Empat Obat Coronavirus Yang Paling Menjanjikan

WHO Luncurkan Uji Coba Besar Global dari Empat Obat Coronavirus Yang Paling Menjanjikan

Obat kombo sudah digunakan untuk melawan HIV. Pengobatan malaria pertama kali diuji selama Perang Dunia II. Antiviral baru yang menjanjikan terhadap Ebola gagal tahun lalu.

Bisakah salah satu dari obat-obatan ini memegang kunci untuk menyelamatkan pasien penyakit coronavirus 2019 (COVID-19) dari bahaya serius atau kematian ?

Pada hari Jumat, Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) mengumumkan uji coba global besar-besaran, yang disebut SOLIDARITY, untuk mengetahui apakah ada yang bisa mengobati infeksi dengan coronavirus baru untuk penyakit pernapasan berbahaya. Ini merupakan upaya yang belum pernah terjadi sebelumnya — dorongan habis-habisan, dikoordinasi untuk mengumpulkan data ilmiah yang kuat dengan cepat selama pandemi. Penelitian, yang dapat mencakup ribuan pasien di puluhan negara, telah dirancang sesederhana mungkin sehingga bahkan rumah sakit yang kewalahan oleh serangan COVID-19 pasien dapat berpartisipasi.

Dengan sekitar 15% pasien COVID-19 menderita penyakit parah dan rumah sakit kewalahan, perawatan sangat dibutuhkan. Jadi, daripada membuat senyawa dari awal yang mungkin membutuhkan waktu bertahun-tahun untuk dikembangkan dan diuji, para peneliti dan lembaga kesehatan masyarakat mencari untuk menggunakan kembali obat-obatan yang telah disetujui untuk penyakit lain dan diketahui sebagian besar aman. Mereka juga melihat obat yang tidak disetujui yang telah bekerja dengan baik dalam penelitian pada hewan dengan dua coronavirus mematikan lainnya, yang menyebabkan severe acute respiratory syndrome (SARS) dan Middle East Respiratory Syndrome (MERS).

Obat-obatan yang memperlambat atau membunuh novel coronavirus, yang disebut severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2), dapat menyelamatkan nyawa pasien yang sakit parah, tetapi mungkin juga diberikan secara profilaksis untuk melindungi petugas kesehatan dan orang lain dengan risiko tinggi infeksi. Pengobatan juga dapat mengurangi waktu yang dihabiskan pasien di unit perawatan intensif, mengurangi penggunaan tempat tidur kritis di rumah sakit.

Para ilmuwan telah menyarankan lusinan senyawa yang ada untuk pengujian, tetapi WHO berfokus pada apa yang dikatakan empat obat yang paling menjanjikan: (1) senyawa antivirus eksperimental yang disebut remdesivir; (2) obat malaria chloroquine dan hydroxychloroquine; (3) kombinasi dua obat HIV, (4) lopinavir dan ritonavir; dan kombinasi yang sama plus interferon-beta, pembawa pesan sistem kekebalan tubuh yang dapat membantu melumpuhkan virus. Beberapa data tentang penggunaannya pada pasien COVID-19 telah muncul — kombo HIV gagal dalam penelitian kecil di Cina — tetapi WHO percaya uji coba besar dengan beragam pasien yang lebih besar diperlukan.

Mendaftarkan ke SOLIDARITY mudah. Ketika seseorang dengan kasus COVID-19 yang dikonfirmasi dianggap memenuhi syarat, dokter dapat memasukkan data pasien ke dalam situs web WHO, termasuk kondisi mendasar yang dapat mengubah arah penyakit, seperti diabetes atau infeksi HIV. Peserta harus menandatangani formulir surat persetujuan yang dipindai dan dikirim ke WHO secara elektronik. Setelah dokter menyatakan obat apa yang tersedia di rumah sakitnya, situs web akan mengacak pasien menjadi salah satu obat yang tersedia atau ke perawatan standar lokal untuk COVID-19.

“Setelah itu, tidak diperlukan lagi pengukuran atau dokumentasi,” kata Ana Maria Henao-Restrepo, seorang petugas medis di Departemen Vaksin dan Biologi Departemen Imunisasi WHO. Dokter akan mencatat hari pasien meninggalkan rumah sakit atau meninggal, lama tinggal di rumah sakit, dan apakah pasien membutuhkan oksigen atau ventilator, katanya. "Itu saja."

Desainnya bukan double-blind, standar emas dalam penelitian medis, sehingga mungkin ada efek plasebo dari pasien yang mengetahui mereka menerima obat kandidat. Tetapi WHO mengatakan mereka harus menyeimbangkan ketegasan ilmiah terhadap kecepatan. Gagasan SOLIDARITY muncul kurang dari 2 minggu yang lalu, kata Henao-Restrepo, dan agensi berharap untuk memiliki dokumentasi pendukung dan pusat manajemen data yang didirikan minggu depan. "Kami melakukan ini dalam waktu singkat," katanya.

“Penting untuk mendapatkan jawaban dengan cepat, untuk mencari tahu apa yang berhasil dan apa yang tidak berhasil. Kami berpikir bahwa bukti acak adalah cara terbaik untuk melakukannya.”Ana Maria Henao-Restrepo, Organisasi Kesehatan Dunia (WHO).

Arthur Caplan, ahli bioetika di New York University Langone Medical Center mengatakan ia menyukai desain penelitian ini. "Tidak ada yang mau membebani “pengasuh” garis depan yang kewalahan dan mengambil risiko," kata Caplan. Rumah sakit yang tidak terlalu terbebani mungkin dapat merekam lebih banyak data tentang perkembangan penyakit, misalnya dengan mengikuti level virus dalam tubuh, Caplan menyarankan. Tetapi untuk kesehatan masyarakat, hasil sederhana yang ingin diukur oleh WHO adalah satu-satunya yang relevan untuk saat ini, kata ahli virus Christian Drosten dari Charité University Hospital di Berlin: “Kami tidak benar-benar tahu cukup banyak tentang penyakit ini untuk memastikan apa artinya ketika misalnya, jumlah virus menurun di tenggorokan.”

Pada hari Minggu, INSERM, badan penelitian biomedis Prancis, mengumumkan akan mengoordinasikan uji coba tambahan di Eropa, bernama Discovery, yang akan mengikuti contoh WHO dan akan melibatkan 3.200 pasien dari setidaknya tujuh negara, termasuk 800 dari Perancis. Uji coba itu akan menguji obat yang sama, dengan pengecualian klorokuin. Negara atau kelompok rumah sakit lain juga dapat menyelenggarakan studi tambahan, kata Heneo-Restrepo. Mereka bebas melakukan pengukuran atau pengamatan tambahan, misalnya tentang virologi, gas darah, kimia, dan pencitraan paru. "Sementara studi penelitian tambahan yang terorganisir dengan baik tentang sejarah alami penyakit atau efek dari perawatan percobaan bisa sangat berharga, mereka bukan persyaratan inti," katanya.

