). Adanya antibodi IgM dan IgG terhadap SARS-CoV-2 dianalisis dengan uji imunofluoresensi (IFA) menggunakan sel Vero E6 yang diinokulasi dengan virus pasase ke 4 dari isolat virus pasien SARS-CoV-2/Finland/1/2020 dan ditransfer ke slide mikroskop dan difiksasi dengan aseton (Gambar 2). Sampel serum dari kasus indeks diencerkan secara seri dan diinkubasi selama 2 jam untuk IgM dan selama 30 menit untuk IgG. Antibodi divisualisasikan dengan fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated anti-human IgM atau IgG antibodies. Sementara antibodi tidak terdeteksi pada Hari ke 4 setelah timbulnya gejala, titer IgG naik menjadi 80 dan 1.280 dan titer IgM menjadi 80 dan 320 masing-masing pada Hari ke 9 dan 20 (Tabel). Sampel serum acak dari anggota staf Universitas Helsinki (n = 19) tidak menunjukkan reaksi-ikatan spesifik pada pengenceran lebih besar dari 20 (Gambar 2).

Gambar 2.

Antibodi IgM dan IgG Anti-SARS-CoV-2 dapat dideteksi dengan uji imunofluoresensi dalam sampel dari Hari ke 9, 10 dan 20 setelah timbulnya penyakit. Baik IgM dan IgG ditemukan pada titer 80 pada Hari ke 9, titer pada Hari ke 20 adalah 320 dan 1.280. Sebagai contoh, pengenceran 1:20 dan 1:160 dari sampel Hari ke 20 ditunjukkan untuk masing-masing IgM dan IgG dari kasus indeks. Pengenceran 1:20 ditunjukkan untuk serum kontrol.

Sel Vero E6 yang terinfeksi Mock dan SARS-CoV2 yang dikumpulkan pada Hari ke 6 pasca infeksi dilisiskan dalam buffer sampel Laemmli, dan Western blotting (WB) dari lisat dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya^[4]. Pada pengenceran 1:200, serum pemulihan pada Hari ke 20 mengidentifikasi band protein SARS-CoV2 N, S dan E (Gambar 3). Pada paparan yang lebih tinggi, semua band dapat dideteksi bahkan pada pengenceran serum 1: 1.600 (Gambar 3).

Gambar 3.

Panel kiri atas: pewarnaan protein total (Ponceau S) dari membran nitroselulosa sebelum diperiksa. Panel kanan atas: strip diperiksa dengan pengenceran berbeda dari serum pasien pada paparan rendah. Panel bawah: membran yang sama dikontraskan secara individual untuk intensitas pita yang lebih tinggi. Tanda panah menunjukkan protein SARS-CoV-2, pelabelan mengasumsikan bahwa migrasi protein SARS-CoV-2 mirip dengan protein SARS-CoV yang diekspresikan Vero E6. ^[23]  Band yang berada pada ca 110 dan 90 kDa mungkin masing-masing mewakili S1 dan S2. Marker M: Precision Plus Dual Color Standards (Bio-Rad). Deteksi dilakukan menggunakan Odyssey Infrared Imaging System (LI-COR) menggunakan goat anti-human IR800 conjugate pada pengenceran 1: 10.000.

Tingkat netralisasi antibodi spesifik SARS-CoV-2 diukur dalam rangkap dua dengan uji MN di laboratorium BSL-3.  Sampel serum diinaktivasi dengan panas pada 56°C selama 30 menit dan 2 kali lipat diencerkan secara serial mulai dari 1: 4 dalam EMEM ditambah dengan 2% FBS dan antibiotik yang dilemahkan oleh panas. Lima puluh unit pembentuk plak (PFU) dari galur SARS-CoV-2/Finland/1/2020 ditambahkan ke pengenceran serum dan diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37°C. Sel-sel Vero E6 (5 × 104 / well) ditambahkan ke campuran virus-serum, dan kemudian campuran ini diinkubasi pada 96-well plate selama 4 hari dalam incubator 5% CO2 pada suhu 37°C. Netralisasi dinilai dengan timbulnya CPE pada kulture. Titik akhir atau endpoint netralisasi ditentukan sebagai titik akhir 50% dari serum yang menghambat infeksi SARS-CoV-2 dengan pengamatan adanya CPE dari sel yang diinokulasi.

Sampel serum diagnostik dari kasus indeks (index case) dan tiga kontak dekat asimptomatiknya dipelajari dengan uji MN.  Selama fase akut infeksi, tidak terdeteksi adanya netralisasi antibodi.  Pasien serokonversi untuk menetralkan antibodi antara Hari ke 4 dan 9, dengan titer meningkat menjadi 160 pada Hari 20 (Tabel). Spesimen serum dipastikan tidak toksik atau infektif pada sel.

