Pengenalan Pengujian Laboratorium Q Fever

Pengumpulan dan penyimpanan spesimen

C. burnetii adalah agen zoonosis yang sangat menular dan hanya boleh ditangani dalam biosafety cabinet (Kelas III). Perhatian besar harus diberikan selama pengumpulan sampel dari subjek yang terinfeksi, serta penanganan spesimen yang terkontaminasi dan kultur mikroorganisme ini di laboratorium. Beberapa spesimen cocok untuk mendeteksi C. burnetii, tetapi ketersediaannya bergantung pada gambaran klinis. Teknik yang berbeda dapat digunakan untuk mengumpulkan berbagai jenis spesimen untuk isolasi dan deteksi patogen; ini termasuk, cairan serebrospinal, sumsum tulang, biopsi katup jantung, aneurisma vaskular atau cangkok, biopsi tulang, atau spesimen biopsi hati, susu, plasenta, spesimen janin dalam kasus aborsi, dan supernatan kultur sel. Darah harus dikumpulkan pada EDTA atau natrium sitrat, dan lapisan leukosit harus disimpan untuk amplifikasi.

 

Pemeriksaan patologi

Hasil Q fever dalam pembentukan lesi granulomatosa, paling sering melibatkan paru-paru, hati dan sumsum tulang. Secara makroskopis, hepatisasi merah atau abu-abu mungkin ada. Secara mikroskopis terjadi edema interstisial dan infiltrasi oleh limfosit dan makrofag. Ruang alveolar diisi dengan histiosit, dan nekrosis fokal intra-alveolar dan perdarahan. Lesi hati berbeda pada Q fever akut dan kronis. Lesi hati pada kasus akut ditandai dengan lesi granulomatosa yang mengandung apa yang disebut granuloma donat, yang terdiri dari cincin fibrin padat yang mengelilingi vakuola lipid sentral (Srigley et al., 1985). Biasanya, perubahan granulomatosa dan nekrosis juga ditemukan di sumsum tulang. Dalam kasus kronis, temuan patologis tidak spesifik: infiltrasi limfosit dan fokus nekrosis spotty. Vegetasi pada endokarditis Q fever sering halus dan nodular. Katup sering disusupi dengan makrofag berbusa, yang diisi dengan sel C. burnetii.

 

Isolasi

C. burnetii dapat diisolasi dengan menginokulasikan spesimen ke dalam kultur sel konvensional (sel ginjal monyet, sel Vero) atau ke dalam kantung kuning telur ayam berembrio (Ormsbee, 1952) atau hewan laboratorium, seperti mencit atau marmut (Williams et al, 1986). Telur berembrio mati 7 sampai 9 hari setelah inokulasi. Marmot mengalami demam 5 sampai 8 hari setelah inokulasi intraperitoneal. Limpa adalah organ yang paling penting untuk pemulihan C. burnetii. Ekstrak limpa giling selanjutnya harus diinokulasi ke dalam telur berembrio. Meskipun sekarang lebih jarang digunakan, metode ini tetap membantu dalam kasus yang memerlukan isolasi dari jaringan yang terkontaminasi dengan banyak bakteri atau untuk mendapatkan antigen Coxiella Fase I dari sel Fase II. Pengembangan sistem mikrokultur sel dari metode yang tersedia secara komersial untuk kultur virus, sistem kultur sel vial cangkang, telah memungkinkan peningkatan isolasi bakteri intraseluler, terutama C. burnetii (Raoult et al., 1990). Inokulasi hewan berbahaya karena hewan mengeluarkan C. burnetii dalam feses dan urin (Raoult, 1990), oleh karena itu, penanganan yang sangat hati-hati harus dilakukan saat menangani hewan laboratorium yang terinfeksi.

Patogen paling baik divisualisasikan dalam apusan impresi kantung kuning telur/ limpa babi guinea yang terinfeksi yang diwarnai dengan pewarnaan Gimenez. Dalam kasus aborsi yang diduga disebabkan oleh infeksi, apusan kotiledon plasenta disiapkan pada slide mikroskop. Isi paru-paru, hati dan abomasal dari janin yang diaborsi atau keputihan dapat digunakan dengan cara yang sama. Ini dapat diwarnai menggunakan beberapa metode cepat: Gimenez, Stamp, Ziehl-Neelsen yang dimodifikasi, Giemsa, Macchiavello dan Koster yang dimodifikasi.