Daftar obat yang diuji pertama kali disusun untuk WHO oleh panel ilmuwan yang telah menilai bukti untuk terapi kandidat sejak Januari, kata Heneo-Restrepo. Kelompok obat terpilih yang memiliki kemungkinan tertinggi untuk bekerja, memiliki data paling aman dari penggunaan sebelumnya, dan kemungkinan akan tersedia dalam persediaan yang cukup untuk mengobati sejumlah besar pasien jika uji coba menunjukkan mereka bekerja.

Berikut adalah Obat yang akan diuji oleh SOLIDARITY:

Remdesivir

SARS-CoV-2 memberikan kesempatan kedua kepada senyawa ini untuk bersinar. Awalnya dikembangkan oleh Gilead Sciences untuk memerangi Ebola dan virus terkait, remdesivir menghentikan replikasi virus dengan menghambat enzim viral utama, RNA polimerase yang bergantung pada RNA.

Para peneliti menguji remdesivir tahun lalu selama wabah Ebola di Republik Demokratik Kongo, bersama dengan tiga perawatan lainnya. Itu tidak menunjukkan efek apa pun. (Dua yang lain juga melakukan). Tetapi enzim yang ditargetkan mirip dengan virus lain, dan pada 2017 para peneliti di University of North Carolina, Chapel Hill, menunjukkan hasil penelitiannya baik “penelitian pada tabung” maupun “penelitian pada hewan” bahwa obat itu dapat menghambat virus corona yang menyebabkan penyakit SARS dan MERS.

Pasien COVID-19 pertama yang didiagnosis di Amerika Serikat — seorang pria muda di daerah Snohomish di Washington — diberikan remdesivir ketika kondisinya memburuk; ia membaik pada hari berikutnya, menurut laporan kasus di The New England Journal of Medicine (NEJM). Seorang pasien California yang menerima remdesivir –  dan yang menurut dokter mungkin tidak selamat – akhirnya pulih kembali.

Bukti seperti itu dari masing-masing kasus tidak membuktikan obat itu aman dan efektif. Namun, dari obat-obatan dalam uji coba SOLIDARITY, “remdesivir memiliki potensi terbaik untuk digunakan di klinik” kata Jiang Shibo dari Universitas Fudan, yang telah lama bekerja pada terapi coronavirus. Jiang terutama suka bahwa obat dosis tinggi kemungkinan dapat diberikan tanpa menyebabkan keracunan.

Namun, mungkin jauh lebih kuat jika diberikan pada awal infeksi, seperti kebanyakan obat lain, kata Stanley Perlman, seorang peneliti coronavirus di University of Iowa. "Apa yang benar-benar ingin Anda lakukan adalah memberikan obat seperti itu kepada orang-orang yang berjalan dengan gejala ringan," katanya. "Dan Anda tidak dapat melakukannya karena itu adalah obat [intravena], itu mahal dan 85 dari 100 orang tidak membutuhkannya."

Chloroquine dan hydroxychloroquine

Pada konferensi pers pada hari Jumat, Presiden Donald Trump menyebut chloroquine dan hydroxychloroquine sebagai "game changer." "Saya merasa senang tentang hal itu," kata Trump. Pernyataannya telah menyebabkan desakan permintaan akan antimalaria yang telah berusia puluhan tahun. (“Ini sedikit mengingatkan saya pada fenomena kertas toilet dan semua orang berlari ke toko,” kata Caplan).

Panel ilmiah WHO yang merancang SOLIDARITY pada awalnya memutuskan untuk meninggalkan “pasangan percobaan” ini, tetapi berubah pikiran pada pertemuan di Jenewa pada 13 Maret, karena obat-obatan itu "mendapat perhatian signifikan" di banyak negara, menurut laporan dari kelompok kerja WHO yang melihat potensi obat. Ketertarikan yang menyebar luas mendorong "kebutuhan untuk memeriksa bukti yang muncul untuk menginformasikan keputusan tentang peran potensinya."

Data yang tersedia sedikit. Obat-obatan ini bekerja dengan mengurangi keasaman dalam endosom, kompartemen di dalam sel yang mereka gunakan untuk memakan bahan dari luar dan beberapa virus yang masuk ke dalam sel. Tetapi pintu masuk utama untuk SARS-CoV-2 adalah berbeda, menggunakan protein yang disebut Spike protein untuk menempel pada reseptor pada permukaan sel manusia. Penelitian dalam kultur sel menunjukkan bahwa klorokuin memiliki aktivitas melawan SARS-CoV-2, tetapi dosis yang dibutuhkan biasanya tinggi — dan dapat menyebabkan toksisitas serius.

Membesarkan harapan pada hasil studi sel dengan klorokuin terhadap dua penyakit virus lainnya, demam berdarah dan chikungunya, tidak berhasil pada orang dalam uji klinis acak. Dan primata bukan manusia yang terinfeksi chikungunya tampak lebih buruk ketika diberikan klorokuin. “Para peneliti telah mencoba obat ini dari virus ke virus, dan itu tidak pernah berhasil pada manusia. Dosis yang dibutuhkan terlalu tinggi, ”kata Susanne Herold, seorang ahli infeksi paru di University of Giessen.

Hasil-hasil dari pasien COVID-19 suram. Peneliti Tiongkok yang melaporkan mengobati lebih dari 100 pasien dengan chloroquine menggembar-gemborkan manfaatnya dalam surat di BioScience, tetapi data yang mendasari klaim tersebut belum dipublikasikan. Secara keseluruhan, lebih dari 20 studi COVID-19 di Tiongkok menggunakan klorokuin atau hidroksi klorokuin, WHO mencatat, tetapi hasilnya sulit didapat. “WHO sedang terlibat dengan rekan-rekan Tiongkok di misi di Jenewa dan telah menerima jaminan peningkatan kolaborasi, namun, tidak ada data yang dibagikan mengenai studi klorokuin."

Para peneliti di Perancis telah menerbitkan sebuah studi di mana mereka merawat 20 pasien COVID-19 dengan hydroxychloroquine. Mereka menyimpulkan bahwa obat ini secara signifikan mengurangi viral load pada usap hidung. Tapi itu bukan uji coba terkontrol secara acak dan tidak melaporkan hasil klinis seperti kematian. Dalam panduan yang diterbitkan pada hari Jumat, Society of Critical Care Medicine Amerika Serikat mengatakan, “tidak ada cukup bukti untuk mengeluarkan rekomendasi tentang penggunaan klorokuin atau hidroksi klorokuin pada orang dewasa yang sakit kritis dengan COVID-19.”

Hydroxychloroquine, khususnya, mungkin lebih banyak bahayanya daripada kebaikannya. Obat ini memiliki berbagai efek samping dan dalam kasus yang jarang dapat membahayakan jantung. Karena orang-orang dengan kondisi jantung berisiko lebih tinggi terkena COVID-19 yang parah, menjadi perhatian, kata David Smith, seorang dokter penyakit menular di University of California, San Diego. "Ini adalah sinyal peringatan, tetapi kita masih perlu melakukan uji coba," katanya. Terlebih lagi, ketika kita terburu-buru menggunakannya untuk obat COVID-19, sehingga mungkin mempersulit orang yang membutuhkannya yaitu para penderita rheumatoid arthritis atau malaria.

