Perkembangan Vaksin Rabies: Perjalanan dari Pasteur ke Era Modern Imunisasi

RINGKASAN

Rabies adalah penyakit kuno dengan sejarah yang mencakup ribuan tahun sejak interaksi pertama antara manusia dan anjing. Tingginya angka kematian akibat penyakit ini telah memicu strategi pencegahan rabies sejak abad pertama SM. Selama lebih dari 100 tahun terakhir, terdapat berbagai upaya untuk mengembangkan vaksin rabies dengan tujuan mencegah rabies pada manusia dan hewan. Para ahli vaksin pra-Pasteurian telah membuka jalan bagi sejarah sebenarnya dari vaksin rabies dengan pengembangan vaksin generasi pertama. Perbaikan lebih lanjut untuk menciptakan vaksin yang kurang reaktif dan lebih imunogenik telah mengarah pada pengembangan vaksin embrio, vaksin kultur jaringan, vaksin kultur sel, vaksin hidup yang dimodifikasi, vaksin inaktivasi, dan vaksin dengan adjuvan. Kemajuan teknologi rekombinan dan genetika terbalik memberikan wawasan mendalam terhadap genom virus rabies dan memfasilitasi manipulasi genom, yang pada akhirnya melahirkan vaksin rabies generasi berikutnya, seperti vaksin rekombinan, vaksin vektor virus, vaksin yang dimodifikasi secara genetik, dan vaksin asam nukleat. Vaksin-vaksin ini sangat membantu dalam mengatasi kekurangan vaksin rabies konvensional dengan meningkatkan imunogenisitas dan efikasi klinis. Perjalanan pengembangan vaksin rabies dari Pasteur hingga vaksin era modern, meskipun menghadapi berbagai tantangan, telah menjadi landasan untuk terciptanya vaksin-vaksin sukses yang ada saat ini guna mencegah rabies. Di masa depan, kemajuan dalam teknologi ilmiah dan fokus penelitian pasti akan membuka jalan bagi kandidat vaksin yang lebih canggih untuk eliminasi rabies.

 

1.    Pendahuluan

 

Rabies memiliki signifikansi sejarah sejak awal hubungan antara manusia dan anjing sekitar 40.000 tahun yang lalu. Catatan Mesopotamia mengungkapkan adanya penyakit "anjing gila" yang sangat berbahaya, menunjukkan interaksi antara anjing dengan virus rabies yang mematikan.[1] Rabies adalah penyakit zoonosis menular yang fatal, disebabkan oleh virus rabies (RABV).[2] Penyakit ini terus menjadi ancaman serius bagi kesehatan masyarakat global, terutama di negara-negara berkembang. Ensefalitis progresif akut ini menyebabkan sekitar 60.000 kematian manusia setiap tahun, dengan korban terbanyak di Afrika (36,4%) dan Asia (59,6%).[3] Dari jumlah tersebut, Asia Selatan menyumbang sekitar 40% dari total kematian rabies manusia di dunia. Diperkirakan, biaya rabies mencapai US$583,5 juta setiap tahun, dengan kerugian ternak di Asia dan Afrika sekitar US$12,3 juta. Rabies pada anjing ditemukan di 87 negara berbeda dan merupakan faktor utama dalam kasus rabies pada manusia. Namun, beberapa negara, termasuk Jepang, Inggris, Denmark, Swedia, Yunani, Irlandia, Islandia, Portugal, Selandia Baru, Australia, Swiss, Finlandia, Norwegia, Prancis, dan Belgia, antara lain, telah berhasil memberantas rabies.[4]

 

Penyebab utama penyakit ini adalah virus rabies (RABV), yang merupakan spesies tipe dari genus Lyssavirus dalam famili Rhabdoviridae. Ini adalah virus berbentuk peluru yang memiliki genom RNA untai tunggal, berorientasi negatif sekitar 12 kb, yang mengkode lima protein struktural utama dari 3' ke 5', yaitu nukleoprotein (N), fosfoprotein (P), protein matriks (M), glikoprotein (G), dan RNA polimerase yang bergantung pada RNA (L).[5] Protein N, P, dan L membentuk kompleks ribonukleoprotein yang secara ketat mengenkapsidasi genom RNA berorientasi negatif dan bertugas mengarahkan replikasi virus di sitoplasma sel yang terinfeksi. Protein G RABV adalah satu-satunya protein virus yang terpapar di permukaan virus dan berperan penting dalam patogenisitas virus serta berfungsi sebagai antigen pelindung utama yang menghasilkan kekebalan protektif terhadap rabies.[6]

 

Penyakit ini memengaruhi semua hewan berdarah panas, termasuk manusia, dan virus rabies telah memperluas jangkauan inangnya dalam ordo mamalia Carnivora dan Chiroptera.[7] Namun, di antara mereka, anjing adalah inang reservoir domestik yang paling penting untuk infeksi manusia di negara-negara berkembang, sedangkan hewan liar menjadi inang di negara-negara maju.[8] Selain anjing, beberapa spesies kelelawar, terutama kelelawar vampir, juga memainkan peran penting dalam penularan virus rabies pada manusia di benua Amerika.[9] Sebaliknya, spesies lyssavirus ditularkan oleh kelelawar di negara-negara Dunia Lama di Afrika, Asia, dan Eropa.[10] Hewan domestik lainnya, termasuk kucing, sapi, kuda, domba, dan kambing, juga dapat terjangkit rabies dan menyebarkannya ke manusia.[11] Gigitan anjing yang terinfeksi menyumbang 97% kasus rabies pada manusia, diikuti oleh gigitan kucing (2%), dan gigitan hewan lainnya (1%) termasuk dari luwak, rubah, serigala, jakal, dan hewan liar lainnya. [12]

 

Untungnya, vaksin rabies telah muncul sebagai alat paling efektif untuk mencegah infeksi oleh penyakit zoonosis viral yang mematikan ini. Vaksin rabies dapat diberikan secara profilaksis dan terapeutik [10], dan vaksin saat ini lebih efektif jika diberikan segera setelah terpapar rabies. Profilaksis pasca-paparan (PEP), yang meliputi pembersihan luka di lokasi paparan RABV, pemberian imunoglobulin rabies (RIG) jika diperlukan, dan pemberian beberapa dosis vaksin rabies, atau profilaksis pra-paparan (PrEP), yang dilakukan dengan memberikan beberapa dosis vaksin rabies sebelum paparan terhadap RABV, adalah dua regimen imunisasi utama yang direkomendasikan oleh Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) untuk pencegahan rabies pada manusia.[13] Rencana Strategis Global untuk pemberantasan kematian akibat rabies pada manusia yang disebabkan oleh anjing di seluruh dunia pada tahun 2030 diperkenalkan pada tahun 2018 oleh Organisasi Kesehatan Dunia (WHO), Organisasi Kesehatan Hewan Dunia (WOAH), Organisasi Pangan dan Pertanian Perserikatan Bangsa-Bangsa (FAO), dan Aliansi Global untuk Pengendalian Rabies (GARC). Rencana ini menekankan pentingnya pencegahan rabies pada anjing melalui vaksinasi massal tahunan yang menjangkau setidaknya 70% populasi anjing.[13]

 

Lebih dari satu abad telah berlalu sejak Louis Pasteur mengembangkan vaksin pertama pada 6 Juni 1885, untuk imunisasi pra-paparan dan profilaksis pasca-paparan. Selanjutnya, beberapa vaksin rabies telah dikembangkan selama bertahun-tahun dan sekarang digunakan untuk mencegah atau mengendalikan rabies pada manusia dan hewan. Banyak negara di dunia menggunakan vaksin rabies yang diinaktivasi berbasis kultur sel; namun, vaksin ini memerlukan beberapa kali inokulasi untuk menghasilkan respons imun humoral yang kuat dan lebih mahal untuk digunakan dalam mengimunisasi manusia dan hewan di negara-negara berkembang.[14] Meskipun vaksin jaringan saraf yang diinaktivasi relatif lebih murah, penggunaannya telah dihentikan di sejumlah negara karena efek samping negatifnya, seperti komplikasi neuro-paralitik pada individu tertentu.[15] Vaksin hidup yang dilemahkan menggunakan strain SAD-Bern, Evelyn Rokitnicki Abelseth (ERA), dan SAD-B19 dapat secara efektif menghasilkan respons imun protektif dengan jumlah virus yang lebih sedikit, namun masih berpotensi menyebabkan rabies pada hewan karena virulensi residual virus atau mutasi patogenik selama propagasi virus di dalam inang.[16]

 

Kebutuhan akan vaksin yang lebih aman, kurang reaktif, dan lebih imunogenik telah mendorong pengembangan vaksin generasi berikutnya. Pemahaman saat ini tentang biologi RABV telah meningkat pesat melalui pengenalan teknologi genetika terbalik dan manipulasi genetik dalam hal teknologi DNA rekombinan.[17] Hal ini juga secara signifikan mempercepat pembuatan vaksin inovatif, yang menciptakan platform untuk vaksin generasi berikutnya. Vaksin awal yang dimodifikasi secara genetik mengubah genom virus rabies dengan menghapus gen yang mengkode fosfoprotein atau protein matriks sehingga menghasilkan virus vaksin apathogenik yang tidak memiliki neurovirulensi bahkan pada tikus yang mengalami imunosupresi. Vaksin yang dimodifikasi secara genetik, seperti strain rERAG333E, ERAG3G, dan SPBN GAS GAS, memiliki tempat khusus dalam menghasilkan respons imun yang luar biasa.[18,19] Karena masalah keamanan, variasi lebih lanjut dari vaksin rekombinan dilakukan dengan memanipulasi genom virus rabies untuk mengkode dua salinan glikoprotein [20] atau hanya mengekspresikan glikoprotein virus rabies (RAVG) dalam hal vaksin asam nukleat, seperti plasmid pCIneo yang mengkode protein G RABV atau vaksin rabies berbasis mRNA SFV-RVGP.[21,22] Namun, vaksin ini belum dapat memberikan respons imun yang cukup kuat. Pemanfaatan lebih lanjut dari virus yang kurang patogen sebagai molekul pembawa untuk RAVG telah menghasilkan vaksin vektor virus, yang menyediakan platform yang menjanjikan untuk vaksinasi oral pada hewan liar.[23] Saat ini, vaksin berbasis vektor virus RABORAL V-RG dan ONRAB sangat diapresiasi dalam pengendalian rabies pada satwa liar.[24,25] Penelitian saat ini mengenai pengenalan vaksinasi rabies intradermal juga mewakili pergeseran paradigma untuk profilaksis pasca-paparan di Asia.[26]

 

Tinjauan komprehensif ini memberikan gambaran mengenai perjalanan yang dilalui dalam pengembangan vaksin rabies, dari paradigma mitos hingga bagaimana perjalanan ini berkembang selama sejarah aktual vaksin rabies dengan pengembangan berbagai jenis vaksin konvensional. Selain itu, tinjauan ini menekankan munculnya vaksin saat ini dengan teknik genetik canggih dan juga menyoroti fokus penelitian vaksin rabies di masa depan untuk pemberantasan rabies. Lebih lanjut, tinjauan ini memberikan informasi komprehensif dan menyoroti berbagai jenis vaksin anti-rabies yang digunakan di berbagai negara, keuntungan, keterbatasan, serta kisah sukses dan kegagalannya, yang akan memungkinkan kita merancang strategi pengendalian untuk "Pengendalian rabies yang ditularkan oleh anjing pada manusia pada tahun 2030".

 

2. Sejarah Vaksin Rabies

 

Sejarah pencegahan rabies dimulai pada abad pertama SM, di mana banyak mitos dan dogma tentang rabies dan pengobatannya berkembang. Tidak ada diagnosis atau pengobatan yang konsisten untuk rabies pada manusia atau hewan hingga abad ke-19. Teknik seperti kauterisasi disarankan untuk perawatan luka rabies, dan dalam beberapa kasus, bahkan dilakukan eksisi atau amputasi. Namun, semua keyakinan tersebut tidak pernah menjadi solusi untuk tingginya angka kematian akibat rabies pada manusia dan hewan. Pada tahun 25 M, orang mulai memandang rabies dari perspektif ilmiah. Aulus Cornelius Celsus pada tahun 25 M mendorong perawatan dini luka setelah gigitan. Pada tahun 1198, Moses Maimonides menggambarkan periode inkubasi yang lama pada individu yang tergigit. Kemudian Giovanni Battista Morgani mengidentifikasi kecenderungan virus rabies pada jaringan saraf pada tahun 1769. Pada tahun 1804, Georg Gottfried Zink menunjukkan bahwa air liur yang terinfeksi dari hewan rabies dapat menjadi sumber infeksi. Pada tahun 1852, seorang apoteker Prancis, Apollinaire Bouchardat, adalah ilmuwan pertama yang memikirkan kemungkinan inokulasi terhadap infeksi rabies. Pada tahun 1881, imunisasi eksperimental pertama terhadap rabies berhasil dilakukan pada domba melalui inokulasi intravena virus rabies oleh seorang dokter hewan Prancis, Pierre-Victor Galtiern sejarah pengembangan vaksin dimulai oleh para vaksinolog pra-Pasteurian, sejarah sebenarnya pengembangan vaksin rabies dimulai pada tahun 1885 oleh Louis Pasteur sebagai tindakan manajemen darurat, bahkan sebelum agen penyebab penyakit tersebut diidentifikasi . Awalnyarabies tidak sesuai dengan Teori Kuman Koch karena mereka tidak dapat mengkulturkan agen infeksi yang terkait dengan penyakit tersebut. Bahkan pada akhir 1800-an, rabies diyakini disebabkan oleh parasit yang mirip dengan Sporozoa . Mereka tidak dapaan adanya agen "yang dapat disaring" yang menyebabkan penyakit tersebut hingga tahun 1903. Ukuran virion rabies tidak diketahui hingga tahun 1936, dan eksplorasi mikroskopis elektron terhadap agen penyebabnya tidak terjadi hingga tahun 1962. Meskipun demikian, pada tahun 1881, Pasteur dan timnya bersama Chamberland, Roux, dan Thuillier dapat melacak keberadaan virus rabies di sistem saraf pusat hewan yang terkena rabies. [30]

 

3. Vaksin Generasi Pertama: Vaksin Pasteur (Vaksin Jaringan Saraf)

 

Era vaksin generasi pertama dimulai dengan Louis Pasteur yang mengembangkan vaksin rabies pertama dari sumsum tulang belakang kelinci yang terinfeksi melalui inaktivasi fisik virus rabies dengan pengeringan sinar matahari. Melalui beberapa kali pasase dan adaptasi virus rabies liar (wild-type) pada hewan laboratorium, Pasteur mampu mengubah sifat virus dalam hal virulensi dan periode inkubasi. Melalui pasase berulang lebih dari 50 kali dengan menginokulasi persiapan virus liar yang tetap pada membran dura mater kelinci, Pasteur mengamati bahwa konsistensi periode inkubasi dari inokulasi hingga perkembangan rabies tetap selama 7 hari. Oleh karena itu, ia menyebut virus tersebut sebagai virus "tetap". Setelah beberapa eksperimen pada anjing sebagai inang alami, pada 6 Juli 1885, Pasteur pertama kali memberikan vaksin rabies eksperimentalnya kepada seorang anak laki-laki berusia 9 tahun, Joseph Meister, yang mengalami gigitan parah dari anjing rabies. Sekitar 2 hari setelah gigitan, anak kecil tersebut menerima 13 suntikan suspensi sumsum tulang belakang kelinci yang terinfeksi virus rabies kering udara dengan virulensi yang meningkat secara progresif selama 11 hari. Vaksinasi strategis oleh Pasteur menyelamatkan Meister dari kematian karena rabies.]31] Namun, kelemahan utama vaksin Pasteurnya virus rabies yang semakin virulen. Selain itu, ada kekhawatiran tentang konsistensi inaktivasi, karena beberapa kasus dilaporkan dengan individu yang mengembangkan rabies setelah vaksinasi. Selain itu, ketidakmampuan untuk memenuhi produksi vaksin yang cukup untuk memenuhi permintaan adalah tantangan utama dalam menyediakan produksi vaksin skala besar. Namun, metode Pasteur kemudian digunakan selama lebih dari 50 tahun sebelum diperkenalkan modifikasi signifikan dalam persiapan vaksin rabies.