 

Diagnosis Q fever paling sering dilakukan dengan metode serologis karena teknik kultur dan biologi molekuler sulit, membutuhkan waktu lama dan memerlukan keahlian, yang hanya tersedia di laboratorium khusus. Diagnosis serologis mudah ditegakkan, meskipun antibodi sebagian besar terdeteksi hanya setelah 2 hingga 3 minggu sejak timbulnya penyakit. Serologi memungkinkan diferensiasi infeksi Q fever akut dan kronis. Metode yang telah digunakan antara lain uji aglutinasi kapiler (Luoto, 1953), mikroaglutinasi (Fiset et al., 1969; Kazar et al., 1981), fiksasi komplemen (Herr et al., 1985; Peter et al., 1985), radioimmunoassay (Doller et al., 1984), uji antibodi imunofluoresen (IFAT) (Field et al., 1983; Peter et al., 1985), uji hemolisis tidak langsung (Tokarevich et al., 1990), ELISA (Kovácová et al. , 1987; Péter et al., 1988; Uhaa et al., 1994), enzyme-linked immunosorbent fluorescence assay (ELIFA) (Schmeer et al., 1988), dot immunoblotting, dan Western blotting (Willems et al., 1992). Teknik yang paling umum digunakan termasuk fiksasi komplemen (CFT), IFA, ELISA, dan aglutinasi mikro. Dua metode pertama biasanya tersedia secara komersial. Perbandingan antara uji serologis menunjukkan bahwa ELISA menunjukkan 92% kesesuaian dengan metode referensi (IFAT), dan memberikan sensitivitas 99% dan spesifisitas 88% (Fournier dkk., 1998). Spesifisitas dapat ditingkatkan dengan konfirmasi oleh IFAT. CFT memiliki spesifisitas 90% tetapi sensitivitasnya relatif rendah (Field et al., 2000). Dalam CFT, serum yang diinaktivasi panas diuji terhadap antigen fase I atau Fase II C. burnetii (Raoult et al., 1992). CFT spesifik tetapi memiliki tingkat sensitivitas yang lebih rendah dan lebih memakan waktu daripada IFA atau ELISA. Hasil negatif palsu telah dijelaskan dengan CFT pada pasien yang terinfeksi kronis dengan titer antibodi tinggi karena fenomena prozone, serta hasil positif palsu karena reaksi silang dengan antigen telur ayam. Imunoblotting Barat digunakan untuk membandingkan respon imun terhadap antigen C. burnetii Fase I dan Fase II manusia dengan Q fever akut dan kronis (Marrie dan Yates, 1996). ELISA, pertama kali dijelaskan untuk diagnosis Q fever (Field et al., 1983), telah digambarkan sebagai teknik yang lebih spesifik dan sensitif daripada CFT. Ini telah terbukti lebih sensitif daripada IFTA untuk serodiagnosis Q fever (Peter et al., 1988; Cowley et al., 1992).

 

Antibodi monoklonal (MAb I/4/H) telah digunakan untuk membedakan isolat C. burnetii dari manusia dan mamalia lainnya (Sekeyová et al., 1996). Antibodi monoklonal (Cox1D8) tidak bereaksi silang dengan bakteri lain. Selanjutnya, fiksasi menggunakan formaldehida atau Bouin tidak mengubah reaktivitas antigen dengan antibodi (Raoult et al., 1994). Oleh karena itu, dapat digunakan untuk deteksi dini C. burnetii dalam kultur sel vial cangkang dan untuk pewarnaan C. burnetii pada jaringan yang ditanami parafin, serta diagnosis patologi hepatitis dan endokarditis pada kasus Q fever.

PCR

Beberapa uji PCR tersedia untuk deteksi patogen yang sensitif dan spesifik dalam sampel makanan atau klinis yang berbeda. Ini termasuk trans-PCR, menggunakan primer berdasarkan daerah repetitif mirip transposon dari genom C. burnetii (Berri et al., 2001), PCR touchdown tunggal untuk skrining swab vagina, susu dan feses (Berri et al., 2000), pemisahan imunomagnetik-PCR untuk susu domba (Ongor et al., 2004), dan PCR multipleks yang memiliki sensitivitas yang sebanding dengan PCR simpleks untuk susu (Edingloh et al., 1999). Konsentrasi Triton X-100 yang memadai meningkatkan pemisahan imunomagnetik C. burnetii dari susu. PCR-ELISA 10 kali lipat lebih sensitif daripada PCR konvensional untuk mendeteksi Coxiella (Muramatsu et al., 1997). PCR juga telah dikembangkan untuk memeriksa jaringan tertanam parafin dari pasien dengan endokarditis kronis (Yuasa et al., 1996). Baru-baru ini, Nested PCR cepat yang disebut Light Cycler Nested PCR (LCN-PCR) bersama dengan serologi dalam 2 minggu pertama penyakit telah disarankan untuk membantu diagnosis awal Q fever (Fournier dan Raoult, 2003). Uji PCR real-time juga dapat berguna untuk evaluasi kerentanan antibiotik C. burnetii (Brennan dan Samuel, 2003).

 

Sumber:

Q fever. https://www.cabi.org/isc/datasheet/66416