Sampel serum yang diambil dari tiga kontak dekat hasilnya negatif dalam uji MN. Anu Haveri et al. juga menguji sampel serum yang dikumpulkan pada 2019 dari 83 penduduk Finlandia yang berusia 4 hingga 89 tahun dan semuanya dinyatakan negatif.  Sera diketahui positif untuk IgG terhadap human coronavirus OC43 dan 229E ^[5] dan antibodi kelinci atau marmot terhadap protein SARS-CoV N ^[6] tidak dapat menetralkan virus.

Pada fase awal wabah COVID-19, kasus yang dikonfirmasi di luar China sebagian besar diimpor di antara para pelancong dari Wuhan. ^[7]  Kasus pertama di Finlandia terdeteksi pada 29 Januari 2020 di antara kasus impor pertama di Eropa.  Kasus ini menunjukkan gejala ringan tanpa pneumonia: pilek, mual, demam tinggi, batuk, kelemahan otot dan kelelahan. Tidak ada peristiwa transmisi sekunder yang terdeteksi meskipun tindak lanjut aktif oleh Rumah Sakit distrik Lapland dan THL.

Pada 17 Maret 2020, 358 kasus COVID-19 tambahan yang dikonfirmasi di laboratorium telah terdeteksi di Finlandia.  Banyak dari mereka yang terkait dengan perjalanan (kebanyakan dari Italia utara dan Austria) tetapi ada juga transmisi lokal dari kasus terkait perjalanan. Risiko penularan infeksi COVID-19 komunitas nasional yang luas di Uni Eropa, Wilayah Ekonomi Eropa atau EU dan Inggris dalam beberapa minggu mendatang dianggap tinggi oleh Pusat Pencegahan dan Pengendalian Penyakit  atau European Centre for Disease Prevention and Control. ^[8]

Urutan genom virus pasien hampir identik dengan jenis referensi dari Wuhan, mencerminkan impor awal dari Tiongkok.  Kemudian informasi urutan genom di Finlandia (hingga 2 Maret) menunjukkan pengelompokan dengan strain yang beredar di Italia (lihat nextstrain.org/ncov).^[9]

Pedoman saat ini dari Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) untuk pengujian COVID-19 merekomendasikan pengumpulan sampel serum akut dan pemulihan dari pasien untuk pengujian serologis, yang dapat mendukung identifikasi respon imun terhadap patogen virus tertentu.^[10]  Asam nukleat SARS-CoV-2 telah ditemukan juga dalam cairan anal dan darah, ^[11] namun dalam penelitian ini tidak mendeteksinya dalam sampel serum dalam kasus ini. Sampai saat ini, hanya data terbatas yang tersedia pada respon antibodi selama infeksi SARS-CoV-2. ^[11,12]  Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk lebih memahami seroprevalensi antibodi terhadap berbagai coronavirus dalam populasi dan peran antibodi ini dalam risiko penyakit.

Sesuai dengan temuan sebelumnya ^[11], kami menemukan bahwa titer IgM dan IgG rendah atau tidak terdeteksi pada Hari ke 4 (hari kedua setelah masuk ke rumah sakit) namun meningkat pada Hari ke 9-10, yaitu 5-6 hari setelah pengambilan sampel pertama. Menggunakan metode deteksi lain di luar IFA serta antigen rekombinan dan menganalisis sampel dari sejumlah besar pasien akan menjelaskan lebih lanjut tentang hal ini. Waktu kemunculan pertama antibodi anti-SARS-CoV berkisar dari Hari ke 3 hingga 42 dan Hari ke 5 hingga 47 masing-masing untuk antibodi IgM dan IgG. ^[13]

Western Blotting (WB) dari sampel serum yang dikumpulkan pada masa pemulihan menunjukkan respons yang menonjol terhadap protein N dan S, menegaskan peran protein tersebut sebagai target diagnostik kandidat utama untuk tes antibodi.  Namun, serum pasien tampaknya mengenali juga protein E dan protein S1 dan S2 yang diproses. Meskipun WB mendeteksi epitop linier utama, respon antibodi yang kuat terhadap protein S berkorelasi baik dengan hasil uji MN.