 

4. Vaksin Fermi & Semple yang Dimodifikasi Secara Kimiawi

 

Vaksin Pasteur lebih lanjut ditingkatkan melalui modifikasi kimia sederhana yang dilakukan oleh Fermi pada tahun 1908 [32] dan Semple pada tahun 1911.[33] Vaksin jaringan saraf dikembangkan oleh Sir Dadi Central Research Institute (CRI), Kasauli, India, dari domba dewasa (vaksin Semple). Mereka menginaktivasi otak domba atau kambing yang terinfeksi dengan agen kimia, seperti fenol.[33] Penambahan fenol, meskipun menginaktivasi vaksin Pasteur, tetap merur protein dan mengganggu antigenisitas virus rabies. Selain itu, efek samping parah, seperti Sindrom Guillain-Barre (GBS) dan bahaya penularan Ensefalopati Spongiform Menular (TSE), dilaporkan. Meskipun vaksin ini banyak digunakan di berbagai bagian dunia, WHO akhirnya menangguhkan penggunaannya di hampir semua negara.

 

5. Vaksin Jaringan Bebas Mielin

 

Meskipun vaksin Fermi dan Semple berhasil, sensitisasi pada beberapa individu yang divaksinasi dan juga beberapa kasus yang diperburuk oleh ensefalitis fatal akibat tingginya kadar mielin memerlukan vaksin alternatif yang kurang reaktif. Pada tahun 1940-an, penelitian klinis tentang ensefalomielitis alergi terkait vaksinasi dan penyakit demielinasi di sistem saraf pusat mendapat perhatian yang signifikan. Kemudian, kemunculan telur embrionik, seperti embrio ayam atau bebek, dan otak hewan pengerat neonatal sebagai media untuk memproduksi vaksin rabies membuat pengembangan vaksin lebih aman. Bukti klinis mengungkapkan tidak adanya zat yang bertanggung jawab atas efek samping vaksin pada jaringan saraf embrionik dan hewan baru lahir. Peneliti dari bekas Uni Soviet mengembangkan vaksin otak hewan pengerat neonatal menggunakan tikus.[34] Pada tahun 1964, Fuenzalida dan timnya mengembangkan vaksin rabies inaktif bedari otak tikus menyusui (Suckling mouse brain-SMB) melalui inaktivasi fenolik yang diikuti dengan pemurnian parsial.[35]

 

Ketiadaan mielin dalam jaringan yang berasal dari hewan baru lahir membuat vaksin SMB tif dibandingkan dengan vaksin Semple. Namun, penelitian mengungkapkan bahwa vaksin tersebut tidak sepenuhnya bebas dari mielin, dan adanya komponen tidak diinginkan lainnya menyebabkan reaksi merugikan yang parah.[36] Oleh karena itu, sejalan dengan rekomendasi WHO, otoritas pengawas nasional di seluruh dunia memuk menghentikan vaksin ini setelah penggunaannya yang berlangsung puluhan tahun.[37]

 

6. Vaksin Embrio

 

Pada tahun 1931, adaptasi berbagai virus manusia oleh Ernest W. Goodpasture menggunakan telur berembrio menyediakan platform baru untuk pengembangan lebih lanjut vaksin rabies. Setelah penggunaan hewan hidup, telur berembrio digunakan dalam pengembangan vaksin rabies. Pada tahun 1940, strain virus rabies Flury diterapkan pada anak ayam berusia 1 hari.[38] Strain ini kemudian dikembangkan di dalam embrio ayam.[39] Vaksin Flury low egg passage (LEP) terdiri dari virus hidup yang dilemahkan yang telah melalui 40-50 kali passase telur dan selanjutnya di-liofilisasi dari suspensi embrio utuh sebanyak 33%. Vaksin LEP digunakan dalam vaksinasi massal anjing tetapi masih memiliki beberapa virulensi residual, terutama pada anak kucing, kucing, dan sapi. Setelah itu, vaksin Flury high egg passage (HEP) diproduksi melalui rangkaian hampir 180 kali passase telur atau lebih. Meskipun vaksin ini diuji pada manusia selama tahun 1950-an dan 1960-an, akhirnya dihentikan karena potensi vaksinnya tidak memadai.[40] Pada akhir 1950-an, embrio bebek menjadi alternatif untuk embrio ayam dalam produksi vaksin, di mana mereka mengembangkan vaksin embrio bebek (DEV) untuk rabies yang mengandung virus rabies dalam suspensi embrio utuh 10%, yang diinaktivasi menggunakan β-propiolactone. Vaksin ini digunakan secara luas pada manusia di AS hingga tahun 1980-an. Vaksin-vaksin ini kemudian dihentikan karena reaksi merugikan dan antigenisitas yang rendah.[41] Adaptasi virus rabies yang berhasil pada embrio memberikan harapan bahwa penggantian dapat dilakukan untuk vaksin jaringan otak.[42] Meskipun berbagai pendekatan strategis dapat sedikit meningkatkan kualitas vaksin ini, masalah terkait keamanannya, kemanjuran, dan imunogenisitas belum sepenuhnya disetujui. Akibatnya, vaksin ini dihentikan penggunaannya di banyak daerah di seluruh dunia,[30] dan penelitian berfokus pada substrat sel untuk memperbanyak virus rabies yang memunculkan era vaksin kultur sel.

 

7. Vaksin Generasi Kedua: Vaksin Kultur Sel

 

Pembuatan sistem kultur sel untuk propagasi virus telah membawa paradigma baru dalam pengembangan vaksin rabies, yang menghasilkan vaksin generasi kedua berbasis kultur sel. Sistem kultur sel adalah metode populer untuk memproduksi vaksin virus karena memiliki sejumlah keunggulan dibandingkan vaksin jaringan saraf dan sistem berbasis telur. Ini memberikan profil keamanan dan kemanjuran yang mapan, serta waktu proses yang lebih singkat dan fleksibilitas proses yang lebih tinggi.[43] Pada tahun 1930, kultivasi virus rabies dalam eksplan primer sel otak embrio ayam berhasil dilakukan, dan virus tersebut dipertahankan hingga lima kali passase serial.[44] Kemudian, penelitian berfokus pada propagasi RABV tetap di jaringan otak embrio tikus.[45] Pada tahun 1942, Plotz dan Reagan berhasil melakukan isolasi dan kultivasi in vitro langsung pertama dari virus rabies alami dari otak kasus rabies dalam eksplan primer sel embrio ayam.[46] Kemudian, konsep kultivasi virus rabies dalam jaringan non-neuronal diusulkan pada tahun 1958, yang menghasilkan vaksin kultur jaringan rabies pertama dari sel ginjal hamster primer menggunakan virus rabies tetap (bersumber dari otak tikus yang terinfeksi rabies) dan virus rabies alami (diisolasi dari kelenjar ludah anjing rabies).[47] Kissling berhasil memperbanyak virus tetap secara serial melalui lima belas passase kultur sel dan juga mempertahankan virus alami melalui empat passase. Setelah itu, pada tahun 1960, Fenje berhasil melakukan adaptasi pertama dari strain virus rabies menggunakan kultur sel untuk kemungkinan digunakan dalam produksi vaksin menggunakan strain Street Alabama Dufferin (SAD) yang dipropagasi dalam otak tikus dan diadaptasi dalam kultur sel ginjal hamster primer serta otak tikus melalui passase alternatif.[48]

 

Kemudian, pada tahun 1963, vaksin eksperimen kultur sel rabies pertama, vaksin sel ginjal hamster primer (PHKCV), disiapkan oleh Kissling dan Reese, dalam sel ginjal hamster primer yang diberi strain Challenge Virus Standard (CVS) dari virus rabies tetap yang telah diadaptasi sebelumnya.[49] Pada tahun 1968, PHKCV, yang dikembangkan menggunakan strain tetap CL-60 (turunan dari virus rabies Street Alabama Dufferin [SAD]), mendapat lisensi di Kanada.[31] Kemudian, pada tahun 1971, PHKCV diproduksi menggunakan strain Vnukovo-32 di bekas Uni Soviet. Setelah Kissling, para ilmuwan mulai menggunakan berbagai sistem kultur sel untuk propagasi berbagai strain virus rabies untuk pengembangan vaksin. Pada tahun 1964, Abelseth mengembangkan vaksin rabies yang dilemahkan untuk hewan domestik menggunakan strain SAD dari virus rabies yang dipropagasi dalam sel ginjal babi primer.[50] Kemudian, pada tahun 1965, Kondo mengeksploitasi kerentanan kultur sel embrio ayam primer untuk memperbanyak strain Flury-HEP yang diadaptasi pada embrio telur dalam mengembangkan vaksin rabies inaktivasi untuk penggunaan manusia.[51] Pada tahun 1969, Wiktor menggunakan lini sel BHK-21, yang berasal dari sel ginjal bayi hamster, untuk produksi vaksin rabies yang dimurnikan dan terkonsentrasi.[52] Vaksin rabies sel ginjal sapi janin yang menggunakan virus Pasteur (PV) dan vaksin rabies sel ginjal anjing yang menggunakan strain Pitman-Moore (PM) keduanya dibuat pada tahun 1974 dan 1978, masing-masing, dan dilisensikan untuk digunakan di Belanda.[31]

 

Secara perlahan, produksi vaksin rabies berkualitas tinggi menjadi mungkin dilakukan melalui teknik kultur sel modern menggunakan strain sel diploid untuk produksi vaksin. Hal ini diikuti oleh pertumbuhan RABV tetap dalam strain sel diploid manusia HDCS “WI 38”, yang dikembangkan pada tahun 1961 oleh Hayflick dan Moorhead.[53] Kemudian pada pertengahan 1970-an, lini sel WI-38 digantikan oleh lini sel MRC-5 dalam mengembangkan vaksin sel diploid manusia berlisensi (HDCV).[54] HDCV adalah vaksin rabies pertama yang dimurnikan, terkonsentrasi, dan di-liofilisasi tanpa adjuvan. Selain itu, HDCV dilaporkan memiliki efek samping yang jauh lebih sedikit. Oleh karena itu, WHO merekomendasikan HDCV sebagai vaksin referensi standar emas,[30] namun vaksin sel diploid manusia memiliki hasil virus yang rendah dan tidak cukup hemat biaya untuk dijangkau banyak negara berkembang. Hal ini memerlukan pengembangan vaksin alternatif yang sama efektifnya dengan vaksin sel diploid manusia, yang menghasilkan pengembangan vaksin sel embrio bebek yang dimurnikan dan vaksin sel embrio ayam yang dimurnikan.

 

Pada tahun 1971, vaksin jaringan berbasis embrio bebek lengkap, yang ditingkatkan dengan protokol pemurnian lanjutan, memfasilitasi produksi vaksin sel embrio bebek yang dimurnikan (PDECV) menggunakan strain CVS.[55] Pada tahun 1985, Institut Serum dan Vaksin Swiss menyetujui vaksin PDECV yang menggunakan strain Pitman-Moore. Selanjutnya, PDECV terdaftar di beberapa negara Eropa dan Asia; namun, tidak diizinkan di AS. Vaksin-vaksin ini terbukti lebih baik daripada DEV karena sepenuhnya bebas dari protein telur dan protein dasar mielin, yang merupakan sumber penting untuk encephalomyelitis alergi. Kemudian, pada tahun 1972, menggunakan virus Flury HEP, vaksin sel embrio ayam yang dimurnikan (PCECV) dikembangkan. Kemudian dengan bantuan virus Flury LEP, PCECV lain dikembangkan dan diinaktivasi, digunakan sebagai vaksin untuk imunisasi anjing selama beberapa tahun. PCECV kedua untuk manusia [56] dikembangkan dengan mengadaptasi strain Flury LEP dalam sel fibroblas embrio ayam (CEF) dan disetujui di Eropa pada tahun 1984. Di AS, PCECV lain diproduksi menggunakan virus LEP-c25 dan menerima lisensi pada tahun 1997.[57] Saat ini, PCECV adalah salah satu vaksin rabies manusia yang paling umum digunakan.[30] Karena imunogenisitas dan tolerabilitas yang sebanding, vaksin sel embrio bebek yang dimurnikan (PDECV) atau vaksin sel embrio ayam yang dimurnikan (PCECV) telah menjadi alternatif yang efektif untuk vaksin sel diploid manusia dalam pencegahan rabies manusia di banyak bagian dunia.[58]

 

Namun, sistem kultur primer memiliki kendala yang melekat pada pembelahan sel. Strain sel diploid, seperti WI-38, MRC-5, dan FRhL-2, memiliki masa hidup terbatas sekitar 50 kali passase serial, setelah itu sel menjadi senesens. Meskipun mampu bereproduksi, secara teknis sulit untuk beradaptasi dengan kultur komersial skala besar untuk produksi vaksin. Hal ini mendorong penggunaan garis sel kontinu untuk produksi vaksin. Pada tahun 1962, lini sel Vero diproduksi dari sel ginjal monyet hijau Afrika. Produksi titer virus yang lebih tinggi dibandingkan dengan sel kultur primer, penskalaan sistem kultur sel yang sederhana, dan sejarah penggunaan yang panjang dalam vaksin tanpa menimbulkan masalah keamanan telah menjadikan lini sel Vero menarik dalam propagasi berbagai virus. Pada awal 1980-an, virus rabies dipropagasi dalam sel Vero untuk produksi vaksin.[59.60] Replikasi berbagai virus lyssa, termasuk HEP, CVS, virus Mokola, virus kelelawar Duvenhage, dan virus kelelawar Lagos, telah didukung oleh sel Vero. Keuntungan dari sel Vero secara signifikan menurunkan biaya produksi vaksin rabies dan membuat vaksinasi rabies dapat diakses oleh sebagian besar negara berkembang. Pengenalan lebih lanjut dari vaksin rabies yang dimurnikan dari sel Vero (PVRV) ke dalam praktik klinis tetap menjadi kunci untuk pencegahan rabies [43]. Pada tahun 1985, vaksin rabies PVRV mendapat lisensi di Eropa [31]. Selain itu, WHO mengusulkan penggantian vaksin jaringan saraf dengan vaksin yang lebih efektif dan aman yang dikembangkan melalui kultur sel [20]. Saat ini, PVRV tersedia luas dan banyak digunakan di seluruh dunia. Sebagai langkah maju dalam proses produksi vaksin, vaksin PVRV Generasi Berikutnya (PVRV-NG) yang disempurnakan tanpa serum diproduksi dari strain PM yang diinaktivasi dari virus rabies (RABV) [61]. Profil imunogenisitas dan keamanan vaksin generasi berikutnya ini menjadikannya alternatif baru untuk profilaksis rabies [62].

 

8. Perkembangan Terkini dalam Vaksin Rabies

 

Meskipun banyak vaksin anti-rabies telah diciptakan selama bertahun-tahun untuk melindungi manusia dan hewan dari rabies, profil keamanan dan imunogenisitas kandidat vaksin tetap menjadi yang terpenting. Namun, konsep penting dalam pengembangan vaksin, seperti atenuasi dan inaktivasi, terus menjadi pilar dalam inovasi vaksin rabies yang berkelanjutan. Upaya penelitian vaksin rabies terus berfokus pada peningkatan imunogenisitas dan keamanan kandidat vaksin, yang mengarah pada pengembangan vaksin yang dimodifikasi atau diinaktivasi.

 

8.1. Vaksin Hidup yang Dimodifikasi (MLV)

 

Vaksin hidup yang dimodifikasi umumnya diproduksi dari virus alami dengan mengubah profil patogeniknya, sehingga memicu respons imun yang kuat tanpa menyebabkan penyakit klinis. Sebagian besar ilmuwan memodifikasi virus melalui serial passage dalam berbagai sel untuk memastikan keamanan calon vaksin, yang mengarah pada pengembangan vaksin hidup yang dilemahkan untuk berbagai penyakit, termasuk rabies. Strain SAD (Street Alabama Dufferin) asli dari virus rabies adalah sumber dari semua vaksin yang dilemahkan yang saat ini digunakan, yang telah mengalami berbagai tingkat atenuasi melalui beberapa passage dalam kultur sel. Sebagian besar vaksin hidup yang dimodifikasi dilemahkan melalui seleksi in vitro berturut-turut dengan sel ginjal bayi hamster klonal atau melalui passage serial pada tikus in vivo.