Ritonavir / lopinavir

Obat kombinasi ini, dijual dengan nama merek Kaletra, disetujui di Amerika Serikat pada tahun 2000 untuk mengobati infeksi HIV. Abbott Laboratories mengembangkan lopinavir secara khusus untuk menghambat protease HIV, enzim penting yang memecah rantai protein panjang menjadi peptida selama perakitan virus baru. Karena lopinavir dengan cepat dipecah dalam tubuh manusia oleh protease kita sendiri, ia diberikan dengan ritonavir tingkat rendah, penghambat protease lain, yang memungkinkan lopinavir bertahan lebih lama.

Kombinasi ini juga dapat menghambat protease dari virus lain, khususnya coronavirus. Ini telah menunjukkan efikasi (kemanjuran) pada monyet marmoset yang terinfeksi virus MERS, dan juga telah diuji pada pasien SARS dan MERS, meskipun hasil dari uji coba tersebut bersifat ambigu.

Namun, uji coba pertama dengan COVD-19 tidak menggembirakan. Dokter di Wuhan, Cina, memberi 199 pasien dua pil lopinavir / ritonavir dua kali sehari plus perawatan standar, atau perawatan standar saja. Tidak ada perbedaan signifikan antara kelompok, mereka melaporkan di NEJM pada 15 Maret 2020. Tetapi penulis mengingatkan bahwa pasien sangat parah — lebih dari seperlima dari mereka meninggal — jadi mungkin pemberian obat untuk menolong mereka terlambat. Walaupun obat ini umumnya aman, obat ini dapat berinteraksi dengan obat yang biasanya diberikan kepada pasien yang sakit parah, dan dokter telah memperingatkan obat itu dapat menyebabkan kerusakan hati yang signifikan.

Ritonavir / lopinavir dan interferon-beta

SOLIDARITY juga akan memiliki lengan yang menggabungkan dua antivirus dengan interferon-beta, sebuah molekul yang terlibat dalam mengatur peradangan dalam tubuh yang juga menunjukkan efek pada monyet marmoset yang terinfeksi MERS. Kombinasi ketiga obat tersebut sekarang sedang diuji pada pasien MERS di Arab Saudi dalam uji coba terkontrol acak pertama untuk penyakit itu.

Tetapi penggunaan interferon-beta pada pasien dengan COVID-19 yang parah mungkin berisiko, kata Herold. "Jika diberikan terlambat kepada penderita sakit parah, akan dapat dengan mudah menyebabkan kerusakan jaringan yang lebih buruk daripada membantu pasien," ia mengingatkan.

Ribuan pasien

Desain percobaan SOLIDARITY dapat berubah kapan saja. Dewan pemantauan keamanan data global akan melihat hasil sementara secara berkala dan memutuskan apakah ada anggota kuartet yang memiliki efek yang jelas, atau apakah seseorang dapat menurun kondisinya karena tidak jelas. Beberapa obat lain, termasuk obat influenza favipiravir, diproduksi oleh Toyama Chemical Jepang, dapat ditambahkan ke uji coba.

Untuk mendapatkan hasil yang kuat dari penelitian ini, beberapa ribu pasien kemungkinan harus direkrut, kata Henao-Restrepo. Argentina, Iran, Afrika Selatan, dan beberapa negara non-Eropa lainnya telah mendaftar. WHO juga berharap untuk melakukan uji coba pencegahan untuk menguji obat-obatan yang mungkin melindungi petugas kesehatan dari infeksi, menggunakan protokol dasar yang sama, kata Henao-Restrepo.

Mitra uji coba Eropa, Discovery, akan merekrut pasien dari Perancis, Spanyol, Inggris, Jerman, dan negara-negara Benelux, menurut siaran pers INSERM hari ini. Uji coba akan dipimpin oleh Florence Ader, seorang peneliti penyakit menular di University Hospital Center di Lyon.

Melakukan penelitian klinis yang ketat selama wabah selalu menjadi tantangan, Henao-Restrepo mengatakan, hal itu merupakan cara terbaik untuk membuat kemajuan melawan virus: "Penting untuk mendapatkan jawaban dengan cepat, untuk mencari tahu apa yang berhasil dan apa yang tidak berhasil. Kami berpikir bahwa bukti acak adalah cara terbaik untuk melakukan itu."

Sumber:

WHO launches global megatrial of the four most promising coronavirus treatments

Oleh Kai Kupferschmidt dan Jon CohenMar. 22, 2020, 3:28 PM

https://www.sciencemag.org/news/2020/03/who-launches-global-megatrial-four-most-promising-coronavirus-treatments

IgY Anti-SARS-CoV ayam SPF yang Diimunisasi

Pembuatan dan Evaluasi Imunoglobulin Y (IgY) Anti-SARS-CoV dari ayam SPF yang Diimunisasi

Ringkasan

Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS) adalah penyakit yang disebabkan oleh SARS-CoV ditandai dengan demam, batuk, pneumonia fibrinosa akut, dan infektivitas tinggi (Chang, 2005). Wabah SARS terjadi selama 2003 menyebabkan kekhawatiran di seluruh dunia sebagai ancaman serius bagi kesehatan masyarkat dunia.  Pencegahan komprehensif dan langkah-langkah pengobatan dilakukan dengan pendekatan One-Health, lintas sektor, lintas disiplin ilmu secara global.  Sementara pada saat yang sama penelitian tentang SARS-CoV dan pengembangan vaksin vaksin, obat-obatan terapeutik dan produk biologis harus segera dilakukan.  Penelitian telah berhasil dan banyak kemajuan telah dibuat dalam semua bidang tersebut (Chow et al., 2003). Chao-Yang Fua et al. melakukan penelitiannya dengan imunisasi ayam spesific pathogen free (SPF) dengan SARS-CoV yang inaktif dan telurnya dipanen secara berkala. Immunoglobulin Yolk (IgY) diekstraksi dari telur ayam-ayam tersebut menggunakan metode pengenceran air, diteruskan dengan pemurnian pada kolom Sephadex G-75.  Dilanjutkan uji menggunakan SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), hasil Western blot dan uji netralisasi menunjukkan bahwa IgY yang diperoleh memiliki kemurnian tinggi dan memiliki reaktifitas yang kuat dengan titer netralisasi 1:640. Pada uji stabilitas menunjukkan bahwa IgY anti-SARS-CoV yang sudah diliofilisasi memiliki sifat fisik yang menjanjikan, tanpa pengurangan yang signifikan dalam reaktifitas dan stabilitas termal yang baik. Dari datanya menunjukkan bahwa IgY anti-SARS-CoV bisa menjadi produk biologis yang bermanfaat untuk terapi antivirus spesifik terhadap SARS.

Imunisasi Pasif

Analisis urutan nukleotida dan asam amino menunjukkan bahwa urutan nukleotida dari SARS-CoV bukan termasuk ke dalam salah satu dari tiga subkelompok coronavirus yang dikenal dan karenanya pada saat itu telah diidentifikasi sebagai coronavirus jenis lain/baru (Wang dan Ding, 2003).