Pemantauan rekasi-ikatan antibodi disarankan menjadi metode yang lebih sensitif daripada mengukur fungsi antibodi netralisasi untuk deteksi serologis infeksi human coronavirus (hCoV).^[14]  Namun, sampel hCoV OC43 dan 229E juga dapat bereaksi silang dengan pengujian ELISA SARS-CoV ^[15]. Tes MN berbasis SARS-CoV-2 CPE menggunakan virus hidup tampaknya sangat spesifik, sementara sulit untuk melakukan karena membutuhkan laboratorium BSL-3.  Peningkatan setidaknya 4 kali lipat dalam netralisasi antibodi yang menunjukkan respons positif terdeteksi pada Hari ke 9-10 setelah gejala pertama dan pada Hari ke 20, tingkat antibodi masih meningkat. Temuan kami menunjukkan bahwa uji MN spesifik untuk antibodi fungsional SARS-CoV-2 dan dapat diterapkan dalam pengawasan kekebalan populasi untuk virus ini. Uji ini dapat digunakan sebagai alat konfirmasi untuk spesifisitas SARS-CoV-2 dalam pengembangan alat diagnostik yang lebih mudah diakses seperti tes berdasarkan deteksi binding antibodies. Studi sebelumnya pada pasien dengan infeksi SARS-CoV menunjukkan bahwa waktu rata-rata untuk serokonversi adalah 20 hari, saat itu 60-75% pasien memiliki IgG terhadap virus. ^[13,16] Antibodi IgM dan IgG hadir dalam waktu 2 minggu sejak timbulnya gejala dalam penelitian ini menunjukkan bahwa pasien yang baru sembuh mungkin merupakan sumber antibodi terapeutik yang sesuai. ^[17]  Sesuai dengan temuan ini, laporan pracetak baru-baru ini pada pasien yang dirawat di rumah sakit dengan infeksi SARS-CoV-2 yang dikonfirmasi di Tiongkok menunjukkan bahwa waktu rata-rata untuk serokonversi adalah 11-14 hari, tergantung pada uji imunologis yang digunakan.^[18]

Tidak terdapat netralisasi antibodi SARS-CoV-2 yang terdeteksi pada sampel yang kontak dekat maupun sampel populasi kontrol yang dikumpulkan selama 2019 di Finlandia. Prevalensi rendah (0,21%) antibodi terhadap koronavirus Middle East Respiratory Syndrome dilaporkan pada populasi umum Qatar.^[19]  Sebuah meta-analisis seroprevalensi untuk SARS-CoV di antara populasi manusia yang berbeda menghasilkan seroprevalensi rendah secara keseluruhan (0,10%), meskipun sedikit lebih tinggi (0,23%) di antara petugas kesehatan dan orang lain yang memiliki kontak dekat dengan pasien SARS. ^[20]  Ikatan dan netralisasi antibodi HCoV ditemukan lebih tinggi pada orang dewasa yang lebih tua.^[14]  Total 97% dan 99% sampel serum dari orang dewasa yang sehat masing-masing memiliki antibodi terhadap HCoV-229E dan HCoV-OC43,^[21]  dan 75% dan 65% dari anak-anak dalam kelompok usia 2,5-3,5 tahun ditemukan menjadi seropositif masing-masing terhadap HCoV-NL63 dan HCoV-229E ^[22].

Sementara telah disarankan bahwa keterlambatan serokonversi pada kebanyakan pasien SARS mengurangi nilai uji serologis selama inkubasi dan fase awal SARS,^[13] pengujian serologis disarankan untuk konfirmasi infeksi SARS-CoV-2. ^[11]  Setelah memahami dengan baik kinetika, spesifisitas, dan sensitivitas uji dalam pengembangan uji serologis dapat membantu pelacakan kontak dalam suatu kluster dan bisa berperan dalam mendiagnosis infeksi SARS-CoV-2 akut dan yang sudah berlalu.

Daftar Pustaka

1.   World Health Organization (WHO). Novel Coronavirus (2019-nCoV) Situation report - 1. Geneva: WHO, 21 Jan 2020. Available from: https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/situation-reports/20200121-sitrep-1-2019-ncov.pdf

2.  Corman VM, Landt O, Kaiser M, Molenkamp R, Meijer A, Chu DKW, et al. Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR. Euro Surveill. 2020;25(3).  https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045  PMID: 31992387 

3.   Wu F, Zhao S, Yu B, Chen YM, Wang W, Song ZG, et al. A new coronavirus associated with human respiratory disease in China. Nature. 2020;579(7798):265-9.  https://doi.org/10.1038/s41586-020-2008-3  PMID: 32015508 

4.   Korzyukov Y, Hetzel U, Kipar A, Vapalahti O, Hepojoki J. Generation of anti-boa immunoglobulin antibodies for serodiagnostic applications, and their use to detect anti-reptarenavirus antibodies in boa constrictor. PLoS One. 2016;11(6):e0158417.  https://doi.org/10.1371/journal.pone.0158417  PMID: 27355360 

5.     Mäkelä MJ, Puhakka T, Ruuskanen O, Leinonen M, Saikku P, Kimpimäki M, et al. Viruses and bacteria in the etiology of the common cold. J Clin Microbiol. 1998;36(2):539-42.  https://doi.org/10.1128/JCM.36.2.539-542.1998  PMID: 9466772 