 

Di beberapa negara Asia, strain Flury, vaksin MLV asal embrio ayam, telah dibuat dan diberikan kepada hewan. Secara bersamaan, vaksin MLV menggunakan strain Street-Alabama-Dufferin (SAD) yang diproduksi menggunakan sel ginjal hamster [63] untuk penggunaan lebih lanjut. Untuk menciptakan vaksin yang lebih unggul daripada vaksin Flury-LEP dalam hal kualitas, pada tahun 1974, Kanada memperkenalkan strain vaksin hidup yang dilemahkan Evelyn-Rokitnicki-Abelseth (ERA), sebagai vaksin Flury low-egg passage, yang memiliki konsekuensi negatif karena adanya serpihan jaringan dalam vaksin. Akhirnya, vaksin Flury low-egg passage digantikan dengan strain ERA oleh Otoritas Veteriner Korea pada akhir 1970-an. Hewan domestik, termasuk anjing, anak domba, kambing, dan kucing yang divaksinasi dengan vaksin hidup yang dilemahkan ERA melalui rute intramuskular tidak menunjukkan indikasi klinis apa pun, dan strain vaksinasi tidak ditemukan kembali dari kelenjar ludah atau otak mereka, tetapi tetap memicu respons imun yang kuat dan meningkatkan titer antibodi penetral virus (VNA). Sayangnya, hampir 50% anjing yang menerima suntikan vaksin secara intrakranial mengalami gejala klinis yang signifikan, seperti anoreksia, demam, tremor berat, paresis, dan kelumpuhan [64]. Ini tetap menjadi kelemahan utama dari vaksin hidup yang dimodifikasi karena virulensinya yang tersisa. Selain itu, MLV lebih sensitif terhadap fluktuasi suhu, dan inokulasi diri secara tidak sengaja dengan vaksin rabies MLV cukup berisiko bagi petugas vaksinasi [64]. Meskipun MLV lebih imunogenik dan anjing dapat dengan aman dan efektif menerima strain vaksin rabies hidup yang dimodifikasi (ERA, Flury, dan SAD), akhirnya, WHO menghentikan rekomendasi vaksin rabies MLV untuk injeksi parenteral pada tahun 2004.

 

8.2. Vaksin Rabies yang Diinaktivasi

 

Sejarah vaksin yang diinaktivasi dimulai sekitar satu abad yang lalu, di mana vaksin jaringan saraf yang diinaktivasi dikembangkan untuk rabies digunakan di beberapa negara Afrika dan Asia. Sebagian besar vaksin rabies tradisional menggunakan virus lengkap yang diinaktivasi dengan properti antigenik yang sama seperti virus tipe liar. Telah terbukti bahwa imunisasi dengan virus lengkap yang diinaktivasi menyebabkan pengembangan antibodi penetral virus melalui aktivasi sel T penolong dan sitotoksik serta perlindungan terhadap tantangan virus rabies intrakranial yang mematikan.

 

Di seluruh dunia, vaksin rabies yang diinaktivasi telah diproduksi menggunakan berbagai strain virus rabies, termasuk CVS 11, Pittman-Moore-NIL2, RC-HL yang diproduksi dari strain Nishigahara, dan strain virus Pasteur [65]. Saat ini, vaksin rabies yang diizinkan untuk digunakan pada manusia didasarkan pada virus rabies yang dimurnikan dan diinaktivasi yang dikembangbiakkan dalam kultur sel atau dalam sistem telur bebek atau ayam yang berembrio [20]. Biasanya, strain vaksin rabies diinaktivasi menggunakan beta propiolakton (BPL), sinar ultraviolet, asetiletilamin, atau etilenimin biner (BEI). BPL adalah agen inaktivasi yang paling umum digunakan; namun, harganya mahal dan tidak stabil pada 37 °C. Karena potensinya untuk merusak struktur situs antigenik, fenol dan formaldehida tidak lagi disarankan untuk inaktivasi virus. Sebaliknya, BEI lebih aman untuk ditangani dan menawarkan manfaat stabilitas yang baik, biaya rendah, dan kemudahan persiapan. Namun, imunogenisitas yang lebih rendah, mahal, dan kebutuhan akan rejimen vaksinasi ganda pada imunisasi pra- dan pasca-paparan adalah kelemahan mendasar dari vaksin yang diinaktivasi [66]. Oleh karena itu, untuk meningkatkan respons imun, adjuvan antigen dimasukkan dalam vaksin yang diinaktivasi, yang mengarah pada pengembangan vaksin adjuvan.

 

8.3. Vaksin Rabies Adjuvan

 

Adjuvan adalah zat yang meningkatkan atau memodulasi respons imun terhadap vaksin dengan memperkuat respons inflamasi yang penting untuk stimulasi antigen pada sel B dan T naif. Adjuvan selalu menarik perhatian karena penggunaannya dalam vaksin yang diinaktivasi, subunit, dan vaksin sintetis, yang pada dasarnya adalah imunogen lemah, dan adjuvan digunakan sebagai pelengkap untuk meningkatkan imunogenisitas dan menghasilkan vaksin yang lebih kuat karena kemampuannya dalam amplifikasi kekebalan [67]. Adjuvan, seperti aluminium hidroksida, aluminium fosfat, dan saponin, sering digunakan sebagai adjuvan [68]. Namun, sebagian besar adjuvan yang digunakan saat ini adalah garam aluminium. Meskipun alum adalah adjuvan pertama yang disetujui untuk penggunaan manusia, diklaim bahwa alum menunda produksi antibodi awal dan tidak sama efektifnya dalam menginduksi kekebalan seluler [69]. Efek samping yang merugikan, toksisitas, dan keterbatasan adjuvan untuk beberapa antigen adalah kelemahan utama dari adjuvan, yang telah mendorong perkembangan derivatif sintetis, seperti muramyl dipeptida, liposom, QS21, monofosforil-lipidA, MF-59, dan kompleks imunostimulan (ISCOMS), sebagai adjuvan alternatif [67]. Dalam beberapa tahun terakhir, banyak penelitian berfokus pada penggunaan adjuvan alternatif untuk meningkatkan imunogenisitas dan efektivitas vaksin virus rabies yang diinaktivasi, dan berbagai senyawa lainnya, termasuk polisakarida akar Isatisindigotica, oligonukleotida CpG, monofosforil-lipid A (MPLA), β-glukan, asam hialuronat (HA) yang berasal dari Staphylococcus aureus, dan derivatif protein murni Bacillus Calmette-Guérin (PPD), telah dipelajari. Adjuvan kandidat ini jelas bisa menjadi platform yang menjanjikan untuk pengembangan vaksin rabies adjuvan baru di masa depan dengan potensi peningkatan kekebalan yang lebih besar dan risiko efek samping kesehatan yang lebih rendah [70,71,72,73,74,75].

 

9. Vaksin Generasi Berikutnya

 

Risiko yang ditimbulkan oleh virulensi sisa pada vaksin hidup yang dimodifikasi dan rendahnya imunogenisitas serta kebutuhan jumlah besar antigen dan dosis berulang untuk menghasilkan respons imun protektif pada vaksin inaktivasi menunjukkan perlunya vaksin rabies yang lebih aman dan terjangkau. Saat ini, kemajuan teknologi seperti teknologi DNA rekombinan dan genetika balik telah memberikan wawasan mendalam tentang genom virus rabies dan memfasilitasi manipulasi genetik, yang pada gilirannya menawarkan harapan untuk vaksin yang lebih ampuh dan aman, dengan biaya lebih rendah serta stabilitas dan imunogenisitas yang lebih baik. Hal ini telah mengarah pada era vaksin generasi berikutnya yang menargetkan strain virus rabies rekombinan atau glikoprotein antigenik rabies rekombinan individu (protein G), yang dapat membantu mengatasi kelemahan vaksin yang dilemahkan hidup [64].

 

9.1. Vaksin yang Dimodifikasi Secara Genetik

 

Virus yang dimodifikasi secara genetik dihasilkan melalui modifikasi genetik genom virus dengan cara penyisipan terarah, penghapusan, sintesis buatan, atau perubahan urutan nukleotida menggunakan metode bioteknologi, tetapi tetap mempertahankan kemampuan infeksi. Sebagian besar vaksin rabies melibatkan atenuasi, pelemahan, atau inaktivasi virus sehingga karakteristik virulen mereka tidak efektif. Fokus genetik pada genom virus telah mengonfirmasi bahwa glikoprotein (G) paling terkait dengan patogenisitas RABV dan telah menemukan situs asam amino tertentu yang berkaitan dengan patogenisitas virus [76]. Oleh karena itu, manipulasi genetik lebih lanjut pada strain virus rabies induk, seperti menciptakan mutasi spesifik situs pada asam amino ini atau penyisipan glikoprotein yang dimodifikasi, akan menghilangkan patogenisitas sisa, mencegah kemungkinan revirulensi, mengurangi potensi mutasi balik ke asam amino asli, dan meningkatkan keamanan pada mutan yang dihasilkan, yang pada gilirannya akan menjadi opsi menjanjikan untuk menghasilkan vaksin rabies yang sangat dilemahkan [23].

 

Khususnya, vaksin ini sangat penting untuk imunisasi massal anjing liar di negara berkembang atau bahkan habitat satwa liar di negara maju, dan banyak strain vaksin mutan telah dikembangkan sebagai hasil dari berbagai upaya penelitian. Strain vaksin ERA liar yang dimodifikasi secara genetik (rERA) dengan mutasi arginin menjadi asam glutamat pada residu 333 RVG (G333E) telah dikembangkan. Melalui inokulasi intramuskular (IM) pada anjing dan juga imunisasi oral pada tikus, rERAG333E hidup ini dapat menginduksi RVNA yang kuat dan tahan lama yang lebih tinggi dibandingkan dengan strain ERA liar (rERA) [18]. Selain itu, menggunakan genetika balik, genom lengkap dimutasi pada posisi asam amino 333 dari gen RVG rRABV, dan plasmid pembantu diresku pada sel BHK/T7–9, menghasilkan konstruksi strain ERAG3G, yang dengan imunisasi oral lebih lanjut pada tikus, menunjukkan perlindungan total terhadap RABV patogenik [19]. Strain baru lainnya, ERAGS, rRAVB dengan mutasi spesifik situs pada posisi 194 dan 333 RVG, ditemukan tidak patogenik, sangat aman, dan sangat efektif terhadap RABV patogenik tinggi pada tikus yang divaksinasi IM [77]. Konstruksi virus rabies dengan glikoprotein ganda yang sangat dilemahkan, SPBN GASGAS, dihasilkan dari strain rabies SAD L16 melalui mutasi pada posisi asam amino 194 dan 333 dan dengan tambahan gen glikoprotein yang diubah secara identik. Mutan yang dihasilkan memiliki profil keamanan yang lebih baik dengan mengurangi risiko potensial revirulensi dan meningkatkan apoptosis. Baru-baru ini, SPBN GASGAS telah menempati posisi penting sebagai kandidat vaksin rabies potensial untuk vaksinasi oral guna mengurangi rabies pada anjing liar di beberapa negara berkembang seperti Thailand, Haiti, Namibia, dan Maroko [23].

 

9.2. Vaksin Rabies Rekombinan

 

Karena masalah keamanan dan peningkatan imunogenisitas, variasi vaksin rekombinan lebih lanjut telah dibuat dengan mengedit genom virus rabies untuk mengkode dua atau lebih salinan gen glikoprotein atau menggunakan strategi untuk mengkloning dan mengekspresikan hanya glikoprotein virus rabies (RAVG). Konstruksi vaksin rabies rekombinan yang mengkode dua salinan gen glikoprotein memberikan perlindungan yang lebih baik pada tikus dan memberikan perlindungan pada anjing terhadap tantangan virulen dengan strain Challenge Virus Standard-11 (CVS-11) [78,79]. Studi juga mengungkapkan bahwa RABV yang mengandung dua salinan gen G memiliki peningkatan ekspresi gen G, yang secara signifikan meningkatkan efektivitas vaksin dengan meningkatkan imunogenisitas, tingkat produksi antibodi penetralisir virus yang lebih tinggi, dan mengurangi patogenisitas [80,81]. Peningkatan ekspresi gen G dikaitkan dengan peningkatan apoptosis, yang berkontribusi pada induksi peningkatan signifikan gen terkait respons imun inang yang diamati pada neuron yang terinfeksi oleh strain RABV yang dilemahkan [80,82]. Dengan demikian, strain RABV rekombinan ini dapat menjadi kandidat vaksin inaktivasi yang menjanjikan di masa depan.

 

9.3. Vaksin Rabies Berbasis Asam Nukleat

 

Materi genetik dari virus penyebab penyakit digunakan dalam vaksin asam nukleat untuk menghasilkan respons imun protektif terhadap agen infeksi. Vaksin yang terbuat dari asam nukleat memiliki potensi untuk menjadi lebih hemat biaya, aman, dan efisien. Selain itu, respons imun yang ditimbulkan oleh vaksin asam nukleat hanya berfokus pada antigen patogen yang dipilih. Vaksin asam nukleat dapat berupa DNA (sebagai plasmid) atau RNA [sebagai messenger RNA (mRNA)] dan menunjukkan potensi luar biasa dalam mengatasi berbagai penyakit [83]. Ini didasarkan pada kloning DNA ke dalam plasmid pengantar atau melalui inokulasi langsung messenger RNA (mRNA) untuk mengekspresikan antigen dalam sel inang. Selanjutnya, mesin inang akan membantu dalam sintesis protein endogen, yang meniru infeksi alami dengan memicu respons seluler dan humoral terhadap antigen yang diekspresikan.

 

9.3.1. Vaksin DNA Rabies

 

Secara umum, tingkat antibodi penetral virus yang memadai diarahkan terhadap glikoprotein virus rabies, yang selanjutnya berkorelasi dengan perlindungan terhadap rabies. Gen glikoprotein dapat dengan mudah dikloning ke dalam vektor ekspresi yang sesuai menggunakan teknik teknologi DNA rekombinan, yang memfasilitasi ekspresi glikoprotein secara efisien di dalam tubuh dan menghasilkan produksi vaksin DNA rabies. Sejak tahun 1994, vaksin DNA telah diusulkan sebagai metode profilaksis rabies yang lebih terjangkau dan efektif, dan kelayakannya telah dibuktikan pada berbagai model hewan, termasuk hewan peliharaan.[84] Urutan glikoprotein virus Pasteur (PV), standar virus tantangan (CVS), Evelyn Rokitnicki-Abelseth (ERA), atau isolat virus lapangan digunakan untuk menguji vaksin DNA rabies. Glikoprotein RV diekspresikan dalam berbagai vektor ekspresi, termasuk pSG5, pCIneo, pVR105, DNAVACC, dan berhasil dalam memberikan respons imun spesifik pada hewan percobaan.[21,85,86,87] Meskipun teknologi ini telah terbukti efektif, penggunaannya secara luas, terutama dalam profilaksis pasca pajanan terhadap rabies, masih terhambat oleh respons imun yang lebih lambat dan lebih lemah. Namun, pemberian bersama plasmid pengkode glikoprotein dengan adjuvan kimia atau pengiriman bersama gen sitokin dan teknik pengiriman inovatif, termasuk injeksi DNA diikuti elektroporasi dan pemberian bersama dengan vaksin rabies inaktivasi tradisional, berhasil meningkatkan respons imun dan meningkatkan potensinya untuk pencegahan dan pengelolaan rabies.[84; 88] Selain itu, perkembangan terkini dalam desain vektor dan sistem pengiriman juga menjanjikan peningkatan efektivitas vaksin DNA rabies.[89, 90] Namun, risiko yang terkait dengan integrasi DNA plasmid ke dalam kromosom inang, pengembangan toleransi terhadap vektor DNA plasmid, antigen, dan auto-imunitas perlu ditangani secara serius sebelum dikembangkan menjadi vaksin yang digunakan secara luas.