Kemajuan terbaru telah dibuat dalam produksi material biologis untuk menanggulangi SARS-CoV. Material tersebut adalah antiserum terhadap SARS-CoV manusia.  Setelah melalui beberapa percobaan telah terbukti mampu menghambat pembiakan virus SARS-CoV.  Mempunyai prospeknya yang menjanjikan layak setelah dikonfirmasi imunitas pasif terhadap pasien yang terinfeksi SARS-CoV dan orang yang tidak terinfeksi tetapi berisiko terinfeksi.

Imunisasi pasif dan perlindungan jangka pendek dengan titer antibodi tinggi secara historis merupakan cara yang efektif untuk memerangi penyakit menular yang mematikan. Selama wabah SARS di Tiongkok pada tahun 2003, beberapa hasil positif dicapai dengan imunisasi pasif ketika serum pasien SARS yang pulih digunakan. Hasil pengamatan tidak terdapat reaksi merugikan pada sukarelawan yang diimunisasi pertama.

Untuk memberikan imunisasi pasif baru dan efektif terhadap SARS, studi dasar tentang antibodi SARS-CoV harus dilakukan. Studi-studi ini harus termasuk mencari sumber antibodi yang lebih bermutu baik, meningkatkan output dan meningkatkan teknik produksi dan pemurnian. Dalam penelitiannya, Chao-Yang Fua et al. telah berhasil mengimunisasi ayam spesific pathogen free (SPF), dan kemudian memurnikan imunoglobulin kuning telurnya (SARY) coronavirus dengan titer antibodi tinggi yang bisa menetralkan SARS-CoV.

Pembuatan IgY SARS-CoV

Antigen SARS-CoV dibuat dengan menggunakan virus SARS BJ01 yang disediakan oleh Akademi Ilmu Kedokteran Militer Tiongkok, Beijing, Tiongkok. Kultur virus diinaktivasi dengan propiolactone dan dimurnikan pada sentrifugasi sucrosegradient seperti yang dijelaskan sebelumnya (Yin dan Liu, 1997). Tiga puluh ekor ayam Leghorn SPF umur 17 minggu disediakan oleh Pusat Hewan Eksperimental dari Institut Penelitian Veteriner Harbin, Akademi Ilmu Pengetahuan Pertanian Tiongkok, Harbin, Tiongkok. Ayam-ayam diimunisasi dengan menyuntikkan 0,18 mg antigen coronavirus SARS ke dalam otot dada. Suntikan booster kedua dan ketiga dari 0,30 mg antigen diberikan 2 dan 4 minggu kemudian. 

Serum darah ayam dikumpulkan sebelum dan setelah setiap imunisasi dan telur dipanen ketika baru keluar dari ayam percobaan. Pemisahan IgY dari telur individu ayam dilakukan dengan menggunakan protokol yang dijelaskan oleh Akita dan Nakai (1993). Secara singkat, putih telur dipisahkan dari kuning telur dan dibuang. Kuning telur dicampur dengan air steril dan dibiarkan semalam pada suhu 4^oC. Campuran kemudian disentrifugasi pada 1200×g pada suhu 4^oC selama 30 menit, dan supernatan dimurnikan dengan kromatografi. Protein konsentrasi dalam eluat yang dipanen diukur dengan menggunakan thin-layergel scan.  

Banyaknya perolehan protein kasar sebelum kromatografi ditemukan sebanyak 56% sedangkan kemurniannya adalah 92% setelah kromatografi. Eluat menjadi sasaran analisis dengan SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) dan Westernblot. IgY yang dipisahkan memiliki kemurnian yang tinggi sebagaimana dikonfirmasikan dengan SDS-PAGE dan IgY yang dimurnikan memiliki aktivitas biologis yang baik sebagaimana dikonfirmasikan dengan Western Blot. Aktivitas IgY dalam serum dan kuning telur yang diencerkan pada 1: 200 dalam larutan buffer fosfat (PBS) dari hewan yang diimunisasi diuji menggunakan uji ELISA tidak langsung seperti yang dijelaskan sebelumnya (Huang et al., 2005). Setelah imunisasi ayam SPF dengan antigen SARS-CoV, terdapat antibodi yang dapat terdeteksi terhadap SARS-CoV dalam kuning telur yang dikeluarkan dari ayam dalam 3 minggu pertama setelah imunisasi pertama. Produksi antibodi anti-SARSV dalam kuning telur ditemukan 2 minggu setelah IgY diproduksi dalam serum ayam.

Uji Netralisasi Virus

Uji netralisasi virus dilakukan dalam laminar-flow safety cabinets. Secara singkat, sampel IgY yang diencerkan secara serial diinkubasi dengan 200 TCID₅₀ SARS-CoV pada 37^oC selama 1 jam, kemudian diinokulasikan ke sel VERO E6 dan diinkubasi dalam inkubator CO₂ pada suhu 37^oC. Sel VERO E6 yang tidak terinfeksi dan serum SARS-CoV positif atau serum ayam SPF digunakan sebagai kontrol untuk eksperimen ini. IgY tidak bereaksi dengan sel Vero jika diuji dengan teknik antibodi fluoresen tidak langsung. Dosis Infektivitas dihitung menggunakan uji TCID₅₀ standar. Pengenceran antibodi tertinggi yang menghambat cytopathogenic effect (CPE) pada 50% sel VERO E6 yang diinokulasi dengan pengenceran ini dianggap sebagai titer netralisasi 50%. Hasil uji netralisasi menunjukkan bahwa antibodi kuning telur sampai pengenceran 1:640 efektif dalam menetralkan SARS-CoV, dan konsisten dengan hasil ELISA ketika antibodi hasil ekstraksi kuning telur digunakan.

Hasil Stabilitas IgY setelah diliofilisasi

Untuk prosedur liofilisasi, kuning telur dipisahkan dan dicampur dengan larutan salin fosfat dengan perbandingan 1 : 9 (v / v), diikuti dengan sentrifugasi dan pembuangan lemak.  Aliquot dimasukkan ke dalam botol 4-ml yang ditambahkan kurang dari 0,01% (g / ml) meriolat. Setiap botol disedot dan diliofilisasi menurut metode standar. Sampel diuji titer antibodinya sebelum dan setelah liofilisasi.  IgY setelah pengeringan menunjukkan sifat fisik yang baik termasuk warna kuning pucat. Reaktivitas IgY dalam ELISA tidak berubah secara signifikan setelah liofilisasi. Hasil pengujian stabilitas IgY setelah diliofilisasi menunjukkan bahwa reaktivitas IgY tidak menurun secara signifikan sampai suhu mencapai 90^oC selama 15 menit dalam air panas, hal ini menunjukkan bahwa IgY memiliki stabilitas panas yang baik. Tidak ada perubahan reaktivitas IgY di bawah kondisi asam dari pH 7 ke pH 2 setelah pengobatan pada 37^oC selama 2 jam. Selanjutnya, dilakukan Uji ketahanan dalam penyimpanan IgY yang sudah diliopilisasi.  IgY tidak berubah setelah penyimpanan 5 bulan pada suhu - 20^oC, 4^oC atau◦suhu kamar.