6. Ziegler T, Matikainen S, Rönkkö E, Osterlund P, Sillanpää M, Sirén J, et al. Severe acute respiratory syndrome coronavirus fails to activate cytokine-mediated innate immune responses in cultured human monocyte-derived dendritic cells. J Virol. 2005;79(21):13800-5.  https://doi.org/10.1128/JVI.79.21.13800-13805.2005  PMID: 16227300 

7. Backer JA, Klinkenberg D, Wallinga J. Incubation period of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) infections among travellers from Wuhan, China, 20-28 January 2020. Euro Surveill. 2020;25(5).  https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.5.2000062  PMID: 32046819 

8.   European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC). Novel coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic: increased transmission in the EU/EEA and the UK – sixth update. Stockholm: ECDC, 12 Mar 2020. Available from: https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/rapid-risk-assessment-novel-coronavirus-disease-2019-covid-19-pandemic-increased

9. Hadfield J, Megill C, Bell SM, Huddleston J, Potter B, Callender C, et al. Nextstrain: real-time tracking of pathogen evolution. Bioinformatics. 2018;34(23):4121-3.  https://doi.org/10.1093/bioinformatics/bty407  PMID: 29790939 

10.World Health Organization (WHO). Laboratory testing for 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) in suspected human cases. ISBN 978-92-4-000097-1. Geneva: WHO; 17 Jan 2020. Available from: https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=2ahUKEwiOw-i44ZLoAhWWFcAKHZmJCIoQFjAAegQIBBAB&url=https%3A%2F%2Fapps.who.int%2Firis%2Frest%2Fbitstreams%2F1266309%2Fretrieve&usg=AOvVaw1YNVgNwua9Dpj5c-PSD5c8

11.Zhang W, Du RH, Li B, Zheng XS, Yang XL, Hu B, et al. Molecular and serological investigation of 2019-nCoV infected patients: implication of multiple shedding routes. Emerg Microbes Infect. 2020;9(1):386-9.  https://doi.org/10.1080/22221751.2020.1729071  PMID: 32065057 

12.  Bai SL, Wang JY, Zhou YQ, Yu DS, Gao XM, Li LL, et al. [Analysis of the first cluster of cases in a family of novel coronavirus pneumonia in Gansu Province]. Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi. 2020;54(0):E005. Chinese. PMID: 32064855 

13. Chen X, Zhou B, Li M, Liang X, Wang H, Yang G, et al. Serology of severe acute respiratory syndrome: implications for surveillance and outcome. J Infect Dis. 2004;189(7):1158-63.  https://doi.org/10.1086/380397  PMID: 15031782 

14. Gorse GJ, Donovan MM, Patel GB. Antibodies to coronaviruses are higher in older compared with younger adults and binding antibodies are more sensitive than neutralizing antibodies in identifying coronavirus-associated illnesses. J Med Virol. 2020;92(5):512-7.  https://doi.org/10.1002/jmv.25715  PMID: 32073157 

15.  Woo PC, Lau SK, Wong BH, Chan KH, Hui WT, Kwan GS, et al. False-positive results in a recombinant severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus (SARS-CoV) nucleocapsid enzyme-linked immunosorbent assay due to HCoV-OC43 and HCoV-229E rectified by Western blotting with recombinant SARS-CoV spike polypeptide. J Clin Microbiol. 2004;42(12):5885-8.  https://doi.org/10.1128/JCM.42.12.5885-5888.2004  PMID: 15583332 

16.Peiris JSM, Chu CM, Cheng VCC, Chan KS, Hung IFN, Poon LLM, et al. Clinical progression and viral load in a community outbreak of coronavirus-associated SARS pneumonia: a prospective study. Lancet. 2003;361(9371):1767-72.  https://doi.org/10.1016/S0140-6736(03)13412-5  PMID: 12781535 

17. Chen L, Xiong J, Bao L, Yuan S. Convalescent plasma as a potential therapy for COVID-19. The Lancet Infectious Diseases. Available online 27 February 2020.Forthcoming.  https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30141-9 

18.Zhao J, Yuan Q, Wang H, Liu W, Liao X, Su Y et al. Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients of novel coronavirus disease. Pre-print. 2019medRxiv 2020.03.02.20030189.