 

9.3.2. Vaksin RNA Rabies

 

Vaksin RNA adalah vaksin asam nukleat yang paling sederhana dan muncul sebagai platform alternatif yang lebih menjanjikan untuk pengembangan vaksin. Vaksin RNA memiliki sejumlah keunggulan dibandingkan dengan vaksin DNA. Vaksin RNA diterjemahkan secara langsung di sitoplasma, menghilangkan kebutuhan untuk transportasi ke dalam nukleus dan menghasilkan ekspresi antigen yang cepat tanpa risiko integrasi dengan genom inang. Diketahui bahwa RNA adalah adjuvan yang kuat yang meningkatkan respons imun inang dengan berkomunikasi melalui reseptor pengenalan pola, seperti reseptor Toll-like atau reseptor gen I yang diinduksi asam retinoat [91.] Kemampuan messenger RNA (mRNA) untuk mereplikasi sendiri telah menghasilkan dua jenis utama vaksin RNA saat ini: vaksin mRNA non-amplifikasi tradisional dan vaksin mRNA amplifikasi diri (juga dikenal sebagai replikon) yang berasal dari vektor virus RNA, seperti virus Semliki Forest (SFV), yang mempertahankan aktivitas replikatif [92]. Penelitian telah mengungkapkan bahwa vaksin rabies berbasis mRNA non-amplifikasi tradisional yang mengkodekan gen RABV G merangsang VNA yang kuat dan limfosit T CD4+ dan CD8+ spesifik antigen pada tikus yang diinokulasi dan melindungi mereka dari infeksi tantangan intrakranial yang mematikan [93]. Demikian pula, vaksin rabies berbasis mRNA ditemukan imunogenik pada babi domestik dengan tingkat VNA yang efektif [93]. Vaksin rabies berbasis mRNA amplifikasi diri dengan SFV rekombinan yang mengandung protein RNA-pengkode RABV G (SFV-RVGP) menyebabkan tingkat ekspresi tinggi protein RABV G trimerik yang fungsional, memicu tingkat antibodi yang sebanding dengan vaksin rabies komersial, dan lebih efektif dibandingkan vaksin protein dalam menghasilkan respons imun seluler [22]. Namun, tantangan utama adalah ketidakstabilan vaksin RNA karena degradasi yang dimediasi RNase atau tolak-menolak elektrostatik yang dihasilkan akibat interaksi molekul mRNA bermuatan negatif dengan membran sel bermuatan negatif, yang menyebabkan ekspresi antigen sementara setelah pengiriman RNA, yang memerlukan perhatian kritis.

 

9.4. Vaksin Subunit Protein dan Peptida untuk Rabies

 

Vaksin protein merangsang sistem imun dengan menggunakan peptida atau protein sebagai antigen. Antigen protein dapat diproduksi secara alami dari patogen penyebab penyakit infeksi, baik dalam bentuk utuh maupun sebagai produk terpisah. Vaksin subunit protein juga dapat dibuat sebagai protein heterolog dalam sistem rekombinan, termasuk bakteri rekombinan, ragi, sel serangga, atau sel mamalia, sebagai alternatif dari sumber alami [94]. Protein RABV G adalah penentu utama patogenisitas virus dan juga antigen protektif utama yang bertanggung jawab dalam memicu kekebalan protektif terhadap rabies. Oleh karena itu, efektivitas protein G (dimurnikan dari sel yang terinfeksi) telah diuji di berbagai sistem dan digunakan sebagai bentuk vaksin protein untuk perlindungan rabies. Namun, hasilnya tidak efektif. Protein yang berasal dari ragi gagal memicu respons imun protektif pada tikus, yang kemungkinan besar disebabkan oleh pelipatan yang buruk dari produk akhir [95]. Telah ditunjukkan bahwa protein G yang berasal dari baculovirus yang diproduksi dalam sel serangga bersifat imunogenik [96], tetapi kebutuhan pemurnian yang cukup besar kemungkinan akan membuat metode ini tidak ekonomis. Saat ini, penggunaan tanaman yang dimodifikasi secara genetik untuk menghasilkan vaksin semakin mendapatkan perhatian. Para peneliti juga telah menggunakan tanaman seperti tomat, jagung, melon, dan tembakau untuk mengekspresikan protein RABV G guna menciptakan vaksin yang dapat dimakan [97, 98]. Vaksin ini dapat menghasilkan respons VNA yang terdeteksi dan perlindungan terhadap tantangan pada tikus setelah dikonsumsi. Meskipun vaksin jenis ini berpotensi diproduksi dengan biaya rendah, terdapat beberapa kekurangan yang jelas, termasuk imunogenisitas, stabilitas vaksin dalam buah, degradasinya di perut, dan respons imun usus. Oleh karena itu, meskipun vaksin yang dapat dimakan adalah pilihan yang menarik, masih diperlukan banyak penelitian sebelum dapat diandalkan untuk menggantikan suntikan rabies.

 

Selain vaksin protein, sejumlah epitop antigenik dari protein RABV G telah diidentifikasi, dan peptida sintetis yang meniru epitop protein G ini telah diproduksi dan digunakan sebagai vaksin. Hewan yang diinokulasi dengan peptida sintetis yang mencakup daerah antigenik G5 virus rabies menghasilkan antibodi dengan aviditas kuat tetapi potensi penetralan yang rendah.[99] Mimotop peptida dari glikoprotein virus rabies (RABVG site III mimotope (C-KRDSTW-C)) ditemukan lebih imunogenik pada tikus dan memberikan konsep baru vaksin rabies untuk masa depan [100]. Namun, vaksin yang dibuat dari protein atau peptida bersifat sedang imunogenik; glikoprotein virus dengan berat molekul 65 kDa disintesis, membentuk trimer, dan mengalami N-glikosilasi sedang di salah satu dari tiga lokasi yang mungkin. Glikoprotein virus rabies harus melipat dengan benar ke dalam bentuk trimerik alaminya agar dapat menghasilkan antibodi yang dapat menetralkan virus, tetapi ini masih menjadi tantangan bagi vaksin protein [37].

 

9.5. Vaksin Rabies Berbasis Vektor Viral Parenteral

 

Vaksin vektor viral dikembangkan dengan mengkloning antigen yang diinginkan ke dalam virus heterolog yang akan berfungsi sebagai molekul pembawa untuk mentransfer gen asing ke dalam sel inang, sehingga mengarah pada ekspresi selanjutnya [101]. Vektor viral pertama yang mengekspresikan gen asing dibuat dari Simian Virus 40 pada tahun 1972; sejak saat itu, berbagai virus, termasuk adenovirus, poxvirus, herpesvirus, virus stomatitis vesikular, dan lentivirus, telah dimodifikasi secara genetik untuk membuatnya tidak patogenik dan direkayasa menjadi vektor vaksin yang berpotensi merangsang sistem kekebalan terhadap protein yang dihasilkan dari transgen yang dikodekan. Respons imun seluler spesifik antigen dan tingkat antibodi yang kuat dan tahan lama yang dipicu oleh vektor viral dengan adjuvan internal mereka menjadikannya kandidat yang lebih potensial dalam pengembangan vaksin rabies. Beberapa peneliti menargetkan berbagai vektor viral untuk ekspresi glikoprotein virus rabies. Vaksinasi RVG dengan virus adeno-asosiasi rekombinan (AAV) meningkatkan tingkat perlindungan Rabies Virus Neutralizing Antibodies (RVNAs), dengan vaksinasi intramuskular tunggal [102]. Beberapa spesies Adenovirus (Ads) telah digunakan secara ekstensif sebagai vektor vaksin dalam pengembangan vaksin karena menghasilkan respons imun humoral dan seluler yang kuat [103, 104]. Secara khusus, vektor Ad simian yang mengkodekan glikoprotein virus rabies telah diuji untuk vaksinasi rabies. Klon glikoprotein virus rabies berbasis vektor adeno simian AdC68-rab meningkatkan titer RVNA pada tikus ke tingkat di atas standar yang disarankan empat minggu setelah vaksinasi melalui injeksi intramuskular [105]. Satu kali suntikan intramuskular ChAd155-RG, yang didasarkan pada vektor Ad simpanse grup C, menghasilkan titer RVNA tinggi dan imunitas seluler yang lebih kuat pada tikus, serta RVNA yang sangat cepat, bertahan lama, kuat, dan tahan lama pada kelinci, dan tingkat perlindungan RVNA hingga 48 minggu pada monyet. Efek ini sebanding dengan yang dihasilkan oleh satu, dua, atau bahkan tiga dosis vaksin Rabipur [106]. ChAdOx2 RabG dengan serotipe Ad simpanse 68 (AdC68) dan serotipe Ad manusia 5 (AdHu5) terbukti lebih imunogenik dan menghasilkan tingkat RVNA yang tinggi hanya dengan satu dosis IM in vivo dibandingkan dengan serotipe Ad lainnya. Respon imun protektif yang dihasilkan oleh Canine adenovirus 2 rabies virus glycoprotein (CAV2-RVG) melalui imunisasi intramuskular, intranasal, dan oral pada tikus dan anjing cukup mengesankan [107, 108]. Selanjutnya, vektor virus lainnya, termasuk Parapoxvirus Orf virus (ORFV), vesicular stomatitis virus (VSV) [110,111], raccoon poxvirus (RCN) [112], flavivirus satu siklus [113], Newcastle disease virus (NDV) [114], dan bovine herpes virus tipe I (BHV-1) [115] yang mengekspresikan glikoprotein virus rabies, efektif menginduksi RVNA dan tetap menjadi kandidat vaksin yang kuat. Namun, kendala umum dengan vektor virus adalah kekebalan yang sudah ada pada inang terhadap vektor tertentu yang dapat mengurangi efektivitas vaksin. Hal ini dapat diatasi dengan menggunakan vektor alternatif yang memiliki prevalensi serotipe rendah pada inang. Selain itu, pengembangan vaksin rabies berbasis vektor virus telah maju sebagai kandidat vaksin rabies oral dan alat dasar untuk mengurangi beban virus rabies pada spesies satwa liar di seluruh dunia.

 

Vaksin Rabies Oral (ORV)

 

Vaksinasi hewan adalah cara efektif untuk melindungi kesehatan masyarakat melalui pengurangan patogen zoonosis. Sejarah panjang pengembangan vaksin rabies telah menghasilkan banyak vaksin yang efektif untuk strategi vaksinasi parenteral. Namun, vaksinasi satwa liar atau hewan peliharaan yang berkeliaran bebas, seperti anjing liar, melalui vaksinasi parenteral tetap menjadi tantangan. Oleh karena itu, kebutuhan akan strategi vaksinasi alternatif untuk memberantas rabies telah mendorong pengembangan vaksin rabies oral (ORV). Vaksin oral diberikan secara oral menggunakan umpan yang dirancang dengan kantong berisi suspensi vaksin yang dibungkus dalam bahan umpan yang disukai, seperti usus hewan, kepala ayam, telur, dan bahan berbasis makanan anjing, tergantung pada spesies target. Setelah dikonsumsi, gerakan mengunyah menyebabkan kantong tersebut berlubang, melepaskan suspensi vaksin ke dalam mulut. Di sini, vaksin sebagian besar diserap oleh tonsil palatina di mana, setelah sedikit replikasi di lokasi masuk, memicu respons imun protektif.[116] Saat ini, tersedia dua jenis ORV komersial berlisensi untuk imunisasi terhadap rabies satwa liar. Vaksin ini adalah vaksin hidup yang dimodifikasi (MLV) dan vaksin berbasis vektor (VBV). Pada vaksin hidup yang dimodifikasi, virus rabies dimodifikasi untuk mengurangi virulensinya, tetapi tetap mampu memicu sistem kekebalan untuk menghasilkan antibodi.[117] Pada vaksin berbasis vektor, gen yang mengkode glikoprotein antigenik dimasukkan ke dalam vektor virus, yang dapat memicu respons imun dengan mengekspresikan glikoprotein virus rabies yang dimasukkan saat imunisasi. Sejak tahun 1978, vaksin rabies oral (ORV) telah berhasil digunakan untuk mengendalikan rabies hewan liar di seluruh Eropa dan AS.

 

10.1. Vaksin Rabies Oral Virus Hidup yang Dimodifikasi

 

Pengembangan vaksin rabies oral virus hidup yang dimodifikasi dimulai sejak tahun 1935, yang berasal dari strain virus rabies Street Alabama Dufferin (SAD). Strain SAD ini diisolasi dari kelenjar ludah anjing yang terjangkit rabies di AS. Serial passaging selanjutnya dari strain SAD pada inang yang tidak biasa, seperti tikus, embrio ayam, dan garis sel non-neural, termasuk sel ginjal hamster dan sel ginjal babi, dengan stabilisasi panas lebih lanjut, telah menghasilkan strain SAD-Bern, Evelyn Rokitnicki Abelseth (ERA), dan SAD-B19 yang sangat tereduksi. Strain-strain ini merupakan vaksin ORV generasi pertama yang menjadi kunci dalam pengendalian rabies satwa liar di Eropa dan telah banyak digunakan di seluruh dunia.[118] Selanjutnya, untuk meningkatkan profil keamanan ORV generasi pertama, mutasi selektif dilakukan pada strain virus rabies SAD menggunakan antibodi monoklonal, yang menghasilkan ORV generasi kedua, strain SAD VA1, SAG1, atau SAG2.[110] Strain SAG2, mutan ganda avirulen, diisolasi dari strain SAD-Bern virus rabies pada tahun 1990 melalui dua mutasi berurutan yang mempengaruhi residu asam amino 333 dari glikoprotein. Strain SAG2 terbukti sebagai versi yang lebih baik dari SAG1 karena keamanannya dan stabilitas genetiknya.[120.121] Meskipun vaksin ini berhasil mengurangi tingkat rabies satwa liar, pengendalian rabies yang efektif masih diperlukan di antara populasi anjing liar yang besar di sebagian besar negara endemik rabies. Ini membutuhkan kandidat vaksin yang lebih aman yang dapat melengkapi vaksin parenteral dalam kampanye vaksinasi massal anjing, yang tetap menjadi hal yang penting.[23] Oleh karena itu, teknologi modern genetika balik telah memfasilitasi mutagenesis terarah di lokasi tertentu pada genom virus rabies yang telah mengarah pada pengembangan MLV generasi ketiga. Saat ini, SPBN GAS GAS dan ERA G333 adalah dua vaksin generasi ketiga yang sedang diuji untuk digunakan pada kanid.[122,123] Meskipun kedua strain vaksin berasal dari strain induk yang berbeda, keduanya memiliki mutasi yang sama pada residu asam amino 333 dari G-protein.[118] Keamanan dan imunogenisitas MLV yang ada telah lebih ditingkatkan oleh penghapusan dan penyisipan yang ditargetkan di lokasi tertentu. Namun, kekhawatiran utama dengan MLV adalah kemungkinan virus vaksin mengalami mutasi acak, yang dapat menyebabkan mereka kembali menjadi bentuk virulen yang menyebabkan rabies.[124] Inokulasi intrakranial MLV generasi pertama dilaporkan menyebabkan rabies pada tikus yang mengalami imunosupresi.[125] Selain itu, dilaporkan terdapat 11 kasus rabies terkait vaksin pada rubah yang mengalami imunosupresi dan spesies non-target di Eropa setelah vaksinasi dengan MLV generasi pertama, yang terjadi pada 1 dari 48 juta dosis umpan yang didistribusikan. Sebaliknya, tidak ada kasus lapangan yang dilaporkan terkait hal ini dengan vaksin generasi kedua dan ketiga.