Keuntungan dari IgY ayam SPF

IgY dari ayam SPF menyediakan sumber antibodi yang kaya yang mudah diperoleh dan hemat biaya. Keuntungan dari IgY ayam SPF dibandingkan antibodi dari mamalia lain termasuk konsentrasi tinggi dan bebas dari patogen spesifik, membuat penggunaan IgY mempunyai prospek yang lebih luas untuk dikembangkan (Schade et al., 1992; Tini et al., 2002). IgY yang diperoleh dari telur ayam SPF dalam studi ini mempertahankan aktivitas biologis dan netralisasi yang baik pada kondisi lingkungan panas dan asam. Tingkat perolehan IgY setelah pemurnian dengan pengenceran air dan tingkat kemurnian IgY setelah pemurnian lebih lanjut menjanjikan, pengikatan IgY tetap tidak berubah setelah diliofilisasi, juga membuatnya layak untuk produk yang telah disiapkan dengan metode ini bisa digunakan untuk imunisasi pasif dan perlindungan jangka pendek.

Pengendalian Wabah SARS-CoV

Wabah pertama penularan SARS-CoV telah bisa dikendalikan dan potensi epidemi telah diatasi dengan isolasi pasien yang dicurigai dikombinasi dengan terapi obat, berdasarkan karakteristik klinis dan epidemiologis dari SARS. Namun, pengendalian jangka panjang SARS akan membutuhkan kombinasi imunisasi aktif dan pasif, terapi obat, dan tindakan komprehensif lainnya.

Oleh karena itu sangat penting untuk dapat menghasilkan vaksin dan produk imunisasi pasif untuk pengendalian SARS yang efektif.

Potensi diproduksi secara komersial

Pengembangan IgY anti-SARS-CoV tingkat tinggi yang dijelaskan dalam penelitian ini tampaknya berpotensi sebagai produk biologis anti-SARS baru untuk imunisasi pasif, karena secara efektif bisa menetralkan SARS-CoV. Dalam penelitian yang dilakukan oleh Chao-Yang Fua et al. ini bahwa IgY anti-SARS sudah disiapkan sebagai produk kasar dan murni, sedangkan uji ELISA tidak langsung digunakan untuk kontrol kualitas produksi IgY. Untuk memfasilitasi proses produksi massal IgY yang dimurnikan, teknik pembuangan lemak dan pemurnian akan menjadi kunci penting untuk studi berikutnya. Setelah evaluasi menggunakan model hewan yang terinfeksi secara eksperimental, IgY anti-SARS yang diproduksi dalam penelitiannya memiliki potensi untuk diproduksi secara komersial. Efisiensi kapsul yang dihasilkan dari IgY kasar atau bubuk semprot dan larutan intra-vena yang diproduksi dari IgY yang lebih tinggi akan perlu ditentukan sebagai langkah selanjutnya dalam pengembangan produk IgY.

DAFTAR PUSTAKA

1. Akita, E.M., Nakai, S., 1993. Comparison of four purification methods for theproduction  of  immunoglobulins  from  eggs  laid  by  hens  immunized  withan  enterotoxigenicE. coli2  strain.  J.  Immunol.  Methods  160,  207–214.

2. Chang,  S.C.,  2005.  Clinical  findings,  treatment  and  prognosis  in  patientswith  severe  acute  respiratory  syndrome  (SARS).  Chin.  Med.  Assoc.  68,106–107.

3. Chao-Yang Fua, He Huangb, Xiao-Mei Wanga, Yong-Gang Liua, Zhi-Guo Wanga,Shang-Jin Cuia, Hong-Lei Gaoa, Zan Lia, Jing-Peng Lib, Xian-Gang Konga. 2006. Preparation and evaluation of anti-SARS coronavirus IgY fromyolks of immunized SPF chickens. Journal of Virological Methods 133 (2006) 112–115.

4.  Chow, K.Y., Hon, C.C., Hui, R.K., Wong, R.T., Yip, C.W., Zeng, K., Leung,E.C.,  2003.  Molecular  advances  in  severe  acute  respiratory  syndrome-associated  coronavirus  (SARS-CoV).  Genomics  Proteomics  Bioinf.  1,247–262. 

5.     Huang,  H.,  Fu,  C.,  Wang,  Z.,  Cui,  S.,  Gao,  H.,  Wang,  X.,  Li,  Z.,  Li,  J.,Kong,  X.,  2005.  Establishment  of  the  detection  method  of  anti  SARSyolk antibody and serum antibody. Heilongjiang Ani. Sci. Vet. Med. 282,51–52.

6. Schade,  R.,  Schniering,  A.,  Hlinak,  A.,  1992.  Polyclonal  avian  antibodiesextracted from egg yolk as an alternative to the production of antibodiesin  mammals—a  review.  ALTEX  9,  43–56.

7.  Tini, M., Jewell, U.R., Camenisch, G., Chilov, D., Gassmann, M., 2002. Gen-eration and application of chicken egg-yolk antibodies. Comp. Biochem.Physiol.  A  Mol.  Integr.  Physiol.  131,  569–574.

8.   Wang,  H.,  Ding,  Q.,  2003.  SARS  coronaviruses.  Chin.  Virol.  18,  303–306.Yin,  Z.,  Liu,  J.,  1997.  Animal  Virology,  second  ed.  Science  Press,  Beijing,pp.  303–323.

Hydroxychloroquine Efektif Hambat SARS-CoV-2

Wabah penyakit coronavirus disease 2019 (COVID-19) disebabkan oleh virus severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) secara serius  mengancam kesehatan masyarakat global dan menimbulkan kerugian ekonomi secara nasional bagi negara-negara tertular.  Pada 3 Maret 2020 lebih dari 80.000 kasus telah dikonfirmasi di Tiongkok, termasuk 2946 kematian dan lebih dari 10.566 kasus yang dikonfirmasi di 72 negara di dunia.  Sejumlah besar orang yang terinfeksi membutuhkan pengobatan menggunakan obat yang berpotensi, aman, tersedia jumlahnya, dan terjangkau untuk pengendalian dan penurunan epidemi. Baru-baru ini telah dilaporkan bahwa dua obat, remdesivir (GS-5734) dan Chloroquine (CQ) fosfat dapat secara efisien menghambat infeksi SARS-CoV-2 in vitro. ^[1]  Remdesivir merupakan produk analog nukleosida yang dikembangkan oleh Gilead Sciences, Amerika serikat.

Tulisan ini merupakan laporan yang ditulis oleh Jia Liu et al. ^[13}Laporan kasus terbaru menunjukkan bahwa pengobatan dengan remdesivir meningkatkan kondisi klinis pasien pertama yang terinfeksi oleh SARS-CoV-2 di Amerika Serikat.^[2]  Uji klinis fase III remdesivir terhadap SARS-CoV-2 diluncurkan di Wuhan pada 4 Februari 2020. Namun, remdesivir sebagai obat percobaan yang diharapkan, tidak tersedia cukup untuk mengobati pasien yang jumlahnya sangat besar dengan tepat waktu. Oleh karena itu, dari dua obat yang betpotensi, CQ tampaknya menjadi obat pilihan untuk digunakan dalam skala besar karena tersedia, terbukti aman, dengan biaya relatif rendah. Mengingat data klinis awal, CQ telah ditambahkan ke daftar obat percobaan dalam Pedoman Diagnosis dan Pengobatan COVID-19 (Edisi Ke-enam) yang diterbitkan oleh Komisi Kesehatan Nasional Republik Rakyat Tiongkok. 