19. Al Kahlout RA, Nasrallah GK, Farag EA, Wang L, Lattwein E, Müller  MA, et al. Comparative serological study for the prevalence of anti-MERS coronavirus antibodies in high- and low-risk groups in Qatar. J Immunol Res. 2019;2019:1386740.  https://doi.org/10.1155/2019/1386740  PMID: 30906787 

20.Leung GM, Lim WW, Ho LM, Lam TH, Ghani AC, Donnelly CA, et al. Seroprevalence of IgG antibodies to SARS-coronavirus in asymptomatic or subclinical population groups. Epidemiol Infect. 2006;134(2):211-21.  https://doi.org/10.1017/S0950268805004826  PMID: 16490123 

21. Che XY, Qiu LW, Liao ZY, Wang YD, Wen K, Pan YX, et al. Antigenic cross-reactivity between severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus and human coronaviruses 229E and OC43. J Infect Dis. 2005;191(12):2033-7.  https://doi.org/10.1086/430355  PMID: 15897988 

22. Dijkman R, Jebbink MF, El Idrissi NB, Pyrc K, Müller MA, Kuijpers TW, et al. Human coronavirus NL63 and 229E seroconversion in children. J Clin Microbiol. 2008;46(7):2368-73.  https://doi.org/10.1128/JCM.00533-08  PMID: 18495857 

23. Wu XD, Shang B, Yang RF, Yu H, Ma ZH, Shen X, et al. The spike protein of severe acute respiratory syndrome (SARS) is cleaved in virus infected Vero-E6 cells. Cell Res. 2004;14(5):400-6.  https://doi.org/10.1038/sj.cr.7290240  PMID: 15450134

Sumber:

Serological and molecular findings during SARS-CoV-2 infection: the first case study in Finland, January to February 2020.  Eurosurveillance. European Journal on Infectious Disease Surveilance, Epidemiology, Prenvention and Control.  https://www.eurosurveillance.org/content/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.11.2000266.  Diunduh tanggal 26 Maret 2020 jam 09:30.

Kebijakan Jepang: Pengendalian Novel Coronavirus

Pemerintah sedang melakukan serangkaian langkah-langkah untuk mengontrol coronavirus baru (COVID-19), mengikuti Kebijakan Dasar untuk Pencegahan dan Pengendalian Novel Coronavirus, ditetapkan oleh Novel Coronavirus Response Headquarter pada 25 Februari.  Kebijakan dasar Jepang untuk Pengendalian Penyakit Novel Coronavirus adalah  sebagai berikut.

1. Situasi dan tujuan Kebijakan Dasar saat ini

Pasien yang tidak memiliki rute penularan yang jelas dilaporkan masuk secara sporadis beberapa daerah di Jepang.

Namun, saat ini telah diidentifikasi tidak ada daerah dengan penyebaran infeksi  skala besar.

Untuk mengakhiri epidemi ini sesegera mungkin, sangat penting untuk mencegah satu cluster berkembang ke cluster lain, dan  tindakan harus diambil secara komprehensif.

Penting juga untuk mengambil langkah-langkah komprehensif dan mengurangi tingkat kenaikan pasien sebanyak mungkin.

Untuk mempersiapkan kemungkinan peningkatan pasien, inilah saatnya memperkuat sistem kesehatan untuk memberikan perawatan medis yang diperlukan terutama untuk pasien yang parah.

Saat ini merupakan waktu yang sangat penting untuk meminimalkan dampak negatif kesehatan di masa depan.

2. Pengetahuan terkini tentang infeksi coronavirus yang baru (dihilangkan)

3. Tujuan penanggulangan saat ini

Akhiri epidemi pada tahap awal sambil menekan laju peningkatan pasien dan meminimalkan skala epidemi.

Meminimalkan timbulnya kasus yang parah.

Meminimalkan dampak terhadap masyarakat dan ekonomi Jepang.

4. Ringkasan Kebijakan Dasar untuk Kontrol Novel Coronavirus

(1) Berbagi informasi dengan individu, sektor swasta, dan daerah

a) Memberikan informasi yang akurat dan jelas dan mendorong respons yang tenang.

b) Dorong karyawan dan personel lain untuk mengambil hari libur jika mereka punya demam atau gejala mirip flu lainnya, dan mempromosikan teleworking dan menggilir jam kerja.

c) Menyerukan perlunya mempertimbangkan kembali penyelenggara suatu acara.

d) Memberikan informasi dan dukungan yang sesuai untuk warga negara Jepang di suatu negara yang terjadi penyebaran infeksi penyakit ini.

e) Memberikan informasi yang tepat dan cepat kepada masyarakat, pemerintah asing dan turis asing.

(2) Memahami situasi infeksi di Jepang

Merubah fokus uji PCR ke konfirmasi diagnosis pneumonia pasien yang membutuhkan rawat inap, sambil memperkuat pengawasan sistem untuk memahami situasi epidemi di Jepang.

(3) Tindakan untuk mengendalikan infeksi.

a) Meminta kerja sama masyarakat umum di komunitasnya, untuk menjaga terjadinya  peningkatan pasien agar secara sukarela mereka menahan diri untuk tidak keluar rumah.

b) Meminta Kepala sekolah, melalui pemerintah daerah, untuk mengambil angkah-langkah yang tepat, termasuk penutupan sementara sekolah.