 

Keberhasilan uji lapangan dalam menghasilkan respons imun pada anjing liar menggunakan SPBN GASGAS cukup mengesankan di beberapa negara berkembang. Menggunakan umpan oral dengan SPBN GASGAS yang disuplai di Thailand untuk 2444 anjing, yang tidak dapat dijangkau untuk vaksinasi parenteral, sekitar 65,6% dari anjing liar di lokasi tersebut berhasil diimunisasi secara oral [126]. Sebuah evaluasi terhadap respons imun pada anjing terhadap vaksin rabies oral melalui vaksinasi massal anjing di bawah kondisi lapangan di Haiti mengungkapkan respons imun pada 78% anjing yang mengonsumsi umpan tersebut [127]. Dengan memantau respons imun dalam hal serokonversi selama hingga 56 hari setelah vaksinasi pada anjing liar yang berkeliaran bebas di Namibia, imunogenisitas dari strain vaksin yang sangat terattenuasi SPBN GASGAS berhasil melindungi sekitar 79% dari anjing-anjing tersebut melalui vaksinasi oral [128]. Penyelidikan ini mengonfirmasi imunogenisitas dari strain vaksin SPBN GASGAS dan kemampuan Vaksinasi Oral (ORV) untuk mengurangi rabies yang ditularkan oleh anjing di negara-negara berkembang. Selain itu, kelayakan penggunaan distribusi umpan oral untuk menjangkau anjing liar di Goa, India, dalam vaksinasi rabies telah dibuktikan secara eksperimental, dan penelitian ini mendukung pandangan bahwa ORV akan menjadi pendekatan baru yang menjanjikan peningkatan cakupan vaksinasi pada anjing. Selain itu, hal ini menunjukka ORV di India sebagai pelengkap program vaksinasi massal parenteral pada anjing karena kelayakan dan kemampuannya menjangkau populasi anjing liar di negara tersebut.[129]

 

10.2. Vaksin Rabies Oral Berbasis Vektor Virus

 

Pengembangan vaksin berbasis vektor membantu mengatasi risiko yang terkait dengan MLV (vaksin hidup yang dimodifikasi). Vaksin rabies berbasis vektor virus ini lebih menjanjikan untuk digunakan pada hewan maupun manusia.[113, 130, 131] Berbagai upaya penelitian telah menghas efektif. Sebuah virus vaksin rekombinan yang mengekspresikan glikoprotein dari virus rabies diuji sebagai vaksin rabies oral dalam bentuk umpan dan terbukti dapat menginduksi kekebalan pelindung pada beberapa hewan liar.[132] Beberapa spesies adenovirus telah banyak digunakan sebagai vektor vaksin dangan vaksin karena menghasilkan respons imun yang kuat.[103,104] Pengembangan umpan vaksin oral berbasis adenovirus tipe 5 manusia yang replikatif (Aan glikoprotein rabies (ONRAB) cukup menjanjikan dalam mengendalikan rabies pada satwa liar di Amerika Utara.[133] Efikasi dan keamanan vektor adenoviral yang replikasi-defektif generasi pertama ditingkatkan dibandingkan d adenoviral generasi kedua yang replikasi-kompeten.[130] Beberapa laporan menunjukkan bahwa glikoprotein virus rabies yang diekspresikan dalam vektor AdHu5 yang E1-dihapus leban pada tikus dan anjing.[134,135] Namun, kekebalan yang sudah ada sebelumnya dengan antibodi penetralisir virus (VNA) yang terdeteksi terhadap AdHu5 pada 45-90% pn dapat melemahkan respons imun yang dihasilkan oleh vektor AdHu5.[130] Untuk mengatasi masalah ini, saat ini, serotipe langka adenovirus manusia atau adenovirus spesies non-manusia, seperti simpanse dan anjing, telah digunonstruksi vektor dan pengembangan vaksin.[104] Pemberian melalui rute intranasal atau oral dari vaksin berbasis adenovirus serotipe 68 rekombinan simpanse (AdC68) yang mengekspresikan glikoprotein virus rabiesn VNA yang efektif pada tikus baru lahir.[136] Efikasi vaksin ini terbukti cukup menjanjikan pada individu muda yang terpapar sebelumnya melalui rute oral. Selain itu, vaksin rabies berbasis vektor adenovirus simpanse te melindungi anjing dari tantangan infeksi virus rabies yang mematikan.[137] Studi mencatat respons imun pelindung dengan glikoprotein virus rabies adenovirus anjing 2 (CAV2-RVG) melalui imunisasi oral pada tikus dan anjing.[107, 108]

 

Saat ini, dua Vaksin Berbasis Vektor (VBV) yang memiliki lisensi komersial tersedia untuk mengendalikan rabies satwa liar, yaitu RABORAL V-RG, yang menggunakan vektor virus vaksin rekombinan,[24] dan ONRAB, yang menggunakan vektor adenovirus manusia rekombinan.[25] Salah satu isu utama dalam penggunaan VBV adalah kemungkinan infeksi yang disebabkan oleh virus vektor itu sendiri. Penelitian menunjukkan bahwa paparan terhadap vaksin vektor virus vaksin rekombinan dapat menyebabkan peradangan kulit yang parah pada manusia dan komplikasi pada individu hamil dan yang memiliki sistem kekebalan yang lemah di AS,[138] tetapi kekhawatiran publik seperti itu belum dilaporkan terkait vektor adenoviral. Selain itu, potensi gangguan terhadap kekebalan yang sudah ada terhadap vektor merupakan kekhawatiran utama dengan vaksin vektor, karena hal ini menghalangi pembentukan respons imun yang memadai terhadap rabies.[25] Namun, vektor virus saat ini telah direkayasa sedemikian rupa untuk menghindari kekebalan yang sudah ada dan menjadikannya sebagai sistem pengiriman yang lebih potensial.[139] Kisah sukses dari vaksin rabies oral (ORV) dalam pengendalian rabies satwa liar yang efektif dan potensi mereka untuk memicu kekebalan dalam studi eksperimental menyoroti efisiensi ORV sebagai vaksinasi strategis alternatif untuk melengkapi vaksinasi parenteral dalam mengendalikan rabies di negara-negara berkembang.

 

Detail dari penelitian terkini dalam pengembangan berbagai vaksin serta kelebihan dan kekurangan dari berbagai vaksin dirangkum dalam Tabel 1 dan Tabel 2.

Tabel 1. Status penelitian terkini vaksin rabies

 

* Vaccine name was not designated

 

Tabel 2. Kelebihan dan Kekurangan Vaksin Rabies Saat Ini

11. Vaksinasi Rabies Intradermal

 

Kemampuan vaksin untuk merangsang respons imun juga bergantung pada jalur inokulasi vaksin tersebut. Vaksinasi intradermal menyampaikan antigen ke ruang antara epidermis dan dermis. Ruang ini merupakan lokasi anatomi yang menguntungkan untuk stimulasi imun, karena lapisan dermis dan epidermis kulit merupakan sumber sel penyaji antigen yang melimpah, seperti sel Langerhans, sel dendritik dermal, dan makrofag dermal, yang diketahui berperan dalam respons imun yang diinduksi oleh vaksin. Selain itu, kulit dianggap sebagai target vaksinasi yang diinginkan. Jaringan luas kapiler darah dan arteri limfatik di dermis juga memudahkan leukosit dan sel dendritik untuk bergerak dari kulit ke organ limfoid sekunder. Sebagian besar vaksin rabies memberikan jumlah antigen yang lebih tinggi melalui jalur intramuskular (IM). Oleh karena itu, penggunaannya terbatas di banyak negara yang kurang berkembang karena harga antigen ini dan kadang-kadang kelangkaannya. Dosis yang lebih rendah (biasanya 10% atau 20% dari dosis standar antigen) yang diberikan secara intradermal (ID) mampu memicu reaksi imunologis yang mirip dengan yang ditimbulkan oleh dosis standar yang diberikan secara IM.[158]

 

Di Amerika Serikat, imunisasi pra-paparan dengan metode ID vaksin rabies pertama kali disetujui pada tahun 1986, diikuti oleh pengembangan pendekatan imunisasi intradermal multi-situs yang hemat biaya. Pemberian vaksin rabies modern secara intradermal untuk profilaksis pasca-paparan direkomendasikan oleh Komite Ahli WHO pada tahun 1991.[26] Menurut tinjauan WHO, vaksin rabies kultur sel (dengan potensi >2,5 IU per dosis intramuskular) yang diberikan melalui jalur ID untuk profilaksis pasca-paparan (PEP) atau PrEP memiliki efikasi yang setara atau lebih tinggi dibandingkan dengan vaksin yang sama yang diberikan melalui jalur IM pada manusia.[159] Demikian pula, efektivitas vaksin profilaksis pra-paparan rabies yang diberikan dengan berbagai metode pada sapi menunjukkan tingkat antibodi yang signifikan yang menetralkan virus rabies (RVNA) melalui jalur ID.[157] Protokol pengobatan gabungan untuk infiltrasi luka rabies dengan eRIG dan regimen PEP selama 5 hari (0, 3, 7, 14, dan 28) melalui jalur intradermal terbukti menyelamatkan nyawa pada manusia, sapi, dan anjing, dan jalur ID terbukti lebih ekonomis karena efek penghematan dosisnya.[155] Begitu pula, pemberian vaksin rabies kultur sel inactivated melalui SC, IM, dan ID ditemukan aman dan imunogenik.[156] Uji klinis ini memberikan keyakinan untuk mempromosikan pemberian vaksin rabies secara intradermal di daerah di mana akses ke PEP terhambat oleh biaya, dan ID harus didorong sebagai strategi imunisasi alternatif yang hemat biaya dan hemat dosis dibandingkan dengan imunisasi intramuskular.

 

12. Kekebalan terhadap Virus Rabies: Infeksi Alami vs. Vaksin Rabies

 

12.1. Kekebalan terhadap Infeksi Virus Rabies Alami, termasuk Respons Humoral dan Seluler

 

Virus Rabies (RABV) biasanya menginfeksi sistem saraf (NS). Namun, pada tahap awal infeksi, partikel virus “disuntikkan” ke dalam otot dan kulit, dan sebelum virus memasuki sistem saraf, ia mungkin menyebabkan reaksi imunologis di perifer [160]. Setelah RABV memasuki sistem saraf, kemungkinan besar tidak akan menyebabkan respons imun adaptif primer, karena sistem saraf merupakan lokasi yang memiliki kekebalan khusus karena kekurangan sel penyaji antigen profesional dan jaringan limfoid. Namun, setelah memasuki sistem saraf, RABV menyebabkan respons imun bawaan awal setelah infeksi yang ditandai dengan respons antiviral, chemo-attractive, dan inflamasi, yang semuanya melibatkan neuron yang terinfeksi [161]. Karena efikasi imun yang tidak memadai di sistem saraf, RABV menggunakan taktik imun-subversif untuk menghindari respons imun tuan rumah, sehingga berhasil beradaptasi dengan sistem tuan rumah. Respons imun seluler (CMI) memainkan peran penting dalam menghilangkan invasi virus dan menghambat masuknya RABV ke dalam sistem saraf perifer (PNS) pada awal infeksi. Namun, penghalang darah-otak merupakan kendala signifikan bagi respons CMI. Selain itu, ekspresi molekul HLA-G pada sel neuronal melalui produksi interferon beta menghasilkan transformasi sel T manusia yang naive menjadi sel T regulator, dan produksi sitokin penghambat, seperti interleukin 10, menyebabkan imunodepresi seluler. [162] Selain itu, sistem imun humoral merupakan mekanisme pertahanan kunci terhadap virus rabies. Antibodi netralisasi dapat menghalangi infektivitas virus dan menghentikan virus dari melekat pada sel neuronal pada individu yang memiliki kekebalan. Menurut penelitian, hewan yang tidak divaksinasi ketika terpapar RABV tidak dapat memproduksi tingkat antibodi netralisasi yang optimal, yang memungkinkan virus mencapai sistem saraf dan menampakkan diri sebagai penyakit. [162, 163]

 

12.2. Kekebalan terhadap Vaksin Rabies, termasuk Respons Humoral dan Seluler

 

Fungsi paling penting dari vaksinasi rabies adalah untuk menginduksi respons antibodi yang persisten melalui aktivasi limfosit T CD4+. Meskipun umumnya diyakini bahwa sel T sitotoksik lebih penting daripada antibodi untuk menghilangkan infeksi virus dari jaringan, rabies merupakan pengecualian. Selain itu, aktivasi sel T CD8+ menghasilkan reaksi patogenik yang secara klinis terkait dengan kelumpuhan. Berdasarkan risiko tinggi menghasilkan respons CD8 yang kuat dan berbahaya di sistem saraf, pengetahuan ini seharusnya umumnya mencegah penggunaan vaksin hidup, seperti vaksin DNA atau virus rekombinan, sebagai imunisasi pasca-paparan [164]. Namun, karena efektivitas imunisasi hidup, vaksin generasi baru ini tetap cocok untuk regimen vaksinasi pra-paparan. Pilihan terbaik untuk mempertahankan integritas sistem saraf adalah vaksin inactivated pasca-paparan, yang terutama mempromosikan aktivasi sel B dengan bantuan sel T CD4+. Karena imunisasi pasca-paparan membentuk respons imun di organ sekunder perifer, mereka kemungkinan memberikan perlindungan. Limfosit yang diaktifkan, plasmocytes yang menghasilkan CD4, mengeluarkan antibodi yang dapat masuk ke dalam parenkim jaringan saraf dan menetralkan virus [165].

 

13. Pendekatan Terapeutik untuk Rabies Menggunakan Vaksin dan Antibodi

 

13.1. Terapi Berbasis Vaksin Rabies

 

Ribuan orang meninggal akibat rabies setiap tahun, dengan sebagian besar kematian terjadi di Asia dan Afrika. Namun, rabies dapat dicegah melalui vaksinasi jika profilaksis pasca-paparan (PEP) diberikan dengan cepat dan efektif. Paparan rabies secara umum dibagi menjadi tiga kategori: I, II, dan III, tergantung pada sifat interaksi dengan hewan rabies yang mungkin. Setiap paparan yang dianggap memberikan risiko rabies memerlukan PEP, yang meliputi vaksinasi, pencucian dan disinfeksi menyeluruh dari semua luka gigitan dan goresan, infiltrasi luka lokal dengan RIG (untuk kategori III saja), dan perawatan lokal yang cepat terhadap semua luka gigitan dan goresan [166]. Tujuan utama PEP adalah untuk menghentikan timbulnya rabies klinis setelah paparan. Regimen PEP umumnya mengikuti pemberian globulin imun rabies manusia (HRIG) hanya sekali, diikuti dengan vaksinasi pertama pada hari 0 pengobatan dan tiga imunisasi berikutnya yang diberikan pada hari 3, 7, dan 14, sehingga memastikan adanya antibodi netralisasi virus (VNA) yang cukup dan memberikan perlindungan terhadap rabies. Dalam kasus orang dengan sistem imun yang terganggu, vaksinasi kelima pada hari 28 dianjurkan dan serokonversi diuji dari 7 hingga 14 hari setelah penyelesaian regimen PEP. Hanya dua dosis booster vaksin rabies, yang diberikan pada hari 0 dan 3, yang harus diberikan kepada pasien yang sebelumnya telah menerima profilaksis rabies pra-paparan atau pasca-paparan. Orang yang telah divaksinasi sebelumnya tidak boleh menerima HRIG [166]. Sesuai dengan norma WHO, titer VNA lebih dari 0,5 unit internasional per mL serum dianggap memadai untuk memberikan perlindungan baik pada manusia maupun hewan.

 

13.2. Terapi Rabies Berbasis Rabies Immune Globulin (RIG)

 

Rabies Immune Globulin (RIG) adalah antibodi poliklonal atau monoklonal yang secara spesifik menargetkan epitope protein G, yang terbukti sangat efektif dalam menetralkan RABV sebelum virus masuk ke sistem saraf pusat (CNS) [167]. Ini akan memberikan antibodi segera sampai tubuh merespons vaksin dengan memproduksi antibodi secara aktif. RIG tersedia dalam dua jenis, yaitu human rabies immunoglobulin (HRIG) dan equine rabies immunoglobulin (ERIG), dan secara umum, dosis yang digunakan adalah 20 IU/kg berat badan untuk HRIG dan 40 IU/kg untuk ERIG untuk menetralkan virus rabies [168]. Umumnya, area di sekitar lokasi luka harus disuntikkan dengan RIG, idealnya pada hari paparan atau hingga 7 hari setelah dosis vaksin awal, yang membantu dalam netralisasi awal virus di sambungan neuromuskular. RIG tetap menjadi komponen penting dari profilaksis pasca-paparan (PEP) karena menawarkan kekebalan pasif pada tahap kritis sebelum inang mengembangkan kekebalan aktif terhadap imunisasi. Sayangnya, antibodi ini terbatas dalam melintasi penghalang darah-otak (BBB) yang istimewa untuk melawan infeksi virus setelah virus memasuki CNS. Namun, penelitian menunjukkan bahwa efektivitas pemberian RIG secara bersamaan dengan agen peningkat permeabilitas BBB, seperti sitokin MCP-1 atau larutan hiperosmotik arabinosa hipertonik, melalui injeksi intravena, secara kritis memungkinkan antibodi untuk melintasi BBB dan masuk ke sistem saraf pusat, menetralkan RABV dari CNS dan mencegah perkembangan rabies pada tikus dan tikus percobaan. Dengan demikian, pendekatan terapeutik seperti RIG dapat menjadi pilihan menjanjikan dalam pengobatan rabies [17,169].