CQ (N4- (7-Chloro-4-quinolinyl)-N1, N1-diethyl-1,4- pentanediamine) telah lama digunakan untuk mengobati malaria dan amebiasis. Namun, resistensi terhadap Plasmodium falciparum menyebar  luas, dan terjadi pengembangan antimalaria baru yang menjadi obat pilihan profilaksis malaria. Selain itu, overdosis CQ bisa menimbulkan keracunan akut dan kematian.^[3] Dalam beberapa tahun terakhir, karena pemanfaatan CQ jarang dalam praktik klinis, maka produksinya menurun sehingga pasokan ke pasar di Tiongkok menjadi sangat berkurang. Pada tahun 1946 Hydroxychloroquine (HCQ) sulfate, turunan dari CQ, pertama kali disintesis dengan memperkenalkan gugus hidroksil menjadi CQ yang menunjukkan jauh lebih sedikit (~ 40%) beracun daripada CQ pada hewan.^[4] Lebi pentingnya HCQ masih banyak tersedia untuk mengobati penyakit autoimun, seperti systemic lupus erythematosus dan rheumatoid arthritis. Sejak CQ dan HCQ mempunyai struktur kimia yang sama dan juga mekanisme kerjanya sebagai basa lemah dan imunomodulator, mudah diusulkan secara cepat bahwa HCQ dapat menjadi kandidat obat yang berpotensi untuk mengobati infeksi virus SARS-CoV-2. Sebenarnya, pada 23 Februari, 2020, tujuh pendaftar uji klinis untuk Registrasi Uji Klinis dapat dilihat dalam bahasa Tiongkok (http://www.chictr.org.cn) HCQ akan digunakan mengobati COVID-19. Apakah HCQ atau CQ berkhasiat dalam mengobati infeksi SARS-CoV-2 bukti percobaannya  masih kurang. 

Maka dari itu telah dilakukan pembuktian dengan mengevaluasi efek antivirus HCQ terhadap infeksi SARS-CoV-2 dibandingkan dengan CQ secara in vitro. Sitotoksisitas HCQ dan CQ dalam sel African green monkey kidney Vero E 6 (ATCC-1586) diuji menggunakan uji CCK8 standar, dan hasilnya menunjukkan bahwa nilai 50% cytotoxic concentration (CC50) daripada CQ dan HCQ masing-masing adalah 273,20 dan 249,50 μM tidak berbeda nyata satu sama lain (Gambar 1a).

Keterangan Gambar

Gambar 1. Perbandingan aktivitas antivirus dan meknisme kerja CQ dan HCQ terhadap infeksi SARS-CoV-2 secara in vitro. 
a : sitotoksisitas dan aktifitas antivirus CQ dan HCQ. Sitotoksisitas dari dua obat dalam sel Vero E6 ditentukan oleh uji CCK-8. Sel Vero E6 diobati dengan dosis yang berbeda dari salah satu senyawa atau dengan PBS dalam kontrol selama 1 jam dan kemudian terinfeksi dengan SARS-CoV-2 pada MOI 0,01, 0,02, 0,2, dan 0,8. Virus hasil dalam supernatan sel dikuantifikasi oleh qRT-PCR pada 48 jam pasca infeksi. Sumbu Y mewakili rata-rata persen hambatan yang dinormalisasi ke kelompok PBS. Itu Percobaan diulang dua kali. 
b, c : Penelitiannya menberikan metodologi berbasis network untuk identifikasi cepat kandidat pengobatan SARS-CoV-2 menggunakan kombinasi obat lama yang berpotensi untuk dapat digunakan kembali.
CQ dan HCQ dalam menghambat masuknya virus. Sel-sel Vero E6 diobati dengan CQ atau HCQ (50 μM) selama 1 jam, diikuti oleh pengikatan virus (MOI = 10) pada 4 °C selama 1 jam. Kemudian virion yang tidak terikat dihilangkan, dan sel-sel selanjutnya ditambah dengan segar media yang mengandung obat pada suhu 37 °C selama 90 menit sebelum diperbaiki dan diwarnai dengan IFA menggunakan antibodi anti-NP untuk virion (merah) dan antibodi terhadap EEA1 untuk EE (hijau) atau LAMP1 untuk ELs (hijau). Nuklei (biru) diwarnai dengan pewarna Hoechst. Bagian virion yang co-localized dengan EE atau EL dalam setiap kelompok (n > 30 sel) dikuantifikasi dan ditunjukkan dalam b. Gambar mikroskopis konfokal representatif partikel virus (merah), EEA1 + EEs (hijau), atau LAMP1 + ELs (hijau) di setiap grup ditampilkan dalam c. Gambar yang diperbesar dalam kotak menunjukkan virion yang mengandung vesikel tunggal. Panah menunjukkan vesikel yang membesar secara tidak normal. Bar, 5 μm. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan analisis varian satu arah (ANOVA) dengan GraphPad Prism (F = 102.8, df = 5.182, *** P
Perlu dicatat bahwa bahwa nilai EC50 daripada CG tampaknya sedikit lebih tinggi dari pada yang dilaporkan sebelumnya (1,13 μM pada MOI 0,05) ^[1] yang kemungkinan karena adaptasi virus dalam kultur sel yang secara signifikan  meningkatkan infektifitas virus pada saat pasase virus terus menerus.  Akibatnya indeks selektivitas (SI = CC50 / EC50) dari CQ (100.81, 71.71, 38.26, dan 37.12) lebih tinggi dari HCQ (55,32, 61,45, 14,41, 19,25) pada MOI masing-masing 0,01, 0,02, 0,2, dan 0,8.
Analisis kuantifikasi menunjukkan bahwa, pada 90 menit pasca infeksi dalam sel yang tidak diobati, 16,2% virion yang diinternalisasi (anti-NP, red) diamati pada early endosome antigen 1 (EEA1)-EE positif (hijau), sementara lebih banyak virion (34,3%) dibawa ke late endosomal–lysosomal protein LAMP1 + ELs (hijau) (30 sel untuk setiap kelompok).  Sebaliknya terhadap CQ atau HCQ secara signifikan lebih banyak virion (35,3% untuk CQ dan 29,2% untuk HCQ, P < 0,001) terdeteksi dalam EE, sementara hanya hanya seidikit virio (2,4%  untuk CQ dan 0,03% untuk HCQ, P < 0,001) adalah ditemukan di lokalisasi dengan LAMP1 + ELs (30 sel) (Gambar 1b, 1 c). Hal ini menyarankan bahwa CQ dan HCQ memblokir transportasi SARS-CoV-2 dari EE ke EL, yang tampaknya menjadi persyaratan untuk melepaskan virus genom seperti dalam kasus SARS-CoV ^[7]. 