(4) Sistem kesehatan untuk memberikan perawatan medis

a) Menerima pasien yang diduga dari coronavirus novel di medis umum lembaga di masyarakat setelah sepenuhnya mempertimbangkan pengendalian infeksi tindakan, sedangkan pasien dengan gejala seperti flu ringan tinggal di rumah. Mempersiapkan perawatan medis yang sesuai pada tahap awal untuk orang tua dan orang-orang dengan penyakit yang mendasarinya.

b) Membangun sistem kesehatan untuk memberikan perawatan medis yang tepat di rumah sakit.

c) Memperkuat langkah-langkah pengendalian infeksi.

(5) Tindakan kontrol perbatasan

Melaksanakan pembatasan masuknya orang dari luar negeri dan memberikan rekomendasi penangguhan perjalanan untuk mencegah masuknya orang yang terinfeksi masuk ke Jepang.

(6) Lainnya

a) Permintaan untuk meningkatkan produksi dan memastikan kelancaran pasokan masker, desinfektan, dll.

b) Menjaga kerjasama internasional yang erat dan mengumpulkan informasi. Aktif berbagi pengetahuan yang diperoleh di Jepang dengan WHO dan lembaga terkait.

c) Memperhatikan pertimbangan yang sesuai dengan hak asasi manusia pasien dan mereka yang terlibat dalam kegiatan pengendalian infeksi.

5. Maju terus

Berdasarkan Kebijakan Dasar ini, kementerian dan lembaga akan bekerja sama satu dengan lainnya dan mengumumkan langkah konkret.  Jika situasi berkembang atau pengetahuan ilmiah baru mengharuskan revisi Kebijakan, maka kebijakan tersebut akan diperbarui dan dibuktikan setiap kali, dengan mempertimbangkan diskusi para ahli.

Respons Pemerintah atas Penyakit Coronavirus 2019 (COVID-19), 23 Maret 2020

Tujuan dan Alasan Respons Pemerintah

Sejumlah tindakan karantina telah diambil terhadap penyakit novel coronavirus, tetapi pasien yang tidak memiliki rute penularan telah dilaporkan secara sporadis di beberapa daerah di Jepang, dan di beberapa daerah, sekelompok kecil pasien telah dikonfirmasi.  Namun demikian, saat ini, tidak ada daerah di mana penyebaran infeksi berskala besar telah diidentifikasi.

Untuk mengakhiri epidemi ini sesegera mungkin, sangat penting untuk mencegah satu cluster dari mengembangkan cluster lain, dan langkah-langkah komprehensif harus diambil. Penting juga untuk membatasi laju peningkatan pasien melalui tindakan pencegahan, untuk mengendalikan epidemi di Jepang.

Selain itu, saat ini juga merupakan waktu untuk membangun dan meningkatkan pengaturan termasuk sistem kesehatan untuk memberikan perawatan medis yang diperlukan terutama untuk pasien yang parah, dan untuk mempersiapkan kemungkinan peningkatan pasien di Jepang.

Gambar 1.

Pencegahan infeksi kelompok

Dalam banyak kasus, SARS-CoV-2 tidak menular dari orang yang terinfeksi kepada orang-orang di sekitar mereka.  Namun, ada beberapa kasus di mana diduga bahwa satu orang menyebarkan infeksi ke banyak orang lain (kasus yang terkait dengan perahu-rumah (Yakata-bune houseboat) dan pusat kebugaran (fintness center).  Selain itu, telah dilaporkan sekelompok kecil wabah pasien di beberapa daerah.

Menurut analisis jumlah penularan sekunder yang disebabkan oleh satu orang yang terinfeksi, berdasarkan kasus-kasus yang relevan, telah terungkap bahwa jumlah penularan sekunder adalah signifikan dalam kasus-kasus bahwa akar infeksi berada di ruang tertutup dengan sedikit ventilasi. (Grafik 1).

Grafik 1.

Dianjurkan untuk tidak berkumpul dalam kelompok di tempat-tempat di mana orang-orang cenderung melakukan kontak satu sama lain di bawah ventilasi yang buruk. Dalam kasus yang mengadakan suatu acara, mengingat ada risiko tinggi infeksi di tempat-tempat dengan ventilasi yang buruk atau di lingkungan di mana orang berbicara satu sama lain dalam jarak dekat, diminta masing-masing penyelenggara untuk meninjau perlunya mengadakan acara tersebut, tidak peduli seberapa besar atau kecil, dan lakukan upaya maksimal seperti menghindari menciptakan ruang dengan ventilasi yang buruk sebanyak mungkin saat melaksanakan suatu acara.