 

13.3. Terapi Rabies Berbasis Small Interfering RNA (siRNA)

 

Sejenis molekul RNA beruntai ganda sekitar 21–23 bp, yang dikenal sebagai siRNA, juga disebut sebagai short interfering RNA atau silencing RNA, menekan ekspresi gen tertentu dengan mengurai mRNA setelah transkripsi melalui jalur RNAi. Penekanan gen berbasis siRNA pada gen target telah menjadi pilihan untuk pertahanan antiviral melawan banyak penyakit dan gangguan. Penelitian telah berfokus pada plasmid yang mengkode siRNA atau sistem berbasis vektor virus dari siRNA yang menargetkan gen RABV tertentu, yang telah disusun dan diuji untuk efikasi anti-rabies [170,171]. Secara khusus, siRNA berbasis vektor virus sering memberikan perlindungan signifikan terhadap tantangan RABV yang mematikan dan secara efektif menekan ekspresi gen yang terkait serta proliferasi RABV. Penelitian terbaru juga menyoroti bahwa siRNA dapat berfungsi sebagai pengganti RIG potensial untuk kemungkinan pengobatan RABV [172].

 

14. Prospek Masa Depan Vaksin Rabies

 

Kemajuan terbaru dalam pengembangan vaksin rabies telah menghasilkan alat menjanjikan untuk mencegah dan memberantas rabies. Namun, ada beberapa area yang perlu difokuskan di masa mendatang. Pengembangan vaksin yang baru ditemukan saat ini sangat dihargai; namun, pengembangan sistem pengiriman vaksin baru tetap menjadi area penelitian penting, yang akan membantu merumuskan langkah-langkah strategis yang efektif untuk memberantas penyakit ini. Kegagalan vaksin rabies karena potensi vaksin yang tidak memadai akibat paparan suhu yang tidak menguntungkan selama penyimpanan dan pengiriman sangat memerlukan penelitian tentang pengembangan vaksin rabies potensial yang dapat disimpan dan diangkut di luar rantai dingin biasa, yang pasti akan merevolusi distribusi vaksin dengan meningkatkan efektivitas, efisiensi, dan keterjangkauan pengiriman vaksin. Penelitian terbaru tentang teknologi termostabilisasi matriks gula (SMT) untuk vaksin berbasis vektor virus akan menjadi platform baru di masa depan untuk menghilangkan kebutuhan akan penyimpanan rantai dingin vaksin. Penjelajahan lebih lanjut untuk adjuvan baru (cPG, garam mangan koloid, BAFF, dll.) pasti akan menjadi pilihan yang menjanjikan dalam meningkatkan potensi vaksin anti-rabies yang tidak aktif. Kesempatan aplikasi untuk penciptaan vaksin multivalen sangat menjanjikan. Pengembangan vaksin berbasis vektor virus bivalen yang berhasil terhadap rabies dan distemper anjing akan memiliki potensi untuk mengendalikan kedua penyakit dengan satu kandidat vaksin, terutama di negara-negara berkembang. Selain itu, pengembangan vaksin di masa depan harus fokus pada menciptakan vaksin multivalen dengan efikasi perlindungan spektrum luas dengan mempertimbangkan anggota lain dari Lyssavirus, yang akan sangat efektif dalam mengurangi penyakit paling mematikan ini. Meskipun kualitas dan ketersediaan vaksin rabies dan RIG yang diproduksi dari kultur sel telah meningkat secara progresif, minat untuk menciptakan terapi antiviral tetap rendah, yang memerlukan penelitian tentang intervensi terapeutik potensial untuk aplikasi klinis, melalui obat-obatan antiviral potensial. Lebih banyak penelitian tentang vaksin rabies yang menggunakan small interfering RNA (siRNA) pada inang alami atau pengembangan terapi berbasis antibodi bi-spesifik (BsAb) untuk virus rabies memiliki lebih banyak opsi menjanjikan dalam aspek terapeutik rabies. Selain itu, meningkatkan vaksinasi pasca-paparan pada hewan dan mendefinisikan kembali rejimen vaksinasi untuk berbagai jenis vaksin tetap menjadi kebutuhan saat ini. Pengembangan lebih lanjut dari vaksin umpan imunogenik oral baru dan ditingkatkan pada inang target akan sangat dihargai dalam mengendalikan rabies, terutama pada populasi anjing liar di negara-negara berkembang melalui program vaksinasi massal anjing.

 

15. Kesimpulan

 

Saga dalam pengembangan vaksin anti-rabies dan jalur yang dilalui dalam pengembangan vaksin rabies dari Pasteur hingga era imunisasi modern telah mengalami banyak liku-liku. Namun, karya-karya perintis ini telah meletakkan dasar yang kuat untuk pengembangan vaksin yang berhasil guna mencegah kematian manusia dan mengurangi rabies pada anjing saat ini, dan dengan demikian sangat dihargai. Selain itu, peta jalan ke depan dalam pengembangan vaksin dengan teknologi ilmiah yang canggih untuk memanipulasi genom virus rabies dan pembawa vaksin baru pasti akan memberikan perkembangan luar biasa dalam penelitian vaksin di masa depan. Namun, kebutuhan mendesak bagi negara-negara endemik rabies yang ditularkan oleh anjing adalah untuk melaksanakan vaksinasi massal anjing dengan menggunakan vaksin parenteral untuk anjing peliharaan dan anjing komunitas yang mudah diakses, dilengkapi dengan vaksin oral untuk anjing liar yang sulit ditangkap. Pendekatan kombinasi ini dapat menjadikan Rencana Strategis Global untuk penghapusan kematian manusia akibat rabies yang ditularkan oleh anjing pada tahun 2030 menjadi kenyataan.

 

REFERENSI

1.       Bilal A. Rabies is a Zoonotic Disease: A Literature Review. Occup. Med. Health Aff. 2021;9:2.

2.       Walker P.J., Freitas-Astúa J., Bejerman N., Blasdell K.R., Breyta R., Dietzgen R.G., Fooks A.R., Kondo H., Kurath G., Kuzmin I.V., et al. ICTV Virus Taxonomy Profile: Rhabdoviridae 2022. J. Gen. Virol. 2022;103:10.

3.       Hampson K., Coudeville L., Lembo T., Sambo M., Kieffer A., Attlan M., Barrat J., Blanton J.D., Briggs D.J., Cleaveland S., et al. Estimating the global burden of endemic canine rabies. PLoS Negl. Trop. Dis. 2015;9:e0003709.

4.       Pastoret P.P., Kappeler A., Aubert M. European rabies control and its history. In: King A.A., Fooks A.R., Aubert M., Wandeler A.I., editors. Historical Perspective of Rabies in Europe and the Mediterranean Basin. OIE; Paris, France: 2004. pp. 337–347.

5.       Albertini A.A., Ruigrok R.W., Blondel D. Rabies virus transcription and replication. Adv. Virus Res. 2011;79:1–22.

6.       Wiktor T.J., Gyorgy E., Schlumberger D., Sokol F., Koprowski H. Antigenic properties of rabies virus components. J. Immunol. 1973;110:269–276.

7.       Badrane H., Tordo N. Host switching in lyssavirus history from the Chiroptera to the Carnivora orders. J. Virol. 2001;75:8096–8104.

8.       Rupprecht C.E., Willoughby R., Slate D. Current and future trends in the prevention, treatment and control of rabies. Expert Rev. Anti-Infect. Ther. 2006;4:1021–1038.

9.       Messenger S.L., Smith J.S., Rupprecht C.E. Emerging epidemiology of bat-associated cryptic cases of rabies in humans in the United States. Clin. Infect. Dis. 2002;35:738–747.

10.     Fooks A.R., Cliquet F., Finke S., Freuling C., Hemachudha T., Mani R.S., Müller T., Nadin-Davis S., Picard-Meyer E., Wilde H., et al. Rabies. Nat. Rev. Dis. Prim. 2017;3:17091.

11.     Sudarshan M.K., Madhusudana S.N., Mahendra B.J., Rao N.S., Ashwath N.D.H., Abdul Rahman S. Assessing the burden of human rabies in India: Results of a national multi-center epidemiological survey. Int. J. Infect. Dis. 2007;11:29–35.

12.     Isloor S., Marissen W.E., Veeresh B.H., Nithinprabhu K., Kuzmin I.V., Rupprecht C.E., Satyanarayana M.L., Deepti B.R., Sharada R., Neelufer M.S., et al. First case report of rabies in a wolf (Canis lupus pallipes) from India. J. Vet. Med. Res. 2014;1:1012.

13.     Tarantola A., Tejiokem M.C., Briggs D.J. Evaluating new rabies post-exposure prophylaxis (PEP) regimens or vaccines. Vaccine. 2019;37:88–93.

14.     El-Sayed A. Advances in rabies prophylaxis and treatment with emphasis on immunoresponse mechanisms. Int. J. Vet. Sci. Med. 2018;6:8–15.

15.     Nandi S., Kumar M. Development in Immunoprophylaxis against Rabies for Animals and Humans. Avicenna J. Med. Biotechnol. 2010;2:3–21.

16.     Zhang W., Cheng N., Wang Y., Zheng X., Zhao Y., Wang H., Wang C., Han Q., Gao Y., Shan J., et al. Adjuvant activity of PCP-II, a polysaccharide from Poria cocos, on a whole killed rabies vaccine. Virus Res. 2019;270:197638. doi: 10.1016/j.virusres.2019.06.001.

17.     Zhu S., Guo C. Rabies Control and Treatment: From Prophylaxis to Strategies with Curative Potential. Viruses. 2016;8:279.

18.     Shuai L., Feng N., Wang X., Ge J., Wen Z., Chen W., Qin L., Xia X., Bu Z. Genetically modified rabies virus ERA strain is safe and induces long-lasting protective immune response in dogs after oral vaccination. Antivir. Res. 2015;121:9–15.

19.     Yang D.K., Kim H.H., Choi S.S., Kim J.T., Jeong W.H., Song J.Y. Oral immunization of mice with recombinant rabies vaccine strain (ERAG3G) induces complete protection. Clin. Exp. Vaccine Res. 2015;4:107–113.

20.     Ertl H.C.J. New Rabies Vaccines for Use in Humans. Vaccines. 2019;7:54.

21.     Perrin P., Jacob Y., Aguilar-Setien A., Loza-Rubio E., Jallet C., Desmezieres E., Aubert M., Cliquet F., Tordo N. Immunization of dogs with a DNA vaccine induces protection against rabies virus. Vaccine. 1999;18:479–486.

22.     Benmaamar R., Astray R.M., Wagner R., Pereira C.A. High-level expression of rabies virus glycoprotein with the RNA-based semliki forest virus expression vector. J. Biotechnol. 2009;139:283–290.

23.     Yale G., Lopes M., Isloor S., Head J.R., Mazeri S., Gamble L., Dukpa K., Gongal G., Gibson A.D. Review of oral rabies vaccination of dogs and its application in India. Viruses. 2022;14:155.

24.     Maki J., Guiot A.L., Aubert M., Brochier B., Cliquet F., Hanlon C.A., King R., Oertli E.H., Rupprecht C.E., Schumacher C., et al. Oral vaccination of wildlife using a vaccinia-rabies-glycoprotein recombinant virus vaccine (RABORAL V-RG^®): A global review. Vet. Res. 2017;48:57.

25.     Brown L., Rosatte R., Fehlner-Gardiner C., Ellison J., Jackson F., Bachmann P., Taylor J., Franka R., Donovan D. Oral vaccination and protection of striped skunks (Mephitis mephitis) against rabies using ONRAB^® Vaccine. 2014;32:3675–3679.

26.     Gongal G., Sampath G. Introduction of intradermal rabies vaccination—A paradigm shift in improving post-exposure prophylaxis in Asia. Vaccine. 2019;37:A94–A98.

27.     Nagarajan E., Rupprecht C.E. History of rabies and rabies vaccines. In: Ertl H.C.J., editor. Rabies and Rabies Vaccines. Springer; Philadelphia, PA, USA: 2020. pp. 11–44.

28.     Pasteur L., Chamberland C.E., Roux E. Methode pour prevenir la rage après morsue (in French) C. R. Acad. Sci. 1885;101:765–774.

29.     Watson E.M. The negri bodies in rabies. J. Exp. Med. 1913;17:29–42.

30.     Wu X., Smith T.G., Rupprecht C.E. From brain passage to cell adaptation: The road of human rabies vaccine development. Expert Rev. Vaccines. 2011;10:1597–1608.

31.     Sureau P. Rabies vaccine production in animal cell cultures. Adv.Biochem.Engin./Biotechnol. 1987;34:111–128.

32.     Fermi C. Über die ImmunisierunggegenWutkrankheit (in German) Z. Hyg. Infectionskrankh. 1908;58:233–276.

33.     Semple D. The preparation of a safe and efficient antirabic vaccine. Sci. Mem. Med. Sanit Dept India. 1911;44:1–31.

34.     Svet-Moldavskij G.J., Andjaparidze O.G., Unanov S.S., Karakajumcan M.K., Svet-Moldavskaja I.A., Mucnik L.S., Hieninson M.A., Ravkina L.I., Mtvarelidze A.A., Volkova O.F., et al. An allergen-free antirabies vaccine. Bull. World Health Organ. 1965;32:47–58.

35.     Fuenzalida E., Palacios R., Borgono J.M. Anti-rabies antibody responses in man to vaccine made from infected sucklingmouse brains. Bull. World Health Organ. 1964;30:431–436.

36.     Bonito R.F., de Oliveira N.M., Nishioka S.D.A. Adverse reactions associated with a Fuenzalida-Palacios rabies vaccine: A quasiexperimental study. Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 2004;37:7–9.

37.     Vijayakumar K., Jose K.R. History, evolution and newer perspectives of rabies vaccines. J. Vet. Anim. Sci. 2021;52:211–221.

38.     Leach C.N., Johnson H.N. Human rabies, with special reference to virus distribution and titer. Am. J. Trop.Med. Hyg. 1940;20:335–340.

39.     Koprowski L., Cox H.R. Studies on chick embryo adapted rabies virus: I. Culture characteristics and pathogenicity. J. Immunol. 1948;60:533–554. doi: 10.4049/jimmunol.60.4.533.

40.     Fox J.P., Koprowski H., Conwell D.P., Black J., Gelfand H.M. Study of antirabies immunization of man. Observations with HEP Flury and other vaccines, with and without hyperimmune serum, in primary and recall immunizations. Bull. Org. Mond. Sante Bull. World Health Org. 1957;17:869–904.

41.     Vodopija I., Clarke H.F. Human vaccination against rabies. In: Baer G.M., editor. The Natural History of Rabies. 2nd ed. CRC Press; Boca Raton, FL, USA: 1991. pp. 571–595.

42.     Koprowski H.I., Black J.A., Nelsen D.J. Studies on chick-embryo-adapted rabies virus. J. Immunol. 1954;72:79–106.

43.     Rupprecht C.E., Hanlon C.A., Hemachudha T. Rabies reexamined. Lancet Infect. Dis. 2002;2:327–343.

44.     Stoel G. Symbiose du virus de la rage avec les cultures cellulaires. Comp. R. Soc. Biol. Fil. 1930;104:851–852.

45.     Wiktor T.J., Clark H.F. Growth of rabies virus in cell culture. In: Baer G.M., editor. The Natural History of Rabies. Academic Press; New York, NY, USA: 1975. pp. 155–179.