Untuk menadapatkan hasil yang lebih baik maka aktivitas antivirus CQ dibandingkan dengan aktivitas HCQ, kurva dosis-respons dari dua senyawa terhadap SARS-CoV-2 ditentukan menggunakan empat multiplicities of infection (MOI) dengan kuantifikasi virus RNA yang diperoleh dari supernatan sel pada 48 jam pasca infeksi (p.i). Data diringkas dalam Gambar 1a dan Tabel S1 tambahan menunjukkan bahwa, pada semua MOI (0,01, 0,02, 0,2, dan 0,8), konsentrasi efektif maksimal 50% (EC50) untuk CQ (2,71, 3,81, 7,14, dan 7,36 μM) adalah lebih rendah dari HCQ (4,51, 4,06, 17,31, dan 12,96 μM). Perbedaan nilai EC50 secara statistik signifikan pada MOI  0,01 (P < 0,05) dan MOI 0,02 (P <; 0,001) (Tambahan Tabel S 1). 

Hasil ini dikuatkan dengan imunofluoresensi mikroskop yang dibuktikan dengan tingkat ekspresi yang berbeda dari nucleoprotein (NP) virus pada konsentrasi obat yang ditunjukkan pada 48 jam pasca infeksi. (Gambar Tambahan. S1). Diambil bersama-sama, data menunjukkan bahwa anti-SARS-CoV-2 aktivitas HCQ tampaknya kurang kuat dibandingkan dengan CQ, setidaknya pada MOI tertentu. 

Baik CQ dan HCQ adalah basa lemah yang diketahui meningkatkan pH organel intraseluler asam, seperti endosom / lisosom, penting untuk fusi membran. ^[5] Di Selain itu, CQ dapat menghambat masuknya SARS-CoV mengubah glikosilasi reseptor dan Spike ACE2 protein.^[6] Eksperimen penambahan waktu mengkonfirmasi hal itu HCQ secara efektif menghambat tahap masuk, serta tahap pasca masuknya SARS-CoV-2, yang juga ditemukan setelah perawatan CQ (Tambahan Gambar. S2). Lebih jauh mengeksplorasi mekanisme kerja CQ dan HCQ secara terperinci dalam menghambat masuknya virus, co-lokalisasi virion dengan early endosome (EE) atau endolysosome (EL) dianalisis dengan immunofluorescence analysis (IFA) dan confocal mikroskopi. 

Menariknya, ditemukan bahwa pengobatan CQ dan HCQ menyebabkan perubahan nyata dalam jumlah dan ukuran / morfologi EE dan EL (Gambar 1c). Pada sel yang tidak diobati, kebanyakan EE jauh lebih kecil daripada EL (Gambar 1c). Dalam sel yang diobati dengan CQ dan HCQ, vesikel EE yang membesar secara tidak normal diamati (Gambar 1c, panah di panel atas), banyak di antaranya bahkan lebih besar dari ELs pada sel yang tidak diobati.  Ini sesuai dengan laporan pengobatan sebelumnya dengan CQ menginduksi pembentukan sitoplasma diperluas vesikel.^[8] Di dalam vesikel EE, virion (merah) terlokalisasi di sekitar membran (hijau) vesikel. CQ pengobatan tidak menyebabkan perubahan yang jelas pada jumlahnya dan ukuran ELs; Namun, struktur vesikel teratur tampaknya terganggu, setidaknya sebagian. Sebaliknya, dalam Sel yang diobati dengan HCQ, ukuran dan jumlah EL meningkat secara signifikan (Gambar 1c, panah di panel bawah).

Karena pengasaman sangat penting untuk pematangan endosom dan fungsinya, diduga bahwa pendewasaan endosome mungkin tersumbat pada tahap menengah endositosis, mengakibatkan kegagalan pengangkutan virion lebih lanjut ke situs pelepasan ultimat. CQ dilaporkan meningkatkan pH dari lisosom dari sekitar 4,5 hingga 6,5 pada 100 μM9. Untuk pengetahuan, ada kekurangan studi tentang dampak HCQ pada nilai morfologi dan pH endosom / lisosom. Hasil pengamatan menyarankan bahwa cara kerja CQ dan HCQ tampaknya berbeda dalam aspek-aspek tertentu. 

Telah dilaporkan bahwa penyerapan oral CQ dan HCQ pada manusia sangat efisien. Pada hewan, kedua obat berbagi pola distribusi jaringan yang sama, dengan konsentrasi tinggi di hati, limpa, ginjal, dan jangkauan paru-paru tingkat 200-700 kali lebih tinggi daripada yang ada di plasma ^[10].  Dilaporkan bahwa dosis aman (6-6,5 mg / kg per hari) daripada HCQ sulfat dapat menghasilkan kadar serum 1,4-1,5 μM dalam manusia ^[11].  Oleh karena itu, dengan dosis yang aman, konsentrasi HCQ dalam jaringan di atas kemungkinan akan tercapai menghambat infeksi SARS-CoV-2. 

Investigasi klinis ditemukan bahwa konsentrasi tinggi sitokin terdeteksi dalam plasma sakit kritis  pasien yang terinfeksi SARS-CoV-2.  Terjadinya peningkatan drastis sitokin diduga berkaitkan dengan tingkat keparahan penyakit.^[12]  Selain aktivitas antivirus langsungnya, HCQ adalah aman dan merupakan agen anti-inflamasi yang aman telah berhasil dengan baik digunakan secara luas pada penyakit autoimun dan dapat secara signifikan mengurangi produksi sitokin dan khususnya faktor proinflamasi. Oleh karena itu, dalam pasien COVID-19, HCQ juga dapat berkontribusi untuk melemahkan respon inflamasi.

Kesimpulannya, hasil penelitian ini menunjukkan bahwa HCQ secara efisien dapat menghambat infeksi SARS-CoV-2 in vitro. Dalam kombinasi dengan fungsi anti-inflamasinya, diperkirakan bahwa obat tersebut memiliki potensi yang baik untuk memerangi penyakit ini. Kemungkinan menunggu konfirmasi dengan uji klinis, perlu ditunjukkan, meskipun HCQ kurang beracun daripada CQ, penggunaan jangka panjang dan overdosis masih bisa menyebabkan keracunan. Dan SI yang relatif rendah daripada HCQ membutuhkan perancangan dan pelaksanaan uji klinis yang cermat untuk mencapai pengendalian infeksi SARS-CoV-2 yang efisien dan aman.

Daftar Pustaka

1.   Wang, M. et al. Remdesivir and chloroquine effectively inhibit the recently emerged novel coronavirus (2019-nCoV) in vitro. Cell Res. 30, 269–271 (2020).

2.   Holshue, M. L. et al. First case of 2019 novel coronavirus in the United States. N. Engl. J. Med. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2001191 (2020).