Kunci Kebijakan Pengendalian Penyakit

1.Skrining PCR

2.Penutupan Sekolah

3.Fasilitas Kesejahteraan Sosial untuk Lansia

Dasar pemikiran dan struktur pelaksanaan skrining PCR di Jepang

Pemerintah akan memastikan kapasitas skrining PCR yang memadai sehingga semua pasien dapat menerima tes PCR ketika dokter menganggap perlu.

Kapasitas penyaringan PCR telah mencapai sekitar 6.000 sampel per hari dengan kerja sama dari National Institute of Infectious Diseases dan stasiun karantina, serta Lembaga Kesehatan Masyarakat, perusahaan penyaringan sektor swasta, dan universitas. Diperkirakan akan melebihi 8.000 per hari pada akhir Maret.

Skrining PCR sekarang ditanggung oleh asuransi perawatan kesehatan sehingga memudahkan tes yang diperlukan untuk pasien. Mereka yang berkonsultasi dengan Call Center untuk orang Jepang yang kembali dan kontak yang berpotensi (tersedia 24 jam) dan yang dirasa perlu untuk melakukan penyaringan oleh masing-masing fasilitas rawat jalan untuk mereka yang kembali dan kontak potensial, diteruskan oleh Call Center, berhak untuk meminta tes langsung dari salah satu lembaga skrining sektor swasta tanpa melalui pusat kesehatan masyarakat.

Ketika dokter merasa perlu untuk melakukan tes PCR, pasien akan dirujuk ke fasilitas rawat jalan untuk kembali dan kontak potensial, dan menjalani skrining berdasarkan keputusan yang dibuat oleh dokter.

Bertujuan untuk mencegah penolakan permintaan tes karena kapasitas lokal yang terbatas terkait skrining, pemerintah akan lebih memfasilitasi proses untuk memastikan bahwa setiap daerah dapat melakukan tes yang diperlukan dengan berbagi kit diagnostik dan reagen di antara area yang lebih luas.

Pada saat yang sama, kit uji diagnostik cepat yang baru sedang dalam pengembangan yang secara signifikan dapat mempersingkat waktu pengujian. Tujuannya adalah untuk mulai menggunakannya di situs medis dalam bulan Maret.

Gambar 2.

Alasan untuk meminta kemungkinan pasien menahan diri dari segera berkonsultasi dengan lembaga medis

Pertama dan terutama, sebagian besar gejala pilek, demam, kelesuan, atau kesulitan bernafas, pada saat ini, disebabkan oleh penyakit selain penyakit coronavirus yang baru, seperti influenza. Jika pilek atau influenza diduga, disarankan untuk berkonsultasi dengan dokter keluarga atau dokter lain di sekitarnya seperti biasa.

Sementara itu, pasien yang diduga dari coronavirus baru mengunjungi fasilitas rawat jalan untuk mereka yang kembali dan kontak potensial yang dirujuk oleh Call Center untuk Orang-Orang Jepang yang kembali dan kontak yang berpotensi; ketika seseorang tidak benar-benar terinfeksi, mengunjungi institusi medis tersebut, yang memiliki fasilitas rawat jalan, tanpa konsultasi yang tepat, hanya karena ia khawatir akan infeksi, akan meningkatkan risiko infeksi.

Jika ada kekhawatiran tentang infeksi oleh coronavirus novel, disarankan untuk berkonsultasi dengan Call Center. Daftar lembaga medis yang memiliki fasilitas rawat jalan tersebut tidak diungkapkan. Keputusan ini didasarkan pada pelajaran yang diperoleh selama pandemi influenza novel 2009 dimana butuh waktu untuk memberikan perawatan kepada mereka yang membutuhkan perhatian segera karena banyak orang mengunjungi institusi medis tertentu di beberapa prefektur. Ini adalah respons yang diperlukan untuk memprioritaskan penyediaan perawatan bagi mereka yang membutuhkan perhatian segera (yaitu pasien dengan gejala parah yang membutuhkan perawatan intensif). Pemerintah meminta pengertian masyarakat.

Alasan untuk hasil negatif awal tes PCR berubah positif (dalam kasus seperti kapal pesiar

Ada beberapa alasan di balik kasus-kasus itu bahwa beberapa penumpang dinyatakan positif setelah turun dari kapal pesiar. Sebagai contoh, dapat dianggap bahwa, bahkan jika seseorang terinfeksi dengan virus corona baru, orang tersebut dapat melakukan tes negatif karena jumlah partikel virus tidak meningkat cukup untuk melebihi batas minimum deteksi pada tahap awal infeksi. Karena itu, ketika mengikuti tes lagi setelah jumlah partikel virus meningkat secara cukup, orang tersebut dapat dites positif.