46.     Plotz H., Reagan R. In vitro cultivation of the street virus of rabies. Science. 1942;23:102–104.

47.     Kissling R.E. Growth of rabies virus in non-nervous tissue culture. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1958;98:223–225.

48.     Fenje P. Propagation of rabies virus in cultures of hamster kidney cells. Can. J. Microbiol. 1960;6:479–784.

49.     Kissling R.E., Reese D.R. Anti-rabies vaccine of tissue culture origin. J. Immunol. 1963;91:362–368.

50.     Abelseth M.K. Propagation of Rabies Virus in Pig Kidney Cell Culture. Can. Vet. J. 1964;5:84–87.

51.     Kondo A. Growth characteristics of rabies virus in primary chick embryo cells. Virology. 1965;27:199–204.

52.     Wiktor T.J., Sokol F., Kuwert E., Koprowski H. Immunogenicity of concentrated and purified rabies vaccine of tissue culture origin. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1969;131:799–805.

53.     Hayflick L., Moorhead P.S. The serial cultivation of human diploid cell strains. Exp. Cell Res. 1961;25:585–621.

54.     Jacobs J.P., Jones C.M., Baille J.P. Characteristics of a human diploid cell designated MRC-5. Nature. 1970;227:168–170.

55.     Lavender J.F., Van Frank R.M. Zonal-centrifuged purified duck embryo cell culture rabies vaccine for human vaccination. Appl. Microbiol. 1971;22:358–365.

56.     Barth R., Gruschkau H., Bijok U., Hilfenhaus J., Hinz J., Milcke L., Moser H., Jaeger O., Ronneberger H., Weinmann E. A new inactivated tissue culture rabies vaccine for use in man. Evaluation of PCEC-vaccine by laboratory tests. J. Biol. Stand. 1984;12:29–46.

57.     Centers for Disease Control and Prevention Notice to readers availability of new rabies vaccine for human use. Morb. Mortal. Wkly. Rep. 1998;47:12–19.

58.     Bernard K.W., Smith P.W., Kader F.J., Moran M.J. Neuro Paralytic illness and Human Diploid Cell Rabies Vaccine. J. Am. Med. Assoc. 1982;248:3136–3138.

59.     Roumiantzeff M., Ajjan N., Branche R., Fournier P., Montagnon B., Trotemann P., Vincent-Falquet J.C. Rabies vaccine produced in cell culture: Production and control and clinical results. In: Kurstak E., editor. Applied Virology. Academic Press; Gainesville, FL, USA: 1984. pp. 241–296.

60.     Fournier P., Montagnon B., Vincent-Falquet J.C., Ajjan N., Drucker J., Roumiantzeff M. A new vaccine produced from rabies virus cultivated on Vero cells. In: Vodopija I., Nicholson K.G., Smerdel S., Bijok U., editors. Improvements in Rabies Post-Exposure Treatment. Institute of Public Health; Zagreb, Croatia: 1985. pp. 129–136.

61.     Rourou S., Ben Ayed Y., Trabelsi K., Majoul S., Kallel H. An animal component free medium that promotes the growth of various animal cell lines for the production of viral vaccines. Vaccine. 2014;32:2767–2769.

62.     Li R., Huang L., Li J., Mo Z., He B., Wang Y., Wu X., Minutello M., Guinet-Morlot F., Pichon S. A next-generation, serum-free, highly purified Vero cell rabies vaccine is safe and as immunogenic as the reference vaccine Verorab^® when administered according to a post-exposure regimen in healthy children and adults in China. Vaccine. 2013;31:5940–5947.

63.     Fenje P., Pinteric L. Potentiation of tissue culture rabies vaccine by adjuvants. Am. J. Public Health Nations Health. 1966;56:2106–2113.

64.     Yang D.K., Kim H.H., Lee K.W., Song J.Y. The present and future of rabies vaccine in animals. Clin. Exp. Vaccine Res. 2013;2:19–25.

65.     Roumiantzeff M. The present status of rabies vaccine development and clinical experience with rabies vaccine. Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 1988;19:549–561.

66.     Astray R.M., Jorge S.A., Pereira C.A. Rabies vaccine development by expression of recombinant viral glycoprotein. Arch. Virol. 2017;162:323–332.

67.     Gupta R.K., Siber G.R. Adjuvants for human vaccines--current status, problems and future prospects. Vaccine. 1995;13:1263–1276.

68.     Chavali S.R., Barton L.D., Campbell J.B. Immunopotentiation by orally-administered Quillajasaponins: Effects in mice vaccinated intraperitoneally against rabies. Clin. Exp. Immunol. 1988;74:339–343.

69.     Oleszycka E., McCluskey S., Sharp F.A., Muñoz-Wolf N., Hams E., Gorman A.L., Fallon P.G., Lavelle E.C. The vaccine adjuvant alum promotes IL-10 production that suppresses Th1 responses. Eur. J. Immunol. 2018;48:705–715.

70.     Zhang W., Zheng X., Cheng N., Gai W., Xue X., Wang Y., Gao Y., Shan J., Yang S., Xia X. Isatisindigotica root polysaccharides as adjuvants for an inactivated rabies virus vaccine. Int. J. Biol. Macromol. 2016;87:7–15.

71.     Shi W., Kou Y., Xiao J., Zhang L., Gao F., Kong W., Su W., Jiang C., Zhang Y. Comparison of immunogenicity, efficacy and transcriptome changes of inactivated rabies virus vaccine with different adjuvants. Vaccine. 2018;36:5020–5029.

72.     Yu P., Yan J., Wu W., Tao X., Lu X., Liu S., Zhu W. A CpG oligo deoxynucleotide enhances the immune response to rabies vaccination in mice. Virol. J. 2018;15:174.

73.     Chen C., Zhang C., Li R., Wang Z., Yuan Y., Li H., Fu Z., Zhou M., Zhao L. Monophosphoryl-Lipid A (MPLA) is an Efficacious Adjuvant for Inactivated Rabies Vaccines. Viruses. 2019;11:1118.

74.     Paris S., Chapat L., Martin-Cagnon N., Durand P.Y., Piney L., Cariou C., Bergamo P., Bonnet J.M., Poulet H., Freyburger L., et al. β-Glucan as Trained Immunity-Based Adjuvants for Rabies Vaccines in Dogs. Front. Immunol. 2020;11:564497.

75.     Shebl R.I., Amer M.E., Abuamara T.M.M., Matar E.R., Ahmed H.F., Gomah T.A., El Moselhy L.E., Abu-Elghait M., Mohamed A.F. Staphylococcus aureus derived hyaluronic acid and bacillus Calmette-Guérin purified proteins as immune enhancers to rabies vaccine and related immuno-histopathological alterations. Clin. Exp. Vaccine Res. 2021;10:229–239.

76.     Luo J., Zhang B., Wu Y., Guo X. Amino Acid Mutation in Position 349 of Glycoprotein Affect the Pathogenicity of Rabies Virus. Front. Microbiol. 2020;11:481.

77.     Yang D.K., Kim H.H., Choi S.S., Kim J.T., Lee K.B., Lee S.H., Cho I.S. Safety and immunogenicity of recombinant rabies virus (ERAGS) in mice and raccoon dogs. Clin. Exp. Vaccine Res. 2016;5:159–168.

78.     Liu X., Yang Y., Sun Z., Chen J., Ai J., Dun C., Fu Z.F., Niu X., Guo X. A Recombinant Rabies Virus Encoding Two Copies of the Glycoprotein Gene Confers Protection in Dogs against a Virulent Challenge. PLoS ONE. 2014;9:e87105.

79.     Xue X.H., Zheng X.X., Wang H.L., Ma J.Z., Li L., Gai W.W., Wang T.C., Yang S.T., Xia X.Z. An inactivated recombinant rabies CVS-11 virus expressing two copies of the glycoprotein elicits a higher level of neutralizing antibodies and provides better protection in mice. Virus Genes. 2014;48:411–420.

80.     Faber M., Li J., Kean R.B., Hooper D.C., Alugupalli K.R., Dietzschold B. Effective preexposure and postexposure prophylaxis of rabies with a highly attenuated recombinant rabies virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009;106:11300–11305.

81.     Tao L., Ge J., Wang X., Wen Z., Zhai H., Hua T., Zhao B., Kong D., Yang C., Bu Z. Generation of a recombinant rabies Flury LEP virus carrying an additional G gene creates an improved seed virus for inactivated vaccine production. Virol. J. 2011;8:454.

82.     Faber M., Pulmanausahakul R., Hodawadekar S.S., Spitsin S., McGettigan J.P., Schnell M.J., Dietzschold B. Overexpression of the rabies virus glycoprotein results in enhancement of apoptosis and antiviral immune response. J. Virol. 2002;76:3374–3381.

83.     Qin F., Xia F., Chen H., Cui B., Feng Y., Zhang P., Chen J., Luo M. A Guide to Nucleic Acid Vaccines in the Prevention and Treatment of Infectious Diseases and Cancers: From Basic Principles to Current Applications. Front. Cell Dev. Biol. 2021;9:633776.

84.     Ullas P., Desai A., Madhusudana S. Rabies DNA Vaccines: Current Status and Future. World J. Vaccines. 2012;2:36–45.

85.     Xiang Z.Q., Spitalnik S., Tran M., Wunner W.H., Cheng J., Ertl H.C. Vaccination with a plasmid vector carrying the rabies virus glycoprotein gene induces protective immunity against rabies virus. Virology. 1994;199:132–140.

86.     Margalith M., Vilalta A. Sustained protective rabies neutralizing antibody titers after administration of cationic lipid-formulated pDNA vaccine. Genet. Vaccines Ther. 2006;4:2.

87.     Kaur M., Rai A., Bhatnagar R. Rabies DNA vaccine: No impact of MHC class I and class II targeting sequences on immune response and protection against lethal challenge. Vaccine. 2009;27:2128–2137.

88.     Sardesai N.Y., Weiner D.B. Electroporation delivery of DNA vaccines: Prospects for success. Curr. Opin. Immunol. 2011;23:421–429.

89.     Williams J.A., Carnes A.E., Hodgson C.P. Plasmid DNA vaccine vector design: Impact on efficacy, safety and upstream production. Biotechnol. Adv. 2009;27:353–370.

90.     Faurez F., Dory D., Le Moigne V., Gravier R., Jestin A. Biosafety of DNA vaccines: New generation of DNA vectors and current knowledge on the fate of plasmids after injection. Vaccine. 2010;28:3888–3895.

91.     Ulmer J.B., Mason P.W., Geall A., Mandl C.W. RNA-based vaccines. Vaccine. 2012;30:4414–4418.

92.     Deering R.P., Kommareddy S., Ulmer J.B., Brito L.A., Geall A.J. Nucleic acid vaccines: Prospects for non-viral delivery of mRNA vaccines. Expert Opin. Drug Deliv. 2014;11:885–899.

93.     Schnee M., Vogel A.B., Voss D., Petsch B., Baumhof P., Kramps T., Stitz L. An mRNA vaccine encoding rabies virus glycoprotein induces protection against lethal infection in mice and correlates of protection in adult and newborn pigs. PLoS Negl. Trop. Dis. 2016;10:e0004746.

94.     Tan M., Jiang X. Recent advancements in combination subunit vaccine development. Hum. Vaccines Immunother. 2017;13:180–185.

95.     Klepfer S.R., Debouck C., Uffelman J., Jacobs P., Bollen A., Jones E.V. Characterization of rabies glycoprotein expressed in yeast. Arch. Virol. 1993;128:269–286.

96.     Fu Z.F., Rupprecht C.E., Dietzschold B., Saikumar P., Niu H.S., Babka I., Wunner W.H., Koprowski H. Oral vaccination of racoons (Procyon lotor) with baculovirus-expressed rabies virus glycoprotein. Vaccine. 1993;11:925–928.

97.     Loza-Rubio E., Rojas E., Gomez L., Olivera M.T., Gomez-Lim M.A. Development of an edible rabies vaccine in maize using the vnukovo strain. Dev. Biol. 2008;131:477–482.

98.     Park Y., Kang H., Min K., Kim N.H., Park M., Ouh I.O., Kim H.H., Song J.Y., Yang D.K., Sohn E.J., et al. Rabies virus glycoprotein produced in Nicotiana benthamiana is an immunogenic antigen in mice. Czech J. Genet. Plant Breed. 2021;57:26–35.

99.     Niederhäuser S., Bruegger D., Zahno M.L., Vogt H.R., Peterhans E., Zanoni R., Bertoni G. A synthetic peptide encompassing the G5 antigenic region of the rabies virus induces high avidity but poorly neutralizing antibody in immunized animals. Vaccine. 2008;26:6749–6753.

100.   Houimel M., Dellagi K. Peptide mimotopes of rabies virus glycoprotein with immunogenic activity. Vaccine. 2009;27:4648–4655.

101.   Cid R., Bolívar J. Platforms for Production of Protein-Based Vaccines: From Classical to Next-Generation Strategies. Biomolecules. 2021;11:1072.

102.   Liu C., Li J., Yao Q., Gao Z., Cheng Y., Zhou M., Tang Y., Sun L., Dai J., Cao G., et al. AAV-expressed G protein induces robust humoral and cellular immune response and provides durable protection from rabies virus challenges in mice. Vet. Microbiol. 2020;242:108578.

103.   Zhang C., Zhou D. Adenoviral vector-based strategies against infectious disease and cancer. Hum. Vaccines Immunother. 2016;12:2064–2074.

104.   Guo J., Mondal M., Zhou D. Development of novel vaccine vectors: Chimpanzee adenoviral vectors. Hum. Vaccines Immunother. 2018;14:1679–1685.

105.   Zhang C., Chi Y., Zhou D. Development of novel vaccines against infectious diseases based on Chimpanzee adenoviral vector. Methods Mol. Biol. (Clifton N. J.). 2017;1581:3–13.

106.   Napolitano F., Merone R., Abbate A., Ammendola V., Horncastle E., Lanzaro F., Esposito M., Contino A.M., Sbrocchi R., Sommella A., et al. A next generation vaccine against human rabies based on a single dose of a chimpanzee adenovirus vector serotype C. PLoS Negl. Trop. Dis. 2020;14:e0008459.

107.   Li J., Faber M., Papaneri A., Faber M.L., McGettigan J.P., Schnell M.J., Dietzschold B. A single immunization with a recombinant canine adenovirus expressing the rabies virus G protein confers protective immunity against rabies in mice. Virology. 2006;356:147–154.

108.   Zhang S., Liu Y., Fooks A.R., Zhang F., Hu R. Oral vaccination of dogs (Canis familiaris) with baits containing the recombinant rabies-canine adenovirus type-2 vaccine confers long-lasting immunity against rabies. Vaccine. 2008;26:345–350.

109.   Martins M., Joshi L.R., Rodrigues F.S., Anziliero D., Frandoloso R., Kutish G.F., Rock D.L., Weiblen R., Flores E.F., Diel D.G. Immunogenicity of ORFV-based vectors expressing the rabies virus glycoprotein in livestock species. Virology. 2017;511:229–239.

110.   Park J.E., Shin H.J. Immunogenicity of replication-deficient vesicular stomatitis virus based rabies vaccine in mice. Vet. Q. 2021;41:202–209.

111.   Liang M., Wang Z., Wu C., Xiong S., Zhao L., Dong C. A single dose of recombinant VSV-RABV_G vaccine provides full protection against RABV challenge. Virol. Sin. 2022;37:455–458.

112.   Stading B.R., Osorio J.E., Velasco-Villa A., Smotherman M., Kingstad-Bakke B., Rocke T.E. Infectivity of attenuated poxvirus vaccine vectors and immunogenicity of a raccoonpox vectored rabies vaccine in the Brazilian Free-tailed bat (Tadaridabrasiliensis) Vaccine. 2016;34:5352–5358.

113.   Giel-Moloney M., Rumyantsev A.A., David F., Figueiredo M., Feilmeier B., Mebatsion T., Parrington M., Kleanthous H., Pugachev K.V. A novel approach to a rabies vaccine based on a recombinant single-cycle flavivirus vector. Vaccine. 2017;35:6898–6904.