3.   Weniger, H. Review of side effects and toxicity of chloroquine. Bull. World Health 79, 906 (1979).

4.  McChesney, E. W. Animal toxicity and pharmacokinetics of hydroxychloroquine sulfate. Am. J. Med. 75, 11–18 (1983).

5.  Mauthe, M. et al. Chloroquine inhibits autophagic flux by decreasing autophagosome-lysosome fusion. Autophagy 14, 1435–1455 (2018).

6.  Savarino, A. et al. New insights into the antiviral effects of chloroquine. Lancet Infect. Dis. 6, 67–69 (2006).

7.  Mingo, R. M. et al. Ebola virus and severe acute respiratory syndrome coronavirus display late cell entry kinetics: evidence that transport to NPC1+ endolysosomes is a rate-defining step. J. Virol. 89, 2931–2943 (2015).

8. Zheng, N., Zhang, X. & Rosania, G. R. Effect of phospholipidosis on the cellular pharmacokinetics of chloroquine. J. Pharmacol. Exp. Ther. 336, 661–671 (2011).

9.   Ohkuma, S. & Poole, B. Fluorescence probe measurement of the intralysosomal pH in living cells and the perturbation of pH by various agents. Proc. Natl Acad. Sci. USA 75, 3327–3331 (1978).

10. Popert, A. J. Choloroquine: a review. Rheumatology 15, 235–238 (1976).

11. Laaksonen, A. L., Koskiahde, V. & Juva, K. Dosage of antimalarial drugs for children with juvenile rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus. A clinical study with determination of serum concentrations of chloroquine and hydroxychloroquine. Scand. J. rheumatol. 3, 103–108 (1974).

12. Huang, C. et al. Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China. Lancet 395, 497–506 (2020).

13. Hengrui Hu, Yufeng Li, Zhihong Hu, Wu Zhong and Manli Wang.  2020.  Hydroxychloroquine, a less toxic derivative of chloroquine, is effective in inhibiting SARS-CoV-2 infection in vitro.  Cell Discovery 6:16. (2020).

Di Tiongkok,18 Maret 2020 Tak Ada Infeksi Baru

Di Tiongkok,18 Maret 2020 Tak Ada Infeksi Lokal Baru

 Tiongkok telah melaporkan tidak ada kasus baru virus corona yang ditransmisikan secara lokal untuk pertama kalinya sejak pandemi dimulai, menandai titik balik utama dalam pertempuran global untuk mengandung Covid-19.

Pada konferensi pers pada hari Kamis pagi, para pejabat dari Komisi Kesehatan Nasional Tiongkok mengumumkan hanya ada 34 kasus baru dalam 24 jam terakhir - semuanya diimpor dari luar negeri - dan delapan kematian baru, semua di Hubei, provinsi tempat virus itu berada, pertama kali diidentifikasi. Tidak ada kasus baru lagi yang dilaporkan di Hubei pada hari Rabu 18 Maret 2020.

Tonggak sejarah ini kemungkinan akan dianggap sebagai bukti dari keberhasilan yang berkelanjutan dari upaya Tiongkok, dari atas ke bawah untuk mengendalikan virus, meskipun ada dugaan yang terus-menerus bahwa pejabat setempat salah menangani wabah awal. Bulan lalu, daratan Tiongkok melaporkan ribuan kasus baru setiap hari, dan dianggap sebagai daerah infeksi paling berisiko di dunia.

Dalam minggu-minggu setelah penyebaran awal virus, pemerintah memberlakukan tindakan karantina kejam dan pembatasan perjalanan yang ketat yang mempengaruhi ratusan juta warga. Di beberapa kota yang terpukul parah, penduduk tidak dapat meninggalkan apartemen mereka selama lebih dari sebulan, sementara transportasi antara pusat-pusat populasi utama terbatas atau dihentikan sama sekali.

Namun, sifat langkah-langkah yang belum pernah terjadi sebelumnya telah menimbulkan korban, baik pada berjuta-juta orang Tiongkok biasa yang terpaksa harus bertahan hidup di bawah pengurungan dan ekonomi negara itu, yang telah mengalami penurunan tajam dalam beberapa pekan terakhir.

Di luar Tiongkok

Karena bahaya telah berkurang di Tiongkok, tingkat infeksi global terus meningkat, dengan negara-negara di berbagai benua sekarang bergulat dengan wabah mereka sendiri yang berkembang dengan cepat.

Pada Kamis sore 18 Maret 2020, virus telah menginfeksi lebih dari 218.800 orang di seluruh dunia, menurut Universitas Johns Hopkins, yang melacak kasus yang dilaporkan oleh Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) dan sumber tambahan lain. Jumlah tersebut lebih dari dua kali lipat totalnya dua minggu lalu.  Menanggapi wabah tersebut, negara-negara demokratis termasuk Italia, Prancis dan Filipina telah memberlakukan kebijakan yang serupa dengan yang dilaksanakan di Tiongkok, menempatkan jutaan orang di bawah penguncian penuh atau sebagian.

Menanggapi krisis global dan dengan wabah di rumah semakin di bawah kendali, Beijing telah mulai mengirim bantuan dan pasokan ke luar negeri ke negara-negara yang sangat terpengaruh akibat pandemi.

Pada hari Rabu 18 Maret 2020, kementerian luar negeri Perancis mengumumkan telah menerima sekitar satu juta masker dari pemerintah Tiongkok. Tim medis dan pasokan dari Tiongkok juga telah dikirim ke Italia, yang telah menyaksikan hampir 3.000 kematian akibat virus itu.

Pada saat yang sama, mengingat penyebaran virus secara global, pemerintah Tiongkok sekarang dengan cepat meningkatkan tindakan karantina pada kedatangan internasional untuk menghindari wabah lebih lanjut.

Pemerintah kota Beijing mengumumkan di media pemerintah Kamis bahwa semua penumpang yang datang dari luar negeri harus masuk ke "karantina kolektif di fasilitas yang ditunjuk." Penduduk Beijing sebelumnya diizinkan untuk karantina di rumah mereka sendiri.

Di kota semi otonom Tiongkok, Hong Kong, lusinan kasus baru telah dikonfirmasi dalam beberapa hari terakhir ketika mereka yang kembali dari Eropa dan AS menciptakan gelombang infeksi kedua.  Pada hari Selasa, pemerintah kota mengeluarkan pemberitahuan merah untuk semua negara asing, mengharuskan siapa pun yang datang dari luar negeri untuk menjalani karantina rumah selama 14 hari.

Kasus-kasus yang baru diimpor datang pada waktu yang tidak tepat bagi pemerintah Tiongkok ketika mereka mencoba untuk memulai kembali ekonomi negara.

Data ekonomi baru yang dirilis pada hari Senin menunjukkan ekonomi Tiongkok terpukul parah oleh wabah koronavirus, dengan penjualan ritel anjlok 20,5% dibandingkan tahun sebelumnya, menurut Biro Statistik Nasional.

Pada saat yang sama, output industri juga turun 13,5% selama periode yang sama, sementara investasi aset tetap terjadi anjlok 24,5%.

Sumber:

CNN Hongkong:

The coronavirus pandemic began in China. Today, it reported no new local infections for the first time.  (Kontribusi dari Nectar Gan dan James Griffiths dari CNN)

Diunduh 20 Maret 2020.