PENUTUPAN SEKOLAH SEMENTARA

Pasien tanpa rute penularan yang jelas dilaporkan secara sporadis di beberapa daerah di Jepang.  Untuk mengakhiri epidemi ini sesegera mungkin, sangat penting untuk mencegah timbulnya kelompok pasien dan satu kelompok dari yang lain, sebagaimana diuraikan dalam Kebijakan Dasar untuk Pencegahan dan Pengendalian SARS-CoV-2 yang dikompilasi pada 25 Februari berdasarkan pakar penilaian. Satu hingga dua minggu mendatang sangat kritis.

Rute penularan umumnya melalui tetesan dan kontak. Ada risiko infeksi yang lebih tinggi di tempat-tempat seperti sekolah, tempat orang menghabiskan banyak waktu dalam kelompok, setiap hari.  Sementara telah dilaporkan bahwa risiko mengembangkan gejala parah sangat tinggi di kalangan orang tua, ada juga kasus infeksi di kalangan anak-anak.

Untuk mencegah infeksi di kalangan anak-anak, kita harus mengurangi risiko infeksi di seluruh negeri, selain beberapa daerah ini.  Oleh karena itu, dengan memprioritaskan kesehatan dan keselamatan anak-anak di atas segalanya, kami telah meminta semua sekolah dasar, sekolah menengah pertama dan sekolah-sekolah lain di seluruh negeri untuk menutup sementara sampai liburan musim semi.

TAMANPENDIDIKAN USIA DINI DAN TAMAN KANAK-KANAK

Taman pendidikan usia dini dan taman kanak-kanak akan dibuka seperti biasa.

Mereka mungkin ditutup sementara jika ada anak yang bersekolah di taman penitipan atau taman kanak-kanak, staf mereka, atau orang lain yang kontak virus corona baru, atau jika pemerintah daerah atau pihak berwenang terkait penetapan bahwa infeksi menyebar di daerah sekitarnya.  Bahkan dalam kasus-kasus seperti itu, Pemerintah akan meminta agar langkah-langkah alternatif diambil, termasuk kunjungan ke rumah anak-anak oleh staf atau pendidik anak usia dini untuk pengasuhan anak jangka pendek.

Harap diperhatikan juga bahwa pendidik anak usia dini dan taman kanak-kanak dapat ditutup sementara atas kebijakan sekolah, dll. Jika banyak anak, staf, atau orang lain terkena flu musiman normal.

LANGLAH-LANGKAH PENCEGAHAN DIAMBIL DI PANTI JOMPO

Risiko mengembangkan gejala parah sangat tinggi di kalangan orang tua dan pasien dengan penyakit yang mendasarinya. Penting untuk menghentikan penularan virus, dengan tidak membawa virus ke dalam atau menyebarkannya di perawatan lansia dan fasilitas lainnya. Oleh karena itu, pemerintah bekerja sama dengan pemerintah kota setempat, yang memiliki wewenang untuk menunjuk atau mengawasi fasilitas masing-masing, dan kelompok-kelompok terkait, untuk memastikan bahwa langkah-langkah pencegahan dilaksanakan secara menyeluruh, memberikan titik perhatian pada fasilitas-fasilitas ini secara nasional.

Pemerintah mendesak fasilitas untuk mengambil langkah-langkah untuk memutus penularan, sesuai dengan manual pengendalian infeksi yang dikeluarkan oleh Kementerian Kesehatan, Perburuhan dan Kesejahteraan, seperti melakukan perilaku batuk, termasuk memakai masker wajah, dan kebersihan dengan mencuci tangan atau menggunakan pembersih tangan tidak hanya oleh orang tua dan staf tetapi juga pengunjung dan kontraktor; dan memastikan pemakaian masker, celemek, dan sarung tangan selama perawatan, mencuci tangan sebelum memberi makan, dan menyediakan piring bersih dengan makanan.

Mengingat status wabah SARS-CoV-2, kami sangat meminta berbagai langkah termasuk:

Memastikan setiap pegawai mengukur suhu tubuh mereka sebelum pergi bekerja, dan jika mereka demam atau gejala lain, mereka menahan diri untuk tidak pergi bekerja;

Kegiatan kunjungan sebaiknya dibatasi, kecuali untuk keadaan darurat dan jika benar-benar diperlukan, dan jika kunjungan semacam tersebut dilakukan, maka suhu pengunjung harus diukur dan kunjungan mereka harus ditolak jika terdeteksi demam; dan

Pengambilan dan pengiriman dari perusahaan jasa pengiriman dan lainnya harus dilakukan hanya di bagian luar rumah atau kantor tertentu seperti pintu masuk; dan ketika memasuki gedung, suhu badan pengantar barang harus diukur, dan jika mereka demam maka mereka ditolak masuk. 

Sumber:

Primer Minister of Japan and His Cabinet:

http://japan.kantei.go.jp/ongoingtopics/_00013.html    

diunduh 24 Maret 2020 jam 07:30