114.   Debnath A., Pathak D.C., D’silva A.L., Batheja R., Ramamurthy N., Vakharia V.N., Chellappa M.M., Dey S. Newcastle disease virus vectored rabies vaccine induces strong humoral and cell mediated immune responses in mice. Vet. Microbiol. 2020;251:108890.

115.   Zhao C., Gao J., Wang Y., Ji L., Qin H., Hu W., Yang Y. A novel rabies vaccine based on a recombinant bovine herpes virus type 1 expressing rabies virus glycoprotein. Front. Microbiol. 2022;13:931043.

116.   Freuling C.M., Hampson K., Selhorst T., Schröder R., Meslin F.X., Mettenleiter T.C., Müller T. The elimination of fox rabies from Europe: Determinants of success and lessons for the future. Philos. Trans. R. Soc. B Biol. Sci. 2013;368:20120142.

117.   Steck F., Wandeler A., Bichsel P., Capt S., Schneider L. Oral Immunisation of Foxes against Rabies: A Field Study. J. Vet. 1982;29:372–396.

118.   Müller T., Freuling C.M. Rabies and Rabies Vaccines. Springer International Publishing; Berlin/Heidelberg, Germany: 2020. Rabies Vaccines for Wildlife; pp. 45–70.

119.   Müller T.F., Schröder R., Wysocki P., Mettenleiter T.C., Freuling C.M. Spatio-temporal Use of Oral Rabies Vaccines in Fox Rabies Elimination Programmes in Europe. PLoS Negl. Trop. Dis. 2015;9:e0003953.

120.   Lafay F., Benejean J., Tuffereau C., Flamand A., Coulon P. Vaccination against rabies: Construction and characterization of SAG2, a double avirulent derivative of SAD Bern. Vaccine. 1994;12:317–320.

121.   Masson E., Cliquet F., Aubert M.F.A., Barrat J., Aubert A., Artois M., Schumacher C.L. Safety study of the SAG2 rabies virus mutant in several non-target species with a view to its future use for the immunization of foxes in Europe. Vaccine. 1996;14:1506–1510.

122.   Wallace R.M., Cliquet F., Fehlner-Gardiner C., Fooks A.R., Sabeta C.T., Setién A.A., Tu C., Vuta V., Yakobson B., Yang D.K., et al. Role of Oral Rabies Vaccines in the Elimination of Dog-Mediated Human Rabies Deaths. Emerg. Infect. Dis. 2020;26:e201266.

123.   Kamp V.T., Friedrichs V., Freuling C., Vos A., Potratz M., Klein A., Zaeck L., Eggerbauer E., Schuster P., Kaiser C., et al. Comparable long-term rabies immunity in foxes after intramuscular and oral application using a third-generation oral rabies virus vaccine. Vaccines. 2021;9:49.

124.   Pfaff F., Müller T., Freuling C.M., Fehlner-Gardiner C., Nadin-Davis S., Robardet E., Cliquet F., Vuta V., Hostnik P., Mettenleiter T.C., et al. In-depth genome analyses of viruses from vaccine-derived rabies cases and corresponding live-attenuated oral rabies vaccines. Vaccine. 2019;37:4758–4765.

125.   Artois M., Guittré C., Thomas I., Leblois H., Brochier B., Barrat J. Potential pathogenicity for rodents of vaccines intended for oral vaccination against rabies: A comparison. Vaccine. 1992;10:524–528.

126.   Chanachai K., Wongphruksasoong V., Vos A., Leelahapongsathon K., Tangwangvivat R., Sagarasaeranee O., Lekcharoen P., Trinuson P., Kasemsuwan S. Feasibility and Effectiveness Studies with Oral Vaccination of Free-Roaming Dogs against Rabies in Thailand. Viruses. 2021;13:571.

127.   Smith T.G., Millien M., Vos A., Fracciterne F.A., Crowdis K., Chirodea C., Medley A., Chipman R., Qin Y., Blanton J., et al. Evaluation of immune responses in dogs to oral rabies vaccine under field conditions. Vaccine. 2019;37:4743–4749.

128.   Molini U., Hassel R., Ortmann S., Vos A., Loschke M., Shilongo A., Freuling C.M., Müller T. Immunogenicity of the Oral Rabies Vaccine Strain SPBN GASGAS in Dogs Under Field Settings in Namibia. Front. Vet. Sci. 2021;8:1224.

129.   Gibson A.D., Yale G., Vos A., Corfmat J., Airikkala-Otter I., King A., Wallace R.M., Gamble L., Handel I.G., Mellanby R.J., et al. Oral bait handout as a method to access roaming dogs for rabies vaccination in Goa, India: A proof of principle study. Vaccine X. 2019;1:100015.

130.   Ertl H.C.J. Novel vaccines to human rabies. PLoS Negl. Trop. Dis. 2009;3:e515.

131.   Fooks A.R., Banyard A.C., Ertl H.C.J. New human rabies vaccines in the pipeline. Vaccine. 2019;37:A140–A145.

132.   Weyer J., Rupprecht C.E., Nel L.H. Poxvirus-vectored vaccines for rabies—A review. Vaccine. 2009;27:7198–7201.

133.   Knowles M.K., Nadin-Davis S.A., Sheen M., Rosatte R., Mueller R., Beresford A. Safety studies on an adenovirus recombinant vaccine for rabies (AdRG1.3-ONRAB) in target and non-target species. Vaccine. 2009;27:6619–6626.

134.   Tims T., Briggs D.J., Davis R.D., Moore S.M., Xiang Z., Ertl H.C., Fu Z.F. Adult dogs receiving a rabies booster dose with a recombinant adenovirus expressing rabies virus glycoprotein develop high titers of neutralizing antibodies. Vaccine. 2000;18:2804–2807.

135.   Xiang Z., Gao G., Reyes-Sandoval A., Cohen C.J., Li Y., Bergelson J.M., Wilson J.M., Ertl H.C. Novel, chimpanzee serotype 68-based adenoviral vaccine carrier for induction of antibodies to a transgene product. J. Virol. 2002;76:2667–2675.

136.   Xiang Z.Q., Gao G.P., Reyes-Sandoval A., Li Y., Wilson J.M., Ertl H.C. Oral vaccination of mice with adenoviral vectors is not impaired by preexisting immunity to the vaccine carrier. J. Virol. 2003;77:10780–10789.

137.   Wang X., Fang Z., Xiong J., Yang K., Chi Y., Tang X., Ma L., Zhang R., Deng F., Lan K., et al. A chimpanzee adenoviral vector-based rabies vaccine protects beagle dogs from lethal rabies virus challenge. Virology. 2019;536:32–38.

138.   Roess A.A., Rea N., Lederman E., Dato V., Chipman R., Slate D., Reynolds M., Damon I.K., Rupprecht C.E. National surveillance for human and pet contact with oral rabies vaccine baits, 2001–2009. J. Am. Vet. Med. 2012;240:163–168.

139.   Ura T., Okuda K., Shimada M. Developments in Viral Vector-Based Vaccines. Vaccines. 2014;2:624–641.

140.   Ito N., Okamoto T., Sasaki M., Miyamoto S., Takahashi T., Izumi F., Inukai M., Jarusombuti S., Okada K., Nakagawa K., et al. Safety enhancement of a genetically modified live rabies vaccine strain by introducing an attenuating Leu residue at position 333 in the glycoprotein. Vaccine. 2021;39:3777–3784.

141.   Li C., Wang Y., Liu H., Zhang X., Baolige D., Zhao S., Hu W., Yang Y. Change in the single amino acid site 83 in rabies virus glycoprotein enhances the BBB permeability and reduces viral pathogenicity. Front. Cell Dev. Biol. 2021;8:632957.

142.   Luo J., Zhang B., Lyu Z., Wu Y., Zhang Y., Guo X. Single amino acid change at position 255 in rabies virus glycoprotein decreases viral pathogenicity. FASEB J. 2020;34:9650–9663.

143.   Shi L., Zou J., Li Y., Yu Y. Study on an attenuated rabies virus strain CTN181-3. Biologicals. 2022;78:10–16.

144.   Olayan E., El-Khadragy M., Mohamed A.F., Mohamed A.K., Shebl R.I., Yehia H.M. Evaluation of Different Stabilizers and Inactivating Compounds for the Enhancement of Vero Cell Rabies Vaccine Stability and Immunogenicity: In Vitro Study. Biomed. Res. Int. 2019;2019:4518163.

145.   Byrne J., Knobel D., Moore S.M., Gatrell S., Butaye P. The Influence of β-1,3-1,6-Glucans on Rabies Vaccination Titers in Cats. Vet. Sci. 2020;7:118. doi: 10.3390/vetsci7030118.

146.   Wang Z., Yuan Y., Chen C., Zhang C., Huang F., Zhou M., Chen H., Fu Z.F., Zhao L. Colloidal Manganese Salt Improves the Efficacy of Rabies Vaccines in Mice, Cats, and Dogs. J. Virol. 2021;95:e0141421.

147.   Plummer J.R., McGettigan J.P. Incorporating B cell activating factor (BAFF) into the membrane of rabies virus (RABV) particles improves the speed and magnitude of vaccine-induced antibody responses. PLoS Negl. Trop. Dis. 2019;13:e0007800.

148.   Zhao J., Zhang Y., Chen Y., Zhang J., Pei J., Cui M., Fu Z.F., Zhao L., Zhou M. A novel oral rabies vaccine enhances the immunogenicity through increasing dendritic cells activation and germinal center formation by expressing U-OMP19 in a mouse model. Emerg. Microbes Infect. 2021;10:913–928.

149.   Stokes A., Pion J., Binazon O., Laffont B., Bigras M., Dubois G., Blouin K., Young J.K., Ringenberg M.A., Ben Abdeljelil N., et al. Nonclinical safety assessment of repeated administration and biodistribution of a novel rabies self-amplifying mRNA vaccine in rats. Regul. Toxicol. Pharmacol. 2020;113:104648.

150.   Starodubova E.S., Kuzmenko Y.V., Pankova E.O., Latanova A.A., Preobrazhenskaya O.V., Karpov V.L. Rabies Virus Glycoprotein with a Consensus Amino Acid Sequence and a Lysosome Targeting Signal Causes Effective Production of Antibodies in DNA-Immunized Mice. Mol. Biol. (Mosk) 2018;52:314–317.

151.   Galvez-Romero G., Salas-Rojas M., Pompa-Mera E.N., Chávez-Rueda K., Aguilar-Setién Á. Addition of C3d-P28 adjuvant to a rabies DNA vaccine encoding the G5 linear epitope enhances the humoral immune response and confers protection. Vaccine. 2018;36:292–298.

152.   Wang J., Jiang H., Yang R., Zhang S., Zhao W., Hu J., Jiang Y., Yang W., Huang H., Shi C., et al. Construction and evaluation of recombinant Lactobacillus plantarum NC8 delivering one single or two copies of G protein fused with a DC-targeting peptide (DCpep) as novel oral rabies vaccine. Vet. Microbiol. 2020;251:108906.

153.   Shipley R., Wright E., Lean F.Z.X., Selden D., Horton D.L., Fooks A.R., Banyard A.C. Assessing Rabies Vaccine Protection against a Novel Lyssavirus, Kotalahti Bat Lyssavirus. Viruses. 2021;13:947.

154.   Napolitano F., Merone R., Abbate A., Ammendola V., Horncastle E., Lanzaro F., Esposito M., Contino A.M., Sbrocchi R., Sommella A., et al. Correction: A next generation vaccine against human rabies based on a single dose of a chimpanzee adenovirus vector serotype C. PLoS Negl. Trop. Dis. 2021;15:e0009348.

155.   Sharma A.K., Bharti O.K., Prakash V.C., Lakshman D., Isloor S., Panda A.K., Sharma J. Survival of 21 Dogs after Post-exposure Prophylaxis using Intra-dermal Rabies Vaccine in the Pre-scapular Region and Emergency Use of Expired Equine Rabies Immunoglobulin for Local Wound Infiltration in Victims of Rabid Dog Bite using One Health Approach. Epidemiol. Int. 2022;7:12–18.

156.   Namratha. Master’s Thesis. Karnataka Veterinary, Animal and Fisheries Sciences University; Bidar, India: 2021. Studies on Immunogenicity and Duration of Immunity of Rabies Vaccine Administered by Different Route.

157.   Swathi G. Master’s Thesis. Karnataka Veterinary, Animal and Fisheries Sciences University; Bidar, India: 2022. Comparative Evaluation of Intradermal vis-a-vis Intramuscular Pre-Exposure Prophylactic Vaccination against Rabies in Cattle.

158.   Vescovo P., Rettby N., Ramaniraka N., Liberman J., Hart K., Cachemaille A., Piveteau L.D., Zanoni R., Bart P.A., Pantaleo G. Safety, tolerability and efficacy of intradermal rabies immunization with DebioJect™ Vaccine. 2017;35:1782–1788.

159.   World Health Organization Rabies vaccines: WHO position paper, April 2018–Recommendations. Vaccine. 2018;36:5500–5503.

160.   Camelo S., Lafage M., Lafon M. Absence of the p55 Kd TNF-alpha receptor promotes survival in rabies virus acute encephalitis. J. Neurovirol. 2000;6:507–518.

161.   Jackson A.C., Rossiter J.P., Lafon M. Expression of Toll-like receptor 3 in the human cerebellar cortex in rabies, herpes simplex encephalitis, and other neurological diseases. J. Neurovirol. 2006;12:229–234.

162.   Jochmans D., Neyts J. The path towards effective antivirals against rabies. Vaccine. 2019;37:4660–4662.

163.   Taherizadeh M., Rouzbeh Bashar R., Golahdouz M., Pourhossein B., Fazeli M. Rabies wonderful Strategies to Escape the Immune System. Dairy Vet. Sci. J. 2019;11:555801.

164.   Lodmell D.L., Ewalt L.C. Post-exposure DNA vaccination protects mice against rabies virus. Vaccine. 2001;19:2468–2473.

165.   Lafon M. Immunology. In: Jackson A.C., Wunner W.H., editors. Rabies. 2nd ed. Elsevier Academic Press; London, UK: 2007. pp. 489–504.

166.   World Health Organisation Position paper on rabies vaccines. Wkly. Epidemiol. Rec. 2018;93:201–220.

167.   Kaur M., Garg R., Singh S., Bhatnagar R. Rabies vaccines: Where do we stand, where are we heading? Expert Rev. Vaccines. 2015;14:369–381.

168.   Shantavasinkul P., Wilde H. Postexposure Prophylaxis for Rabies in Resource-Limited/Poor Countries. Adv. Virus Res. 2011;79:291–307.

169.   Huang C.T., Li Z., Huang Y., Zhang G., Zhou M., Chai Q., Wu H., Fu Z.F. Enhancement of blood-brain barrier permeability is required for intravenously administered virus neutralizing antibodies to clear an established rabies virus infection from the brain and prevent the development of rabies in mice. Antivir. Res. 2014;110:132–141.

170.   Brandao P.E., Castilho J.G., Fahl W., Carnieli P., Jr., Oliveira Rde N., Macedo C.I., Carrieri M.L., Kotait I. Short-interfering rnas as antivirals against rabies. Braz. J. Infect. Dis. 2007;11:224–225.

171.   Wu H.X., Wang H.L., Guo X.F., Yang Y.J., Ma J.Z., Wang T.C., Gao Y.W., Zhao Y.K., Yang S.T., Xia X.Z. Adeno-associated viruses serotype 2-mediated rna interference efficiently inhibits rabies virus replication in vitro and in vivo. J. Vet. Med. Sci. 2013;75:1355–1361.

172.   Scott T.P., Nel L.H. Rabies Prophylactic and Treatment Options: An in vitro study of siRNA- and aptamer-based therapeutics. Viruses. 2021;13:881.

 

SUMBER:

Krithiga Natesan, Shrikrishna Isloor, Balamurugan Vinayagamurthy, Sharada Ramakrishnaiah, Rathnamma Doddamane, and Anthiny R. Fooks. 2023. Developments in Rabies Vaccines: The Path Traversed from Pasteur to the Modern Era of Immunization. Vaccines (Basel). 2023 Apr; 11(4);756